代艷文 吳大富

摘要：目的? 了解宜昌地區(qū)婦女不同亞型人乳頭瘤病毒（HPV）的感染狀況及感染人群特征，為該市HPV感染的篩查及相關疾病的防治提供流行病學依據。方法? 選取2019年1～12月三峽大學附屬仁和醫(yī)院進行HPV檢測的3354例患者，應用PCR反向點雜交檢測擴增產物與包被有特異性探針膜雜交，采用堿性凝酸酶系統(tǒng)定性檢測，對宮頸脫落細胞中21種HPV基因型進行分型，并分析不同年齡段HPV亞型感染情況。結果? 3354份標本中，共檢出HPV陽性標本742份，總感染率為22.12%。宜昌地區(qū)婦女易感人群平均年齡為（39.52±11.30）歲，不同年齡段均有HPV感染，以35～45歲年齡段的女性居多。HPV基因型以單一型感染為主（73.32%），排前3位HPV高危亞型為HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%）;低危亞型主要以HPVCP8304（6.47%）為主。結論? 宜昌地區(qū)婦女HPV感染的年齡主要集中于35～45歲年齡段，以單一型感染為主，其中高危型HPV52、HPV58和HPV16為HPV感染的主要亞型。

關鍵詞：人乳頭瘤病毒;單一型感染;宮頸癌

Abstract：Objective? To understand the infection status of different subtypes of human papillomavirus （HPV） among women in Yichang and the characteristics of the infected population， so as to provide an epidemiological basis for the screening of HPV infection and the prevention and treatment of related diseases in the city.Methods? 3354 patients who were tested for HPV in Renhe Hospital Affiliated to China Three Gorges University from January to December 2019 were selected. PCR reverse dot hybridization was used to detect the hybridization of the amplified product with the membrane coated with a specific probe， and the alkaline coagulase system was used for qualitative analysis detection， classification of 21 HPV genotypes in cervical exfoliated cells， and analysis of HPV subtype infection in different age groups.Results? Among the 3354 specimens， 742 HPV-positive specimens were detected， and the total infection rate was 22.12%. The average age of susceptible women in Yichang area was （39.52±11.30） years old， and HPV infections occur in different age groups， with the majority of women in the 35-45 age group. HPV genotypes were mainly single infection （73.32%）， and the top 3 high-risk HPV subtypes were HPV52 （16.19%）， HPV58 （12.05%）， HPV16 （10.07%）; the low-risk subtypes were mainly HPVCP8304 （6.47 %）.Conclusion? The age of HPV infection among women in Yichang area was mainly concentrated in the age group of 35 to 45 years old， and the single infection was the main type. Among them， high-risk HPV52， HPV58 and HPV16 were the main subtypes of HPV infection.

Key words：Human papillomavirus;Monotype infection;Cervical cancer

宮頸癌（cervical carcinoma）是我國女性第2常見惡性腫瘤，每年有20萬新發(fā)宮頸癌患者和10多萬患者死亡，嚴重危害我國女性健康。根據HPV致病性可分為高危型和低危型，高危型主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68型等，低危型主要有6、11、42、43、44、和81型等。高危型HPV感染與宮頸癌和宮頸上皮內瘤變（CIN）有關，低危型HPV感染則主要導致低度鱗狀上皮內病變和良性生殖器疣，但致癌型在不同地區(qū)間有一定差異。本研究對我院就診的3354份宮頸脫落細胞中21種HPV基因型進行分型檢測，了解宜昌地區(qū)不同亞型HPV的感染狀況及感染人群特征，為該市HPV感染的篩查及相關疾病的防治提供流行病學依據。

1對象與方法

1.1研究對象? 選取2019年1～12月三峽大學附屬仁和醫(yī)院檢驗科檢查的3354例患者，年齡17～70歲，其中<25歲161例、25～35歲1079例、35～45歲1076例、45～55歲834例、≥55歲204例。

1.2方法

1.2.1儀器試劑? 檢測所用試劑盒及儀器均由潮州凱普生物化學有限公司提供。

1.2.2標本采集? 由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，將宮頸刷置于宮頸口，輕輕搓動宮頸刷使其順時針轉5圈，慢慢取出宮頸刷，將其放入有患者編號的取樣管中，取樣管內已加有專用細胞保存液，擰緊瓶蓋，送檢樣本，如不能馬上送檢樣本，于4 ℃保存，并在2個星期內進行檢測，可在-20 ℃長期保存。

1.2.3檢測方法? ①DNA分離提?。菏紫龋”４嬗袑m頸細胞的細胞保存液0.5 ml，以14000 rpm離心1 min，棄上清液后，利用潮州凱普生物化學有限公司的細胞裂解液提取DNA，最后，取1 μl抽提好的DNA樣本作為模板進行PCR擴增，剩余DNA樣品存貯于-20°C備用。②PCR擴增：反應體系為25 μl，包括PCR混合液23.25 μl，DNA聚合酶0.75 μl，DNA模板1 μl，擴增條件是95℃ 9 min，95 ℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，GOTO2，40 times，72℃ 5 min。③雜交過程：取出PCR產物20μl在95 ℃加熱5 min，然后立即冰水浴至少2 min;在雜交孔內加入1 ml預熱至45 ℃的雜交液，蓋上蓋板溫育至少2 min后開泵排出預雜交的雜交液，然后關泵;把制備好的已變性的DNA樣品溶液加入0.5 ml預熱至45 ℃的雜交液，混勻，然后加在薄膜上，蓋上蓋板溫育至少10 min后，開泵進行導流雜交;在45 ℃條件下，用預熱至45 ℃的雜交液沖洗膜3次，0.8 ml/次，關掉水泵。④顯色過程：設定雜交儀溫度為25 ℃，用0.5 ml封阻液封閉膜，開泵排出封阻液，然后關泵，再用0.5 ml封阻液封閉5 min;開泵，泵出封阻液，關泵;加入0.5 ml酶標液，溫育3～5 min;開泵泵出所有溶液，設定溫度為36 ℃，用溶液A徹底洗膜4次，0.8 ml/次;加入0.5 ml顯色底物，蓋上蓋板顯色3～5 min，開泵泵出顯色底物;用溶液B洗膜3次，1 ml/次，再用2 ml蒸餾水漂洗;關泵，取出雜交膜放在吸水紙上，1 h內分析結果。⑤結果判定：檢測結果陽性點為清晰可見的藍紫色圓點[21種基因型分別為：6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68和CP8304（81）]。

