劉巍 劉文 宋信莉 王冠華 汪云霞 李云凱

中圖分類號 R944.4;R927.11 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）14-1690-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.14.05

摘 要 目的：制備燈盞花素胃黏附片，并進行處方優(yōu)化和質(zhì)量評價。方法：以羥丙甲纖維素K100M、卡波姆934P為生物黏附劑和骨架材料，以乳糖為填充劑，以硬脂酸鎂為助流劑、潤滑劑，采用粉末直接壓片法制備燈盞花素胃黏附片。采用加權(quán)法對燈盞花素胃黏附片在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中第2、6、12 h的累積釋放度（Q2 h、Q6 h、Q12 h，以燈盞乙素計，由高效液相色譜法測定）評分和體外胃組織黏附力進行綜合評分;以此評分為指標，通過L9（34）正交試驗設(shè)計優(yōu)化燈盞花素胃黏附片中羥丙甲纖維素K100M、卡波姆934P及乳糖的用量并進行驗證。對所制胃黏附片的性質(zhì)、鑒別、重量差異、脆碎度、釋放度、燈盞乙素含量進行考察。結(jié)果：燈盞花素胃黏附片的最優(yōu)處方為42%燈盞花素提取物、10%羥丙甲纖維素K100M、3%卡波姆934P和45%乳糖;驗證試驗結(jié)果顯示，所制3批燈盞花素胃黏附片的平均Q2 h、Q6 h、Q12 h分別為20.36%、48.55%、87.00%，平均體外胃組織黏附力為31.36 g/cm2，平均綜合評分為70.23（RSD=1.84%，n=3）。所制胃黏附片為淡黃色，味淡或微咸;其出峰時間與燈盞乙素對照品一致;重量差異為±6%，脆碎度為0.54%，Q12 h為83.51%（RSD=2.14%，n=6）;燈盞乙素含量為288.47 mg/g（RSD=0.70%，n=3）。結(jié)論：成功制得燈盞花素胃黏附片，其質(zhì)量評價符合2015年版《中國藥典》要求。

關(guān)鍵詞 燈盞花素;胃黏附片;處方優(yōu)化;質(zhì)量評價

Preparation and Quality Evaluation of Breviscapine Gastric Adhesive Tablets

LIU Wei1，LIU Wen2，SONG Xinli1，WANG Guanhua1，WANG Yunxia1，LI Yunkai1（1. School of Pharmacy， Guizhou University of TCM， Guiyang 550002， China; 2. Party Office， the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To prepare Breviscapine gastric adhesive tablets， to optimize the formulation and to evaluate the quality. METHODS： HPMC K100M and carbomer 934P were used as bioadhesives and skeleton materials， and lactose was used as filler， and magnesium stearate was used as glidant and lubricant to prepare Breviscapine gastric adhesive tablets by direct powder pressing method. The comprehensive scores of scores of accumulative release rate of Breviscapine gastric adhesive tablets in pH 6.8 PBS at 2， 6， 12 h （Q2 h， Q6 h， Q12 h，with scutellarin meter，by HPLC method） and in vitro adhesion force of gastric tissue were evaluated by weighting method. Taking this scores as indexes， L9（34） orthogonal test design was used to optimize the amount of HPMC K100M， carbomer 934P and lactose in Breviscapine gastric adhesive tablets and validation tests were conducted. The properties， identification， weight difference， fragility， release and the content of scutellarin of the gastric adhesive tablets were determined. RESULTS： The optimal prescription of Breviscapine gastric adhesive tablets were 42% breviscapine， 10% HPMC K100M， 3% carbomer 934P and 45% lactose. The verification test results show that the Q2 h， Q6 h， Q12 h of 3 batches of Breviscapine gastric adhesive tablets were 20.36%， 48.55%， and 87.00% ; the average in vitro adhesion force of gastric tissue was 31.36 g/cm2;the average comprehensive score was 70.23 （RSD=1.84%， n=3）. The gastric adhesive tablets were light yellow， tasteless or slightly salty; the peak time was consistent with that of scutellarin control; its weight difference were ±6%， the fragility was 0.54%， and the Q12 h was 83.51% （RSD=2.14%， n=6）. The content of scutellarin was 288.47 mg/g（RSD=0.70%，n=3）. CONCLUSIONS： Breviscapine gastric adhesive tablets is prepared successfully， and its quality evaluation conforms to the requirements of Chinese Pharmacopoeia （2015 edition）.

