張文英 季爽 李永懷 費(fèi)廣鶴

安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,合肥230022通信作者：費(fèi)廣鶴,guanghefei@126.com

肺癌是世界上癌癥的主要死亡原因之一[1-2],其發(fā)病率和病死率居惡性腫瘤之首,而肺癌患者的死亡主要是由于癌癥的轉(zhuǎn)移。因此,尋找新方法抑制肺癌的轉(zhuǎn)移是臨床亟待解決的難題。血管形成是新生血管從現(xiàn)有血管“出芽”的過(guò)程,癌細(xì)胞通過(guò)腫瘤相關(guān)血管進(jìn)入血液循環(huán)造成癌細(xì)胞播散。腫瘤相關(guān)血管在肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中都起著重要的作用[3-4],阻斷肺癌血管形成可能是肺癌治療的有效策略。

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2 (angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是腎素血管緊張素系統(tǒng)的新成員,為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 (angiotensin-converting enzyme,ACE)的同系化合物。ACE 是腎素血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶,能將無(wú)活性的血管緊張素Ⅰ(angiotensinⅠ,AngⅠ)轉(zhuǎn)換為有活性的血管緊張素Ⅱ (angiotensinⅡ,AngⅡ),產(chǎn)生收縮血管作用,而ACE2的作用與ACE 相反,有舒張血管作用。既往多項(xiàng)研究表明ACE2 在高血壓、心力衰竭、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病等心血管疾病中扮演重要角色[5-7],除此之外,近年來(lái)有研究表明ACE2與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展也密切相關(guān)[8-9]。研究表明,ACE2在肺腺癌中低表達(dá),其表達(dá)缺失可能與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[10-11],但其相關(guān)機(jī)制尚不明確。腫瘤血管形成是一個(gè)復(fù)雜而協(xié)調(diào)的過(guò)程,依賴于細(xì)胞與細(xì)胞之間及細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用,并受多種血管生成促進(jìn)因子和抑制因子調(diào)節(jié)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)是最重要的腫瘤促血管生長(zhǎng)因子[12-13],能作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,促進(jìn)其增殖、遷移、侵襲及管腔形成,在腫瘤血管生成過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本文旨在探討ACE2 如何通過(guò)VEGF調(diào)節(jié)肺腺癌體外微血管生成,為ACE2今后可能在肺腺癌的治療中的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株 人肺腺癌A549細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)購(gòu)自上海復(fù)旦大學(xué)細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2 試劑 DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 3000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司；過(guò)表達(dá)對(duì)照質(zhì)粒(pcDNA3.1)、ACE2 過(guò) 表 達(dá) 質(zhì) 粒 (pc DNAACE2)、干擾對(duì)照質(zhì)粒 (sh RNA-NC)及ACE2干擾質(zhì)粒 (sh RNA-ACE2)購(gòu)自南京巴傲得生物科技有限公司；MTT、胰酶消化液、細(xì)胞裂解液購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Transwell小室、Matrigel膠購(gòu)自美國(guó)BD 公司；ACE2兔多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)的Abcam 公司；VEGF 兔多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)的Abcam 公司；β-actin兔單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)的CST 公司；HRP標(biāo)記二抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz 公司；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。

