王麗娜，唐艷龍，蔡洪廣，錢正敏

(遵義師范學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，貴州省赤水河流域動物資源保護(hù)與應(yīng)用研究重點實驗室 貴州 遵義 563002)

近年來，林木病蟲害在我國發(fā)生日益嚴(yán)重，特別以松褐天牛(Monochamus alternatusHope)[1]、光肩星天牛[Anoplophora glabripennis(Forster)][2]、云斑天牛[Batocera horsfieldi(Hope)][3]、栗山天牛(Massicus raddeiBlessig)[4]等為代表的天牛類蛀干害蟲，已成為我國林木上最嚴(yán)重的蟲害之一。松褐天牛是松材線蟲?。˙ursaphenchus ylophilus(Steiner & Buhrer)Nickle）在我國最主要的傳播媒介，防治松褐天牛成為有效防控松材線蟲病的主要措施之一[5]。松褐天牛卵、幼蟲和蛹均生活在樹木體內(nèi)，常規(guī)的化學(xué)防治和物理防治很難達(dá)到蟲體導(dǎo)致防治效果較差。而化學(xué)農(nóng)藥的過量使用對生態(tài)環(huán)境造成了很大的影響，因此生物防治天牛不僅可以有效控制害蟲的發(fā)生，而且對環(huán)境友好[6]。

花絨寄甲(Dastarcus helophoroidesFairmaire)，又稱花絨堅甲、花絨穴甲，外寄生在林木鉆蛀性害蟲天牛的幼蟲、蛹或未完全羽化的成蟲體上，是當(dāng)前寄生中大型天牛類害蟲最重要的天敵, 在多種天牛類害蟲的防治上作用明顯[7]。當(dāng)前，我國每年繁育上千萬頭花絨寄甲成蟲和上億頭花絨寄甲卵來防治天牛類害蟲[6]。在實際應(yīng)用中，既可以釋放花絨寄甲成蟲亦可以釋放花絨寄甲卵來防治天牛，釋放成蟲成本較高，李孟樓等[8]研究了釋放花絨寄甲卵防治光肩星天牛，唐艷龍等[9]研究了釋放花絨寄甲卵防治栗山天牛，溫小遂等[10]研究了釋放花絨寄甲卵防治松褐天牛，效果均較好而成本較低。利用花絨寄甲來防治天牛，最佳釋放時間一般較短。而在短期內(nèi)需要大量釋放花絨寄甲卵，就必須提前生產(chǎn)和儲存花絨寄甲卵，這就必須明確花絨寄甲卵的最宜儲存時長。在室內(nèi)大量繁育花絨寄甲的過程中，同樣需要儲存卵。陳元生等[11]研究了低溫儲存卵對孵化率的影響，但未涉及對其發(fā)育和數(shù)量的影響。基于此，本研究在低溫條件下儲存花絨寄甲卵，研究了儲存時長對花絨寄甲卵孵化率、子代發(fā)育和數(shù)量等指標(biāo)的影響，以期明確低溫下花絨寄甲卵的最宜儲存時長，為利用花絨寄甲卵防治天牛類害蟲提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用花絨寄甲卵為國家林業(yè)局貴州省天敵繁育中心提供，收集花絨寄甲同一天產(chǎn)下的卵若干備用。所用大麥蟲(Zophobas atratus)為市場購得，收集化蛹時間在1 d以內(nèi)的嫩蛹作為替代寄主。

1.2 實驗方法

1.2.1 花絨寄甲卵的儲存 選擇若干上述花絨寄甲卵，置于盒蓋打孔的黑色塑料保鮮盒內(nèi)，放入低溫氣候箱（光周期為全暗，溫度為12℃，濕度為60%）內(nèi)貯藏。