KEYWORDS? ?Breviscapine; Gastric adhesive tablets; Formulation optimization; Quality evaluation

燈盞花素（Breviscapine）是從菊科植物短葶飛蓬[Erigeron breviscapus （Vant.） Hand.-Mazz.]中提取出來的黃酮類有效成分，是以燈盞乙素為主、另含有少量燈盞甲素的混合物[1]。現(xiàn)代藥理研究表明，燈盞花素具有改善血流量、抗血小板凝聚、抗氧自由基、抗血栓等作用[2]，臨床上主要用于冠心病、腦血栓、腦出血和心絞痛等心腦血管疾病的治療[3]。但燈盞花素是弱酸性成分，在結(jié)腸、盲腸環(huán)境中不穩(wěn)定，易被腸道酶酶解為苷元[4]，限制了其臨床應(yīng)用。有研究顯示，當胃內(nèi)pH較低時，燈盞花素的油水分配系數(shù)相對較大，脂溶性較好，跨膜吸收比較容易，所以延長其在胃內(nèi)的滯留時間可有助于提高燈盞花素的治療效果[4]。

胃腸道生物黏附給藥系統(tǒng)（Gastrointestinal bioadhesive drug delivery system）是指通過使用黏附材料，使制劑黏附于胃上皮細胞表面，延長藥物在胃內(nèi)的滯留時間，促進其吸收并提高生物利用度的給藥系統(tǒng)[5]。根據(jù)心腦血管疾病需要長期服藥的特點以及患者用藥的方便性，口服給藥是最佳的給藥方式[6];再則，已有研究報道指出，燈盞花素的半衰期短，吸收機制是被動擴散，吸收過程屬一級動力學過程，表明燈盞花素可被制成口服緩釋制劑[7-8]?；谏鲜鲆蛩?，筆者考慮將燈盞花素制成胃黏附片，采用正交試驗設(shè)計對其處方進行優(yōu)化，并對所得胃黏附片質(zhì)量進行評價，旨在通過延長燈盞花素在胃內(nèi)的滯留時間，以達到提高藥物累積釋放度、促進藥物吸收的目的，旨在為燈盞花素新制劑的開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜（HPLC）儀（日本Shimadzu公司）;SK8210HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）;DZF-6210型真空干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）;RC-3型溶出測試儀（天津市國銘醫(yī)藥設(shè)備有限公司）;TDP-5型單沖壓片機（長沙岳麓區(qū)中南制藥機械廠）;黏附力測定裝置（貴州中醫(yī)藥大學藥學院自制）。

1.2 藥品與試劑

燈盞乙素對照品（成都克洛瑪生物科技有限公司，批號：CHB160922，純度：≥98%）;燈盞花素提取物（陜西柏科生物科技有限公司，批號：190301，純度：以燈盞乙素計不低于95%）;卡波姆934P、羥丙甲纖維素K100M、乳糖、硬脂酸鎂（上海源葉生物科技有限公司，批號：s24447、s14176、s25132、s24259）;甲醇、磷酸（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20190303、20190806，色譜純）;磷酸二氫鉀、氫氧化鈉（重慶川東化工有限公司，批號：20140901、20170501）;其余試劑均為分析純，水為純凈水。

1.3 動物

健康新西蘭大白兔1只，雄性，體質(zhì)量2.5 kg，由貴州醫(yī)科大學實驗動物中心提供，動物使用許可證號：SYXK（黔）2018-0001。動物于清潔、通風、采光好的環(huán)境下飼養(yǎng)，并自由飲食飲水。

2 方法與結(jié)果

2.1 燈盞花素胃黏附片的制備

以羥丙甲纖維素K100M、卡波姆934P為生物黏附劑和骨架材料，以乳糖為填充劑，以硬脂酸鎂為助流劑、潤滑劑制備燈盞花素胃黏附片。分別稱取處方比例的燈盞花素提取物、羥丙甲纖維素K100M、卡波姆934P、乳糖，按等量遞加法混勻，加入1%硬脂酸鎂混合均勻后過80目篩，采用粉末直接壓片法以單沖壓片機壓片，每片重50 mg。

2.2 燈盞乙素的含量測定

采用HPLC法測定。

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取燈盞乙素對照品適量，加入甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度為0.96 mg/mL的對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取燈盞花素胃黏附片10片，研細，精密稱取50 mg，置于10 mL量瓶中，加入pH 6.8的磷酸鹽緩沖液，超聲（功率：500 W，頻率：53 kHz）處理30 min，放冷，并用磷酸鹽緩沖液定容，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，即得。

2.2.3 空白對照溶液的制備 按燈盞花素胃黏附片處方比例精密稱取除燈盞花素外的其余輔料21 mg于10 mL量瓶中，按“2.2.2”項下方法制備空白對照溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（45 ∶ 55，V/V）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：335 nm;柱溫：35 ℃;進樣量：10 μL。

2.2.5 專屬性試驗 取對照品溶液（用甲醇稀釋成57.6? μg/mL）、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按“2.2.4”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，燈盞乙素的保留時間約為7.0 min，色譜峰峰形對稱，溶劑與輔料對其測定無干擾，表明方法專屬性較好，詳見圖1。

