潘喬丹 黃元河

1.右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西 百色 533000;2.右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

高尿酸血癥(Hyperuricemia，HUA)是由遺傳因素與環(huán)境因素相互作用引起，嘌呤代謝的終產(chǎn)物尿酸(Uricacid，UA)在體內(nèi)發(fā)生代謝障礙，出現(xiàn)血中尿酸濃度異常增高的代謝性疾病。HUA不僅是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、慢性痛風(fēng)石疾病及尿酸性腎病最重要的生化基礎(chǔ)；而且還是多種血管疾病的危險因素，與多種疾病如腦卒中、高血壓、糖尿病、冠心病、心力衰竭、慢性腎臟疾病等密切相關(guān)[1]。近期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血尿酸增加，多余的尿酸會介導(dǎo)氧化應(yīng)激，減少NO的產(chǎn)生, 導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂；當(dāng)尿酸濃度過大時候尿酸鹽以結(jié)晶的形式沉積于血管壁引發(fā)炎癥，最終導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能受損[2]。而血管內(nèi)皮功能受損是冠心病、高血壓、心力衰竭等疾病的重要始動因素，在心血管疾病中起重要作用[3]。近期研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥是導(dǎo)致心血管疾病的獨立危險因素[4]。因此對高尿酸血癥患者，減少血尿酸的增加，就可以較好地保護(hù)血管內(nèi)皮，減少心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險。赤蒼藤(ErythropalumscandensBl.)為鐵青樹科植物，其莖入藥，化學(xué)成分主要有蘇門樹脂酸、桂皮酸松柏醇酯、酚類及三萜類化合物[5]，具清熱利濕、祛風(fēng)活血的功效，用于治療風(fēng)濕骨病、肝膽濕熱、尿急、尿痛、小便不利等癥[6]。本研究課題組前期實驗證實了赤蒼藤能抑制血尿酸的增加，對小鼠高尿酸血癥模型有較好的治療作用[7]。本實驗在此基礎(chǔ)上采用較為常用的腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇灌胃法建立大鼠高尿酸血癥(HUA)模型[8-10]，通過對血清尿酸(SUA)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、肌酐、黃嘌呤氧化酶(XOD)的變化研究，探討赤蒼藤醇提物對高尿酸血癥模型大鼠血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠，體重190～230 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(桂)2014-0010。

1.2 試劑與藥物 腺嘌呤(Aladdin公司，批號：20170724)；苯溴馬隆片(常州康普藥業(yè)有限公司，批號:1011013)；鹽酸乙胺丁醇片(廣東臺城制藥股份有限公司，批號:20170201)；尿酸測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20170609);黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20170725);肌酐測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:20170717);一氧化氮(NO)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號:20170821);內(nèi)皮素-1(ET-1)測試盒(上海容創(chuàng)生物技術(shù)有限公司，批號：20170504)；赤蒼藤(Erythropalum scandens Bl.)莖粉末(廣西赤蒼藤生物科技有限責(zé)任公司)。

1.3 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；酶標(biāo)儀(Thermo公司)；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.4 藥物溶液配制 赤蒼藤醇提物：稱取赤蒼藤粉末100 g，用75%乙醇加熱回流提取，抽濾共3次，將所得濾液混合后，濃縮干燥得浸膏。使用浸膏配制赤蒼藤醇提物中劑量和低劑量組，按照生藥量計算，濃度分別為200 mg/mL和100 mg/mL；腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇混懸液：稱取腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇適量，加蒸餾水定容，配置為腺嘌呤20 mg/mL+鹽酸乙胺丁醇50 mg/mL的混合溶液；苯溴馬隆溶液：稱取苯溴馬隆適量，加生理鹽水定容配置為2 mg/mL苯溴馬隆溶液。