1.2.2 接種 上述花絨寄甲卵分別儲存0、15、30、45、60、75和90 d后分批取出，置于溫度為27℃、濕度為60%的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，光周期為L∶D=16 h∶8 h，光照強度為3 000 Lux。待幼蟲孵化后及時接種（1 d內(nèi)接完）。將孵化的花絨寄甲幼蟲接到新鮮大麥蟲蟲蛹上（蛹齡1 d內(nèi)）。每頭蛹接10頭花絨寄甲幼蟲，接幼蟲時不可太過用力以免傷害到幼蟲，且要確保所接上的幼蟲是活的（活的幼蟲當(dāng)用筆尖觸碰到時其軀體會彎曲）。為確保幼蟲都成功接上，接種前取一潔凈無蓋黑色塑料保鮮盒，用毛筆選10頭幼蟲置于盒內(nèi)，之后進(jìn)行接種，接上蟲后觀察筆尖是否有殘留幼蟲或盒里是否有掉落的幼蟲以保證接種數(shù)量一致。然后將接好的蟲蛹裝到口徑1.2 cm、容積4 mL的昆蟲管并用棉塞封口（裝管時蟲蛹頭部統(tǒng)一朝底部），裝到無蓋黑色塑料保鮮盒，每管做好編號后再放入人工氣候箱。每組接種大麥蟲蛹30頭。

1.2.3 觀察與記錄 整個實驗過程每天觀察一次，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

幼蟲孵化率：接種完的卵卡放置一周直至再無幼蟲孵化后，在體視鏡下計數(shù)每張卵卡上總的卵粒數(shù)和已孵化的卵粒數(shù)。按公式：孵化率（%）=孵化卵粒數(shù)/總卵粒數(shù)，計算孵化率。已孵化的卵在體視鏡下可見其上有小孔（小孔即為幼蟲孵化時留下），另外幼蟲孵化一般都是從卵粒的兩端破殼而出，且相鄰并排著的大都朝同一方向孵化。剛產(chǎn)出的卵為乳白色，近孵化時逐漸變?yōu)辄S褐色[12-13]，而未孵化出幼蟲的卵粒較已孵化的顏色更深且卵粒完整無破口，可以作為卵孵化與否的判定標(biāo)準(zhǔn)。

幼蟲期及結(jié)繭率：從接種的時間到老熟幼蟲結(jié)繭的時間即為幼蟲期?；ńq寄甲老熟幼蟲吐絲結(jié)繭時間較短，一般在1 d內(nèi)即可完成。觀察記錄每管結(jié)繭數(shù)量，即可計算結(jié)繭率（%）=結(jié)繭數(shù)量/接種頭數(shù)（10）。

蛹期、羽化率及子代數(shù)：從結(jié)繭日期到羽化日期即為蛹期。觀察到有成蟲羽化后，記錄日期，待多數(shù)成蟲都羽化后，將已羽化的成蟲取出計數(shù)，將未羽化的繭仍置于培養(yǎng)箱內(nèi)觀察30 d，然后計數(shù)每管所有羽化的成蟲頭數(shù)，按公式羽化率（%）=羽化數(shù)/結(jié)繭數(shù)，計算羽化率。

成蟲單頭體質(zhì)量（平均）：用電子天平稱量每管成蟲體質(zhì)量然后求其均值記為該管成蟲平均單頭體質(zhì)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實驗所得數(shù)據(jù)用DPS進(jìn)行方差分析，并用LSD法比較各處理間的差異。所有百分率數(shù)據(jù)均用對數(shù)化后進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 儲存時長對花絨寄甲卵孵化率的影響

儲存時長對花絨寄甲卵的孵化率有顯著影響(F=408.938,df=6,199,p＜0.05)。儲存45 d以內(nèi)，卵的孵化率都高達(dá)92.0%以上，儲存0 d、15 d、30 d、45 d的卵卡，卵的孵化率無顯著差異。儲存60 d后，卵的孵化率顯著下降至62.1%，儲存75 d后，卵的孵化率進(jìn)一步下降到44.4%，而儲存90 d后，卵的孵化率下降為0。隨著卵卡儲存時長的增長，花絨寄甲卵的孵化率逐漸下降（圖1）。

圖1 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下的孵化率Fig. 1 Hatching rate of D. helophoroides eggs at different storage periods