2.2.6 標準曲線繪制 精密量取燈盞乙素對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，混勻，得不同質(zhì)量濃度的系列線性工作溶液，按“2.2.4”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積。以燈盞乙素質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為y=25 950x+6 405.5（R 2=0.999 8），結(jié)果表明，燈盞乙素檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為4.80～76.80 μg/mL。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取燈盞乙素對照品溶液適量，用甲醇稀釋至57.6 μg/mL，按“2.2.4”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，燈盞乙素峰面積的RSD為1.19%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗 取燈盞花素胃黏附片適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.4”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積并按標準曲線法計算燈盞乙素的含量。結(jié)果，燈盞乙素含量的RSD為1.59%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量（燈盞乙素含量為287.42 mg/g）的燈盞花素胃黏附片粉末0.1 g，共6份，分別精密加入等量燈盞乙素對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.4”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積并計算加樣回收率。結(jié)果，平均加樣回收率為97.10%（RSD=1.94%，n=6）。

2.2.10 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液適量，分別在室溫下放置0、2、4、6、12、24 h時按“2.2.4”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積并按標準曲線法計算燈盞乙素的含量。結(jié)果，燈盞乙素含量的RSD為1.23%（n=6），表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3 體外釋放度試驗

精密稱取燈盞花素胃黏附片適量，采用2015年版《中國藥典》（四部）通則“特征檢查法”中的溶出度與釋放度測定法——籃法[9]，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，釋放介質(zhì)為pH 6.8磷酸鹽緩沖液500 mL，分別于2、6、12 h取釋放液5 mL，同時補加相應(yīng)釋放介質(zhì)5 mL，釋放液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液3 mL，按“2.2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，按標準曲線法計算燈盞乙素的質(zhì)量濃度，并按下式計算其累積釋放度（Q）：Q（%）=（cn×V0+[∑][i=0][i=n-1]ci×V1）/W×100%（式中cn為第n個點測得的藥物質(zhì)量濃度，V0為釋放介質(zhì)的體積，ci為第i個點測得的藥物質(zhì)量濃度，i=n-1，V1為每次取樣體積，W為燈盞乙素的總含量）。

2.4 體外胃組織黏附力試驗

根據(jù)實驗室條件并查閱相關(guān)文獻資料[10-11]，采用自制黏附力測定裝置進行體外胃組織黏附力試驗。取禁食不禁水24 h的家兔1只，于耳緣靜脈注射空氣處死，取其胃組織，用水沖洗除取胃內(nèi)容物，用0.1 mol/L鹽酸溶液沖洗除去胃表面黏液質(zhì)并浸泡，保存?zhèn)溆谩舯K花素胃黏附片在0.1 mol/L鹽酸溶液中浸泡5 min后，用濾紙吸去表面液體，放在有機玻璃板上（a板）;將胃組織剪切成小塊，全覆蓋固定于背面帶掛鉤的1 cm×1 cm有機玻璃板上（b板）。將a板與b板接觸，并給予質(zhì)量100 g的壓力，維持10 s，將a板垂直固定，在b板上系一塑料袋，通過輸液瓶以5 mL/min速度向塑料袋中加水，直至因拉力過大而分離，稱量塑料袋中水的質(zhì)量，以水質(zhì)量與b板面積的比值計算體外胃組織黏附力（單位：g/cm2）。

2.5 正交試驗優(yōu)化胃黏附片處方

參考相關(guān)文獻方法[12-13]并在預(yù)試驗研究輔料對燈盞花素胃黏附片釋放度和體外胃組織黏附力影響的基礎(chǔ)上，以釋放度評分（Y）和胃組織黏附力（X）的綜合評分為指標，以處方中羥丙甲纖維素K100M（A，%）、卡波姆934P（B，%）及乳糖（C，%）的用量為考察因素，采用L9（34）正交試驗設(shè)計進行處方優(yōu)化。其中，Y=（Q1+Q2+Q3）/3，Q1為2 h累積釋放度（Q2 h）的得分，釋放20%計100分，每增加或減少1%減2分;Q2為Q6 h的得分，釋放50%計100分，每增加或減少1%減2分;Q3為Q12 h的得分，釋放80%計80分，每增加1%加2分，反之減2分[14]。綜合評分（M）采用加權(quán)法計算，釋放度評分、體外胃組織黏附力的權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.4，即M=0.6Y+0.4X。因素與水平見表1，正交試驗設(shè)計與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