1.1.3 儀器 超凈工作臺(tái) (蘇州金燕凈化設(shè)備有限公司)；細(xì)胞培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀 (美國(guó)Thermo公司)；低速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；倒置顯微鏡與照像系統(tǒng)(德國(guó)Carl Zeiss公司)；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀(美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將A549細(xì)胞或HUVECs接種于含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基,37 ℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿的80%～90%時(shí),胰酶消化,DMEM 培養(yǎng)液重懸,按1∶3比例傳代,然后取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 將適量A549細(xì)胞接種于6孔板中培養(yǎng),次日待細(xì)胞貼壁并生長(zhǎng)至30%～50%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。A549細(xì)胞分4組,分別轉(zhuǎn)入過(guò)表達(dá)對(duì)照質(zhì)粒 (pcDNA3.1組)、ACE2 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(pc DNA-ACE2組)、干擾對(duì)照質(zhì)粒 (sh RNA-NC組)、ACE2 干 擾 質(zhì) 粒 (sh RNA-ACE2 組),按Lipofectamine 3000試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,轉(zhuǎn)染48 h后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡法驗(yàn)證,轉(zhuǎn)染效率大于70%的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 蛋白質(zhì)印跡法 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后,用細(xì)胞裂解液提取A549 細(xì)胞蛋白,進(jìn)行SDS-PAGE 電泳,然后將蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用5%的脫脂牛奶室溫封閉2 h,TBST 洗膜,分別加ACE2、VEGF和β-actin的一抗 (1∶1 000稀釋),4 ℃孵育過(guò)夜,TBST 洗膜,添加相應(yīng)二抗后,室溫孵育2 h,TBST 洗膜,ECL 顯影,曝光拍照,Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 ELISA 嚴(yán)格按ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,使用酶標(biāo)儀在450 nm 測(cè)定吸光度,計(jì)算出上清液中VEGF的濃度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 條件培養(yǎng)基制備 A549 細(xì)胞用pc DNAACE2或sh RNA-ACE2成功轉(zhuǎn)染后,收集細(xì)胞上清液,1 611×g離心5min,取細(xì)胞上清作為條件培養(yǎng)基,用上述條件培養(yǎng)基來(lái)處理HUVECs,分為pc DNA3.1組、pcDNA-ACE2 組、sh RNA-NC組、sh RNA-ACE2 組 及sh RNA-ACE2+VEGF antibody組 (向sh RNA-ACE2組條件培養(yǎng)基加入0.5 mg/L的VEGF中和抗體)。

1.2.6 MTT 將HUVECs以3×103個(gè)/孔的密度接種到96孔板中,饑餓培養(yǎng)24 h后,換為條件培養(yǎng)基,分別培養(yǎng)24、48、72 h,然后向每孔中加入20μl無(wú)菌過(guò)濾的MTT 溶液 (5 g/L),37 ℃下孵育4 h,棄去孔中的MTT 溶液,然后每孔加入100μl二甲基亞砜,置搖床上低速搖晃10 min,使結(jié)晶充分溶解,在酶標(biāo)儀490 nm 處讀取吸光度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 將適量HUVECs接種于6孔板中培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至90%密度時(shí),使用20μl槍頭在單層細(xì)胞表面劃痕,PBS漂洗3次,換為條件培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h,分別在劃痕后0、24 h拍照觀察細(xì)胞的相對(duì)遷移距離。使用Image J軟件測(cè)量細(xì)胞遷移距離,以遷移率作為統(tǒng)計(jì)學(xué)比較標(biāo)準(zhǔn),遷移率= (遷移前兩側(cè)細(xì)胞距離-遷移后兩側(cè)細(xì)胞距離)/遷移前兩側(cè)細(xì)胞層距離。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 采用無(wú)血清DMEM 培養(yǎng)基懸浮HUVECs,然后以5×104個(gè)/孔的密度接種于Matrigel包被的Transwell小室上室,在小室下室加入600μl條件培養(yǎng)基,共培養(yǎng)24 h后,取出小室,用棉簽小心擦去上室的細(xì)胞,4%多聚甲醛固定30 min,0.1%結(jié)晶紫染色10 min,PBS洗滌3次,每孔隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察侵襲細(xì)胞數(shù),并拍照統(tǒng)計(jì)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.9 小管形成實(shí)驗(yàn) 在96 孔板的板孔上加入50μl預(yù)冷Matrigel膠,37 ℃包被30 min,待Matrigel膠凝固后,用條件培養(yǎng)基懸浮HUVECs,以5×104個(gè)/孔的密度接種于相應(yīng)孔中,37 ℃孵育4 h[14],對(duì)管狀培養(yǎng)物拍照。使用Image J軟件測(cè)量小管形成長(zhǎng)度,以小管形成總長(zhǎng)度作為統(tǒng)計(jì)學(xué)比較標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以x-±s表示,兩組間比較使用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞中VEGF 表達(dá)水平 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,pcDNA3.1組、pc DNAACE2 組、sh RNA-NC 組 和sh RNA-ACE2 組A549細(xì)胞中ACE2 的相對(duì)表達(dá)量分別為0.36±0.03、1.53±0.03、0.35±0.03和0.22±0.04,VEGF的相對(duì)表達(dá)量分別為0.80±0.03、0.43±0.04、0.81±0.05和1.67±0.04。與pcDNA3.1組相比,pcDNA-ACE2 組A549 細(xì) 胞 中ACE2 明 顯升高(t=51.20,P＜0.05),VEGF 表達(dá)水平明顯降低(t=13.70,P＜0.5)；與sh RNA-NC 組相比,shRNA-ACE2 組A549 細(xì) 胞 中ACE2 明 顯降低(t=4.97,P＜0.05),VEGF 表達(dá)水平明顯升高(t=25.70,P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