2.2 花絨寄甲卵儲存時長對其幼蟲期的影響

花絨寄甲卵儲存時長對其幼蟲期影響顯著(F=28.916,df=5, 159,p＜0.05)。其中，儲存時長為75 d時，其幼蟲期最長，平均為15.1±2.1 d，顯著長于其他處理。儲存15 d、45 d與60 d的卵，其幼蟲期次之，平均為12.5±1.0 d、12.7±1.5 d、12.4±1.4 d，三者間無顯著差異。儲存0 d和30 d的卵，其幼蟲期最短，為9.5±3.1 d、9.6±1.1 d，兩者間差異不顯著（圖2）。

圖2 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下幼蟲的發(fā)育歷期Fig. 2 Larval stage of D. helophoroides larvae after eggs were stored for different periods

2.3 花絨寄甲卵儲存時長對幼蟲結(jié)繭率的影響

花絨寄甲卵儲存時長對其結(jié)繭率影響顯著(F=15.444,df=5,159,p＜0.05)。其中，儲存時長為0 d、15 d 、30 d時，其結(jié)繭率較高，分別為45.7%、54.8%、51.4%。儲存45 d，其結(jié)繭率次之，平均為42.4%，顯著高于60 d、75 d兩個處理。儲存時長為60 d時，其結(jié)繭率下降至26.1%，至75 d，下降到最低，為15.3%（圖3）。

圖3 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下的幼蟲結(jié)繭率Fig. 3 Cocooning rate of D. helophoroides larvae after eggs were stored for different periods

2.4 花絨寄甲卵儲存時長對其蛹期的影響

花絨寄甲卵儲存時長對其蛹期影響顯著（F=5.921，df=5，144，p＜0.05）。其中，儲存0 d、15 d、30 d、60 d的處理，其蛹期較長，分別為30.4±2.9 d、29.6±2.9 d、30.7±2.2 d、29.4±2.4 d，四者之間無顯著差異。儲存45 d、75 d的處理，其蛹期有所縮短，平均為27.7±1.9 d和27.5±2.7 d，兩者間差異不顯著（圖4）。

圖4 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下蛹的發(fā)育歷期Fig. 4 Pupal period of D. helophoroides pupa after eggs were stored for different periods

2.5 花絨寄甲卵儲存時長對蛹羽化率的影響

花絨寄甲卵儲存時長對蛹的羽化率有一定影響（F=1.62，df=5，150，p＜0.05）。其中儲存15 d的，其蛹的羽化率最高為96.2%，儲存0 d的羽化率最低，為80.7%，其他處理介于兩者之間，羽化率介于87.3%～91.1%之間（圖5）。

2.6 花絨寄甲卵儲存時長對羽化數(shù)量的影響

花絨寄甲卵儲存時長對其羽化數(shù)量影響顯著（F=20.069，df=5，179，p＜0.05）。其中，儲存時長為15 d時，其子代數(shù)量最多，平均為5頭，顯著多于其他處理。儲存0 d、30 d、45 d，其子代數(shù)量次之，平均為3～4頭，三者之間差異不顯著。儲存時間大于60 d，其子代數(shù)量進(jìn)一步下降，至75 d，其子代數(shù)量下降到最少，平均不足1頭（圖6）。

圖5 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下蛹的羽化率Fig. 5 Eclosion rate of D. helophoroides pupae after eggs were stored for different periods

圖6 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下成蟲的羽化數(shù)量Fig. 6 Eclosion numbers of D. helophoroides adults after eggs were stored for different periods

2.7 花絨寄甲卵儲存時長對成蟲單頭體質(zhì)量的影響

花絨寄甲卵儲存時長對成蟲單頭體質(zhì)量亦有顯著影響(F=4.42，df=5，150，p＜0.05)。其中儲存15 d的處理，其成蟲單頭體質(zhì)量最大，平均為0.030 g，而儲存0 d、30 d、60 d、75 d的處理，單頭體質(zhì)量在0.022～0.025 g之間，儲存30 d的處理最輕，平均只有0.022 g（圖7）。

圖7 花絨寄甲卵經(jīng)不同儲存時長條件下成蟲的單頭體質(zhì)量Fig. 7 Weight of per D. helophoroides adult after eggs were stored for different periods

