□ 劉彥泓 大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心

隨著人們生活水平的不斷提高，越來越多的肉類制品被擺上了餐桌。為了利益最大化，有不發(fā)商販摻假銷售，更有甚者把不可食用動(dòng)物的肉添加到商品中出售，嚴(yán)重?fù)p害消費(fèi)者利益。同時(shí)，動(dòng)物源性飼料中違規(guī)摻雜禁用成分的情況也很嚴(yán)重。如果動(dòng)物源性飼料細(xì)菌超標(biāo)或者違法添加了禁用物質(zhì)，就有可能使飼養(yǎng)的禽畜生病，甚至導(dǎo)致食用者患病。為了保障人們的食品安全，保障動(dòng)物源性飼料的質(zhì)量安全，對(duì)肉類食品及飼料進(jìn)行動(dòng)物源性鑒定是非常必要的。

1 動(dòng)物源性成分檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

有資料表明20世紀(jì)80年代，國外學(xué)者開始研究肉的種屬鑒定檢測(cè)，到目前為止國內(nèi)外均由很多相關(guān)報(bào)道。其中國內(nèi)外動(dòng)物源性成分檢驗(yàn)方法主要有兩種：核酸檢測(cè)和蛋白質(zhì)檢測(cè)。核酸檢測(cè)方法主要包括普通PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、數(shù)字PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）、重組酶介導(dǎo)鏈替換核酸擴(kuò)增法（RAA法）、試紙片法、基因芯片檢測(cè)、膜芯片法、液相芯片法、顯微鏡法與二代測(cè)序等。每一種檢測(cè)方法都有各自的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)，可以從不同方面反映材料的真實(shí)情況。在實(shí)際檢測(cè)工作中，由于食品或原材料的加工方法不同，還應(yīng)根據(jù)樣品的不同加工方式選擇適用的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。眾多的研究資料表明最為快速準(zhǔn)確的方法是PCR方法[1]，其中探針法實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的準(zhǔn)確性和便捷性在所有的檢測(cè)方法中最為突出，對(duì)檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)人員的要求也不高，容易掌握。目前現(xiàn)行有效的檢測(cè)方法中以實(shí)時(shí)熒光PCR方法最多。

2 現(xiàn)行動(dòng)物源性成分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法

目前，我國已發(fā)布的現(xiàn)行有效的動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法主要有：國家標(biāo)準(zhǔn)18項(xiàng)（表1），行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)35項(xiàng)（表2），地方標(biāo)準(zhǔn)及其他標(biāo)準(zhǔn)20項(xiàng)（表3）。其中以PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法為主。這些標(biāo)準(zhǔn)方法可以檢測(cè)出不同種類的動(dòng)物源性成分，適用范圍也各不相同，檢測(cè)人員可以根據(jù)需求自主選擇。目前頒布的這些標(biāo)準(zhǔn)方法基本涵蓋了常見的動(dòng)物源性成分，可以檢測(cè)日常食品及飼料中可能會(huì)遇到的肉源性種類。

表1 動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法（國家標(biāo)準(zhǔn)）

表2 動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法（行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）

表3 動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法（地方標(biāo)準(zhǔn)及其他標(biāo)準(zhǔn)）

3 討論與建議

目前我國現(xiàn)行的動(dòng)物源性成分的檢測(cè)方法以普通PCR方法和實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法為主。對(duì)于動(dòng)物源性檢測(cè)，最常采用的就是PCR檢測(cè)方法。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)就是靈敏度高，能夠減少工作量、縮短檢測(cè)時(shí)間[2]，因此目前發(fā)布的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法以實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法為主。由于食品及飼料在加工過程中可能經(jīng)過高溫或油炸等處理，樣品的總DNA結(jié)構(gòu)被破壞，因此檢測(cè)時(shí)一般選擇短片段進(jìn)行鑒定檢測(cè)[3—4]。在日常檢測(cè)時(shí)，容易形成氣溶膠污染環(huán)境，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽性。為避免出現(xiàn)氣溶膠污染，需要檢測(cè)人員特別注意質(zhì)量控制，做好陰性、陽性、空白對(duì)照。3種對(duì)照應(yīng)該至少2個(gè)平行，并且空白對(duì)照應(yīng)該包括樣品DNA提取空白對(duì)照和PCR過程空白對(duì)照，任何一個(gè)對(duì)照結(jié)果不正常均需要重新實(shí)驗(yàn)。同時(shí)也要特別注意實(shí)驗(yàn)室的日常清潔，有條件的實(shí)驗(yàn)室可將擺放PCR擴(kuò)增儀的房間設(shè)計(jì)成負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室，有效避免高濃度的氣溶膠泄漏。另外在實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)時(shí)刻注意避免溶劑噴濺、氣溶膠等造成的污染。