2.2 轉(zhuǎn)染后A549 細(xì)胞上清液中VEGF 表達(dá)水平 ELISA 檢 測(cè) 結(jié) 果 顯 示,pcDNA3.1 組、pc DNA-ACE2組、sh RNA-NC 組和sh RNA-ACE2組A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h后上清液中VEGF 表達(dá)水平分別為 (20.12±2.25)mg/L、 (14.49±0.14)mg/L、 (18.79±0.98)mg/L 和 (29.04±4.29)mg/L,轉(zhuǎn)染48 h 后上清液中VEGF 表達(dá)水平分別為 (30.55±2.75)mg/L、 (14.20±2.47)mg/L、 (33.18±3.07)mg/L 和 (44.48±1.77)mg/L,轉(zhuǎn)染72 h后上清液中VEGF表達(dá)水平分別為(26.54±1.64)mg/L、(16.88±0.31)mg/L、 (27.67±1.85)mg/L 和 (50.75±8.24)mg/L。轉(zhuǎn)染48 h 后,A549 細(xì)胞上清液中VEGF 表達(dá)水平達(dá)峰值。與pcDNA3.1組相比,24、48、72 h pcDNA-ACE2 組A549 細(xì)胞上清液中VEGF 表達(dá)水平明顯降低 (t=4.32、7.66、10.01,P值均＜0.05)；與sh RNA-NC 組相比,24、48、72 h shRNA-ACE2 組A549 細(xì)胞上清液中VEGF 表達(dá)水平明顯升高 (t=4.04、5.52、4.73,P值均＜0.05)。見(jiàn)圖2。

2.3 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞上清液對(duì)HUVECs增殖能力的影響 MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pcDNA3.1組、pc DNA-ACE2 組、sh RNA-NC 組、sh RNA-ACE2組和shRNA-ACE2+VEGF antibody組HUVECs培養(yǎng)24 h后吸光度值分別為0.17±0.01、0.10±0.01、0.18±0.01、0.34±0.02和0.25±0.01,培養(yǎng)48 h 后吸光度值分別為0.27±0.03、0.18±0.01、0.25±0.01、0.50±0.02和0.28±0.03,培養(yǎng)72 h后的吸光度值分別為0.28±0.03、0.20±0.03、0.31±0.02、0.47±0.02和0.29±0.02。各組HUVECs增殖能力均隨時(shí)間增加而增加。與pcDNA3.1組相比,24、48、72 h pcDNA-ACE2組HUVECs增殖能力明顯降低(t=8.64、6.15、3.51,P值均＜0.05)；與sh RNA-NC 組相比,24、48、72 h sh RNA-ACE2 組HUVECs增殖能力明顯升高 (t=10.02、15.71、11.96,P值均＜0.05)；而24、48、72 h sh RNA-ACE2+VEGF antibody組HUVECs增殖能力較sh RNAACE2組明顯降低 (t=6.00、10.65、11.82,P值均＜0.05)。見(jiàn)圖3。