3 討論

當(dāng)前，以光肩星天牛、松褐天牛、星天牛[A.chinensis(Forster)]、栗山天牛、云斑天牛、銹色粒肩天牛[Apriona swainsoni(Hope)]和桔褐天牛[Nadezhdilla cantori(Hope)]等為代表的天牛類害蟲已成為我國林業(yè)上的重要害蟲，每年造成大量樹木枯死[5]。天牛類害蟲天敵較多，其中花絨寄甲是迄今發(fā)現(xiàn)的中大型天牛類蛀干害蟲最為有效的天敵，其對松褐天牛的自然寄生率平均為20%～30%[12]，最高寄生率可達(dá)79.1%[13]，其對栗山天牛的自然寄生率平均達(dá)10%～30%[4,14]。早在上世紀(jì)80年代，周嘉熹等[15]將陜西洋縣發(fā)現(xiàn)的花絨寄甲引入甘肅防治黃斑星天牛(Anoplophora nobilisGangibaeur)，取得了不錯的防治效果，這是我國最早應(yīng)用花絨寄甲防治害蟲的研究。之后，王衛(wèi)東等[16-17]和雷瓊等[18-19]陸續(xù)開展了有關(guān)花絨寄甲的生物學(xué)特點、人工繁育和應(yīng)用研究，這一時期，繁育花絨寄甲主要依靠人工獲取天牛類害蟲作為寄主，因而成本較高，繁殖量受限，推廣應(yīng)用較少，雖然王衛(wèi)東等[17]和雷瓊等[19]先后設(shè)計了一些花絨寄甲幼蟲和成蟲的人工飼料，但繁殖成功率較低，因而也沒有大量應(yīng)用。至2006年，中國林業(yè)科學(xué)研究院楊忠岐教授團隊攻克了花絨寄甲成蟲室內(nèi)大量產(chǎn)卵、花絨寄甲成蟲的人工飼料和篩選出優(yōu)良的替代寄主三大難題，花絨寄甲的繁育和應(yīng)用迎來了快速發(fā)展[20]。在這一時期，東北三省栗山天牛爆發(fā)成災(zāi)[4]，光肩星天牛對“三北”防護(hù)林危害日益嚴(yán)重[2]，南方各省松褐天牛種群迅速擴大[1]，花絨寄甲被大量繁育并投放到林間防治害蟲，對這些害蟲的控制起到了重要作用，特別是栗山天牛，通過連續(xù)3個世代的投放控制，其危害程度已逐漸下降，栗山天牛曾經(jīng)是吉林省頭號林業(yè)害蟲，如今已下降為次要害蟲，部分地區(qū)已很難見到[6]。從2006年至今，我國先后在吉林省梅河口市、遼寧省寬甸縣、北京市房山區(qū)、河南省漯河市、湖南省長沙市、湖北省神農(nóng)架林區(qū)、江西省都昌縣、江蘇省南京市、安徽省合肥市和貴州省遵義市建立了多個天敵繁育中心，每年繁育大量的花絨寄甲等天敵昆蟲用于林間防治害蟲，當(dāng)前每年繁育的花絨寄甲成蟲已達(dá)上千萬頭，卵上億粒[6,9,21-23]。并且依據(jù)從不同寄主上發(fā)現(xiàn)的不同花絨寄甲生物型分開繁育，進(jìn)一步提高了寄生效率[24]。國外對花絨寄甲的研究和應(yīng)用較少，目前僅日本有科學(xué)家開展了有關(guān)花絨寄甲的繁育和應(yīng)用研究[25]，雖然對松褐天牛亦有較好的作用，但因為沒有突破人工繁育的瓶頸，因而并沒有大量繁育和應(yīng)用的報道。