1.3統(tǒng)計分析? 采用Excel軟件分析，計數資料以（n）和（%）表示。

2結果

2.1不同年齡段HPV亞型感染情況分析? 宜昌地區(qū)婦女易感人群平均年齡為（39.52±11.30）歲，不同年齡段均有HPV感染，以35～45歲年齡段的女性居多，見表1。

2.2 HPV亞型感染分析? 在3354份標本中，共檢出HPV陽性標本742份（22.12%），HPV基因型以單一感染為主，有544份（73.32%），二重感染142份（19.14%），三重感染45份（6.06%），四重感染11份（1.48%），見表2。在21種HPV亞型中有20種亞型被檢測出，僅HPV35亞型未被檢測出。在20種被檢測出來的HPV亞型中，高危HPV優(yōu)勢亞型依次為HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%）、HPV51（8.99%）、HPV53（7.19%）;低危HPV亞型以HPVCP8304（6.47%）為主，見圖1。

3討論

HPV病毒是一種環(huán)狀雙鏈DNA病毒，包含3個功能區(qū)，分別為調控染色體外的DNA復制的早期編碼區(qū)E區(qū)、形成病毒衣殼的結構成分的L區(qū)和非編碼區(qū)。其中E區(qū)編碼E6、E7等，是HPV最主要的致癌基因，參與病毒在宿主細胞中的復制、轉錄、翻譯等功能;L區(qū)具有編碼組成病毒衣殼的后期蛋白質的功能[1]。HPV感染大多都是一過性的，90%的人群感染后在1～2年內都能清除，只有少數人群由于自身免疫力低下而無法清除，導致持續(xù)感染，進而發(fā)展成為CIN，最終發(fā)展為宮頸癌。因此對不同亞型HPV的感染狀況及感染人群特征進行分析，有利于了解HPV感染的主要亞型和易感人群，對HPV感染引起的相關疾病的早發(fā)現早治療，降低宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一定的意義。

本研究對來我院檢查的婦女的3354份宮頸標本進行21種HPV亞型檢測，結果發(fā)現3354份標本中，共檢出HPV陽性標本742份，總感染率為22.12%。宜昌地區(qū)婦女易感人群平均年齡為（39.52±11.30）歲，不同年齡段均有HPV感染，以35～45歲年齡段的女性居多，提示35～45歲年齡段女性是HPV易感人群。HPV感染率以單一型感染為主（73.32%），四重感染占比較少。研究顯示，我國HPV感染前3位亞型主要為HPV16、52、58[2-4]，其中HPV52、58型感染轉陰率最低[5]。本研究中前3位高危HPV優(yōu)勢亞型依次為HPV52（16.19%）、HPV58（12.05%）、HPV16（10.07%），HPV52和HPV58的檢出率比HPV16的檢出率高，與陳春寶等[6]研究結果一致。低危型HPV亞型以HPVCP8304亞型感染為主（6.47%），與劉存芬[7]報道一致。本研究雖與既往研究趨勢一致[6，7]，但與檢出數據還存在較大的差異，除了HPV檢測試劑盒的覆蓋范圍不同造成的差異之外，也表明了HPV基因型感染存在地域型差異，可能與區(qū)域環(huán)境、生活習慣、工作壓力及文化背景等存在差異有關。

綜上所述，宜昌地區(qū)婦女HPV感染的年齡主要集中于35～45歲年齡段，以單一型感染為主，其中高危型HPV52、HPV58和HPV16為HPV感染的主要亞型。

參考文獻：

[1]張嬋，孫媛，劉銘，等.HPV病毒感染與宮頸病變發(fā)生發(fā)展關系的研究進展[J].中國微生態(tài)學雜志，2016，28（7）：861-864.

[2]范成嬌，李靜，魯愛枝.HPV52/58感染與女性宮內病變發(fā)生風險的相關性研究[J].中國婦幼保健，2015（30）：841-843.

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[4]吳云燕，裘明利.女性高危型人乳頭瘤病毒感染分布情況研究[J].中國實用婦科與產科雜志，2017，33（1）：122-124.

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[6]陳春寶，蘇震，田昕，等.海南2939例女性HPV感染現狀及基因型分布[J].中國熱帶醫(yī)學，2017，17（9）：904-907.

[7]劉存芬.安寧市人乳頭瘤病毒檢測及感染人群特征分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2017，14（3）：370-372.

收稿日期：2020-04-28;修回日期：2020-05-06

編輯/杜帆