由表2中的極差分析結(jié)果可知，各因素對燈盞花素胃黏附片綜合評分影響程度的排序為A>C>B，最優(yōu)處方為A1B1C3;由表3方差分析結(jié)果可知，因素A對燈盞花素胃黏附片的綜合評分有顯著影響（P<0.05）。綜合考慮，確定最優(yōu)處方為10%羥丙甲纖維素K100M、3%卡波姆934P、45%乳糖，與42%燈盞花素提取物混合。以上述最優(yōu)處方比例，按“2.1”項下方法制備3批燈盞花素胃黏附片，測定其體外累積釋放度和胃組織黏附力，并計算綜合評分進行驗證。結(jié)果，3批樣品的平均Q2 h、Q6 h、Q12 h分別為20.36%、48.55%、87.00%，平均體外胃組織黏附力為31.36 g/cm2，平均綜合評分為70.23（RSD=1.84%，n=3），表明該工藝穩(wěn)定可行，詳見表4。

2.6 質(zhì)量評價

2.6.1 性狀 燈盞花素胃黏附片為淡黃色片劑，味淡或微咸。

2.6.2 鑒別 取燈盞花素胃黏附片適量，參照2015年版《中國藥典》（一部）中燈盞乙素的HPLC法[15]進行鑒別。結(jié)果，燈盞乙素對照品和供試品的出峰時間一致，符合藥典規(guī)定，色譜圖見圖1A、1B。

2.6.3 重量差異 取燈盞花素胃黏附片適量，按2015年版《中國藥典》（四部）通則“片劑”中的重量差異檢查法[9]進行檢查。結(jié)果，20片燈盞花素胃黏附片的平均片質(zhì)量為50 mg，重量差異為±6%，符合藥典的限度（57.3%）規(guī)定[19]。

2.6.4 脆碎度 取燈盞花素胃黏附片130片，按2015年版《中國藥典》（四部）通則“特殊檢查法”中的片劑脆碎度檢查法[9]進行檢查，以損失質(zhì)量與原質(zhì)量的百分比為脆碎度，減失重量不得超過1%。試驗重復(fù)3次。結(jié)果，130片燈盞花素胃黏附片的原質(zhì)量為6.276 g，平均損失質(zhì)量為0.034 g，平均脆碎度為0.54%;片劑完整，無缺角，符合藥典規(guī)定。

2.6.5 釋放度 取燈盞花素胃黏附片6片，精密稱定，按“2.3”項下方法測定燈盞乙素的累積釋放度，結(jié)果見表5。燈盞花素胃黏附片的平均Q12 h為83.51%（RSD=2.14%，n=6），符合藥典規(guī)定[9]。

2.6.6 含量測定 按“2.2”項下方法測定3批燈盞花素胃黏附片中燈盞乙素的含量，每批平行測定3次。結(jié)果，3批燈盞花素胃黏附片中燈盞乙素的含量分別為288.28、290.57、286.57 mg/g，平均含量為288.47 mg/g，（RSD=0.70%，n=3）。

3 討論

本課題組前期預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)，粉末直接壓片法和濕法制粒法制備的胃黏附片在體外釋放度方面無顯著差異，但考慮燈盞花素的熱穩(wěn)定性較差，所以最后采用粉末直接壓片法進行制備。另外，目前2015年版《中國藥典》及其余相關(guān)標準中還沒有統(tǒng)一的黏附力測定方法，故本研究結(jié)合自身條件并參考有關(guān)文獻[10-11]，自制黏附力測定裝置對所制胃黏附片的胃組織黏附力進行測定。

卡波姆934P和羥丙甲纖維素不僅都是緩釋制劑的骨架材料，同時還具有生物黏附性[16]。選用這兩種生物黏附材料制備燈盞花素胃黏附片，可使燈盞花素持續(xù)釋放達12 h，且所得片劑具有良好的黏附性，可以在胃腸道滯留較長的時間，保證藥物釋放完全。兩者的比例是釋藥的關(guān)鍵，當卡波姆934P用量過大時，所得片劑的黏附性增加，會導(dǎo)致藥物難以釋放;而當羥丙甲纖維素用量過大時，又會導(dǎo)致藥物釋放減慢且釋放不穩(wěn)定（這是因為隨著羥丙甲纖維素用量增加，制劑形成凝膠的速度加快[17]）。因此，控制好兩者的比例關(guān)系，是實現(xiàn)黏附和緩釋的關(guān)鍵所在。

本研究以燈盞花素為模型藥物，制成了具有黏附及緩釋性能的片劑;在優(yōu)化燈盞花素胃黏附片處方的基礎(chǔ)上，對該制劑的質(zhì)量進行了初步評價。結(jié)果顯示，本研究成功制得了燈盞花素胃黏附片，其質(zhì)量評價符合2015年版《中國藥典》要求，為燈盞花素的劑型改進和開發(fā)提供了新的思路。但是，該胃黏附片的藥動學和藥效學特征仍有待進一步研究。

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（收稿日期：2020-03-24 修回日期：2020-06-04）

（編輯：鄒麗娟）