最早利用花絨寄甲防治天牛類蛀干害蟲以釋放成蟲為主，之后李孟樓等[8]和楊忠岐等[6]提出可以釋放花絨寄甲卵來防治。當(dāng)前，應(yīng)用花絨寄甲防治害蟲，有釋放成蟲和卵兩種方式。兩種方式各有優(yōu)缺點，釋放成蟲，優(yōu)點是成蟲會飛，可以自己尋找害蟲寄生，這樣可以減少釋放成本，而且成蟲會在適宜的地方產(chǎn)卵，受溫濕度條件影響較小，缺點是成蟲的成本仍然相對較高，釋放后沒有地方躲藏會飛走[26]。為了進(jìn)一步減少釋放成本，近年來，開始嘗試應(yīng)用無人機釋放花絨寄甲成蟲，董廣平等[27]報道了利用無人機釋放花絨寄甲防治松褐天牛，檢查寄生率達(dá)40.74%，可以預(yù)見的是，利用無人機釋放花絨寄甲必將得到廣泛應(yīng)用，特別是在我國南方坡度較大的林區(qū)。釋放卵，優(yōu)點是釋放后起作用較快，可以對靶標(biāo)樹木起作用，成本也較低，缺點是受溫濕度和其他昆蟲影響大，特別是在南方多雨的季節(jié)，卵釋放后容易被雨水沖刷，也容易被螞蟻等捕食[28]。為了減少環(huán)境條件對花絨寄甲卵的影響，在實際使用過程中，除了儲存條件之外，運輸過程中的溫濕度和時間等環(huán)境條件也需要研究明確，以形成標(biāo)準(zhǔn)化的規(guī)范。為了減少降雨對花絨寄甲卵的影響，溫小遂等[10]提出先在室內(nèi)恒溫下將花絨寄甲卵放置一段時間，待卵即將羽化時再釋放到林間以提高其孵化率。這樣就可以根據(jù)溫濕度條件和天氣情況，調(diào)整釋放卵的時機，以提高寄生效率。

對花絨寄甲而言，寄主蛹是最佳的寄生蟲態(tài)。由于寄主蛹期時間較短，因而，利用花絨寄甲防治天牛類蛀干害蟲，不論是釋放成蟲還是釋放卵，釋放時機非常關(guān)鍵。溫小遂等[10]研究利用花絨寄甲防治松褐天牛，江西省最佳釋放時間是在3月下旬至4月中旬（松褐天牛蛹前期和蛹期）。而在遼寧省防治栗山天牛，最佳釋放時間在6月[4]。

實驗還發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)牡蜏劐憻?，對花絨寄甲的發(fā)育是有利的。儲存15 d的卵，其孵化率、結(jié)繭率和羽化率均最高，平均為94.5%、54.8%和96.2%，其羽化數(shù)最多，平均為5.2頭，單頭體質(zhì)量最大，平均為0.030 g。幼蟲期和蛹期中等，為12.5 d和29.6 d。其幼蟲發(fā)育歷期、羽化率、羽化數(shù)量和單頭體質(zhì)量都顯著高于不儲存的處理，結(jié)繭率也高于對照，而孵化率和蛹的發(fā)育歷期與對照相當(dāng)。低溫鍛煉花絨寄甲卵不僅有利于促進(jìn)發(fā)育，也有利于提高寄生效率。這一現(xiàn)象產(chǎn)生的機理值得深入研究。

4 結(jié)論

花絨寄甲卵在低溫下（12℃，其發(fā)育起點溫度為12.8℃[29]）較耐儲存，其最佳儲存時長為45 d。儲存45 d內(nèi)，其孵化率都高達(dá)92%以上，儲存60 d，其孵化率明顯下降至62.1%，儲存75 d后，卵的孵化率進(jìn)一步下降到44.4%，而儲存90 d后，卵的孵化率下降為0。此結(jié)論與陳元生等[30]的研究結(jié)果有所不同，可能是儲存溫度不同導(dǎo)致的。

低溫儲存花絨寄甲卵亦會影響其活力，儲存時長對幼蟲期、結(jié)繭率、蛹期、羽化率、羽化數(shù)和單頭體質(zhì)量均有顯著影響。儲存時長45 d內(nèi)，其結(jié)繭率、羽化率、羽化數(shù)和單頭質(zhì)量均較高，超過60 d，這些指標(biāo)均顯著下降。幼蟲期隨卵儲存時長的增長總體延長，而蛹期呈不規(guī)律變化。