1.5 動物造模及給藥 SD雄性大鼠HUA模型參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-10]的方法，隨機(jī)抽取SD大鼠50只，分為5組，每組10只，分別為正常組、模型組、苯溴馬隆組、赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組。除正常組外，大鼠用腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇混懸液灌胃法造模，每只大鼠按腺嘌呤100 mg/kg+鹽酸乙胺丁醇250 mg/kg灌胃；正常組和模型組大鼠分別給予3 mL 0.9%氯化鈉溶液；苯溴馬隆組，每只大鼠按10 mg/kg的苯溴馬隆溶液灌胃。赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組，每只大鼠按1000 mg/kg和500 mg/kg的赤蒼藤醇提物溶液灌胃；連續(xù)給藥28 d。每周稱體重2次，根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量。

1.6 生化指標(biāo)檢測 末次給藥2 h后，大鼠尾靜脈采集血液，取血清，采用放射免疫法測定血清ET-l的含量，采用紫外分析法測定血清尿酸(SUA)、黃嘌呤氧化酶(XOD)、NO、肌酐的含量，均按試劑盒說明檢測。

2 結(jié)果

2.1 對高尿酸血癥模型大鼠SUA、XOD和血清肌酐的影響 與正常組比較，模型組SUA、XOD、肌酐水平顯著升高(P<0.05)；與模型組比較，赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組大鼠血清SUA含量、XOD活力和肌酐含量均明顯降低(P<0.05)，苯溴馬隆組SUA含量明顯降低(P<0.05)。見表1。

表1 赤蒼藤醇提物對HUA大鼠SUA、XOD和肌酐水平的影響

2.2 對高尿酸血癥模型大鼠ET-1、NO含量的影響 與正常組比較，模型組ET-l 含量顯著升高(P<0.05)，NO含量明顯降低(P<0.05)。與模型組相比，赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組大鼠血清ET-1含量均明顯降低(P<0.05，P<0.05)，血清NO含量均顯著升高(P<0.05)，苯溴馬隆組大鼠血清ET-1含量明顯降低(P<0.05)。見表2。

表2 赤蒼藤醇提物對HUA大鼠血清ET-1、NO含量的影響

3 討論

在正常生理活動時，血管內(nèi)皮具有血管屏障、內(nèi)分泌功能、抗血栓、調(diào)節(jié)血管張力等多種生理功能。血管的張力是由血管擴(kuò)張物質(zhì)和血管收縮物質(zhì)來調(diào)節(jié)。NO是血管內(nèi)皮釋放的重要血管舒張因子，ET-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管收縮因子[11]。當(dāng)NO和ET-1處于不平衡狀態(tài)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，引發(fā)心血管疾病和動脈粥樣硬化[12]。尿酸濃度增高時，部分尿酸鹽形成結(jié)晶沉積于管壁，造成血管內(nèi)皮的損傷，還能介導(dǎo)血管炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，致使NO和ET-1不平衡，導(dǎo)致血管收縮功能亢進(jìn)[13]；尿酸和尿酸鹽結(jié)晶還會在腎臟沉積，引起氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)等，導(dǎo)致腎臟功能受損[14]。

本實驗選擇NO、ET-1作為評價血管內(nèi)皮功能的指標(biāo)，選擇肌酐作為評價腎臟功能的指標(biāo)。實驗結(jié)果顯示，與模型組相比，苯溴馬隆能顯著降低SUA的含量(P<0.05)，但是對高尿酸血癥導(dǎo)致的血清肌酐含量升高和NO水平減低的抑制作用不顯著，說明苯溴馬隆可以較好地降低血尿酸，但對血管內(nèi)皮的損傷和腎損傷保護(hù)作用不顯著；與模型組相比，赤蒼藤醇提物能夠顯著抑制XOD黃嘌呤氧化酶的活性(P<0.05)，降低SUA的含量(P<0.05)，顯著抑制高尿酸血癥導(dǎo)致肌酐和ET-l 含量升高以及NO水平降低，說明赤蒼藤醇提物對高尿酸血癥導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷和腎損傷具有較好的保護(hù)作用。