圖1 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)各組A549細(xì)胞中ACE2及VEGF相對(duì)表達(dá)量

圖2 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)各組A549細(xì)胞上清中VEGF水平

2.4 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞上清液對(duì)HUVECs遷移能力的影響 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pcDNA3.1組、pc DNA-ACE2 組、sh RNA-NC 組、sh RNAACE2 組 和shRNA-ACE2+VEGF antibody 組HUVECs的細(xì)胞遷移率分別為53.21%±2.94%、31.93%±2.22%、52.50%±5.88%、82.68%±1.92%和54.76%±1.72%。與pcDNA3.1組相比,pcDNA-ACE2組HUVECs遷移率明顯降低 (t=10.01,P＜0.5)； 與 sh RNA-NC 組 相 比,sh RNA-ACE2組HUVECs遷移率明顯升高 (t=8.45,P＜0.05)；而sh RNA-ACE2+ VEGF antibody組HUVECs遷移率較sh RNA-ACE2 組明顯降低(t=18.79,P＜0.05)。見(jiàn)圖4、5。

圖3 MTT 檢測(cè)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力

2.5 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞上清液對(duì)HUVECs侵襲能力的影響 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pcDNA3.1組、pcDNA-ACE2 組、sh RNA-NC 組、sh RNAACE2 組 和shRNA-ACE2+VEGF antibody 組HUVECs的侵襲細(xì)胞數(shù)分別為(77.13±9.00)個(gè)、(43.33±1.22)個(gè)、(78.27±8.50)個(gè)、(121.10±2.50)個(gè)和 (77.87±8.90)個(gè)。與pcDNA3.1組相比,pc DNA-ACE2組HUVECs侵襲細(xì)胞數(shù)明顯降低(t=6.45,P＜0.05)；與sh RNA-NC 組相比,shRNA-ACE2組HUVECs侵襲細(xì)胞數(shù)明顯升高(t=8.37,P＜0.05)；而sh RNA-ACE2+VEGF antibody 組 HUVECs 侵 襲 細(xì) 胞 數(shù) 較sh RNA-ACE2組明顯降低(t=8.09,P＜0.05)。見(jiàn)圖6、7。

圖4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力

圖5 各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞遷移率

2.6 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞上清液HUVECs小管形成能力的影響 小管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,pcDNA3.1組、pcDNA-ACE2 組、sh RNA-NC 組、sh RNAACE2 組 和sh RNA-ACE2+VEGF antibody 組HUVECs的小管總長(zhǎng)度分別為(6.36±0.26)mm、(3.81±0.14)mm、(6.36±0.32)mm、(12.50±0.55)mm 和(6.35±0.39)mm。與pcDNA3.1組相比,pc DNA-ACE2組HUVECs小管形成總長(zhǎng)度明顯降低(t=14.86,P＜0.05)；與sh RNA-NC組相比,sh RNA-ACE2組HUVECs小管形成總長(zhǎng)度明顯升高 (t=16.78,P＜0.05)；而sh RNAACE2+VEGF antibody 組HUVECs 小管形成總長(zhǎng)度較sh RNA-ACE2組明顯降低(t=15.82,P＜0.05)。見(jiàn)圖8、9。

圖6 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞侵襲能力 A：pcDNA3.1組；B：pcDNA-ACE2組；C：shRNA-NC組；D：shRNAACE2組；E：shRNA-ACE2+VEGF antibody組

圖7 各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的侵襲細(xì)胞數(shù)

3 討論

圖8 小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小管形成能力 A：pcDNA3.1組；B：pcDNA-ACE2組；C：shRNA-NC組；D：shRNAACE2組；E：shRNA-ACE2+VEGF antibody組

ACE2是一種膜聯(lián)羧肽酶,是ACE 同工酶,但生物學(xué)作用卻與ACE 相反[5-7]。ACE 的主要生理作用是將AngⅠ轉(zhuǎn)換為AngⅡ,產(chǎn)生收縮血管作用；ACE2 的主要生理作用是水解AngⅠ、AngⅡ,產(chǎn)生舒血管作用的Ang (1-7)、Ang(1-9),起到降血壓,保護(hù)心血管的作用。隨著血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑以及血管緊張素受體拮抗劑在心血管疾病方面的應(yīng)用,腎素血管緊張素系統(tǒng)與腫瘤的關(guān)系日益被人們所關(guān)注。近年來(lái)許多研究表明,ACE2在多種惡性腫瘤如乳腺癌、膽囊癌、肺癌中異常表達(dá),ACE2的表達(dá)缺失可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),ACE2 可能是一種潛在的抑癌因子。Zhang 等[8]研 究 表 明,ACE2 通 過(guò) 抑 制VEGFa/VEGFR2/ERK 信號(hào)通路抑制乳腺癌血管形成。Zong等[9]研究表明,ACE2通過(guò)抑制ERK蛋白磷酸化抑制膽囊癌的生長(zhǎng)。Feng等[10]還發(fā)現(xiàn)ACE2的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌的TNM 分期有關(guān),低表達(dá)ACE2 的患者臨床分期晚,預(yù)后差。目前仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證ACE2在肺腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

圖9 各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的小管總長(zhǎng)度

惡性腫瘤的生長(zhǎng)依賴于血管生成,VEGF是最重要的促血管生長(zhǎng)因子,為探究中ACE2 對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞VEGF 表達(dá)水平的影響,本實(shí)驗(yàn)用ACE2 過(guò)表達(dá)及干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549 細(xì)胞后,對(duì)A549細(xì)胞中VEGF表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)或干擾A549細(xì)胞中ACE2表達(dá)后,VEGF的表達(dá)隨之降低或升高,這表明ACE2 抑制A549細(xì)胞中VEGF表達(dá),提示ACE2可能是肺腺癌血管形成的負(fù)性調(diào)控因子。

肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率在惡性腫瘤中均居世界首位。肺癌的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移都需要新生血管的支持,抗血管生成治療已成為一種肺癌重要治療手段。血管生成指源于已存在的毛細(xì)血管和毛細(xì)血管后微靜脈的新的毛細(xì)血管性血管的生長(zhǎng)。腫瘤血管生成是一個(gè)動(dòng)態(tài)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,由腫瘤細(xì)胞分泌測(cè)促血管生成因子作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,激活靜息狀態(tài)的內(nèi)皮細(xì)胞,降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì),使內(nèi)皮細(xì)胞增殖,遷移至腫瘤附近,最終形成毛細(xì)血管網(wǎng)包繞或侵入腫瘤[15]。為研究ACE2在肺腺癌體外微血管形成中的作用,筆者用轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞的條件上清液來(lái)培養(yǎng)HUVECs,然后分別檢測(cè)HUVECs的增殖、遷移、侵襲和小管形成能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ACE2過(guò)表達(dá)的A549 細(xì)胞條件上清液能抑制HUVECs的增殖、遷移、侵襲和小管形成能力；ACE2 敲低的A549 細(xì)胞條件上清液能促進(jìn)HUVECs的增殖、遷移、侵襲和小管形成能力,而這種促進(jìn)作用能被VEGF 中和抗體所抵消。由此推斷,ACE2 能夠通過(guò)下調(diào)VEGF 的表達(dá)抑制HUVECs的增殖、遷移、侵襲和小管形成能力,抑制肺腺癌體外微血管形成,ACE2可能是潛在的肺腺癌抑制因子。

迄今為止,ACE2激動(dòng)劑已經(jīng)在許多臨床疾病中應(yīng)用,但其中肺腺癌中的作用尚不明確。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ACE2 可以通過(guò)下調(diào)A549 細(xì)胞中VEGF表達(dá),抑制HUVECs的增殖、遷移、侵襲和小管形成能力,從而抑制肺腺癌體外微血管形成,為ACE2在肺腺癌治療中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突