謝春梅，武海萍，馬雪萍，周國華,2

綜 述

用于臨床新型冠狀病毒核酸檢測的分子診斷新技術

謝春梅1，武海萍1，馬雪萍1，周國華1,2

1. 南京大學醫(yī)學院附屬金陵醫(yī)院(東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院)臨床藥學科，南京 210002 2. 南方醫(yī)科大學藥學院，廣州 510515

目前新型冠狀病毒肺炎(corona virus disease 2019, COVID-19)在全球仍呈現(xiàn)大流行趨勢，該病潛伏期長、傳染性強，給全世界人民的健康安全帶來嚴重威脅。新型冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)核酸檢測作為COVID-19確診的重要依據(jù)之一，在疫情防控工作中發(fā)揮了巨大的作用。截至2020年8月17日，國家藥品監(jiān)督管理局已應急批準15個新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，其中10個試劑盒是以逆轉錄-實時熒光定量PCR (RT-qPCR)為主要技術原理，其余試劑盒分別采用了不同于RT-qPCR的5種分子診斷技術。本文對上述檢測試劑盒所使用的技術原理、反應時間、優(yōu)缺點等方面進行了介紹，以期為COVID-19及類似傳染病的快速篩查、確診、防控提供更多的方案思路。

新型冠狀病毒；核酸檢測；分子診斷

2019年12月，湖北省武漢市報道了數(shù)例以咳嗽、發(fā)燒、肺部感染為主要癥狀的不明原因肺炎，且存在明顯的人傳人現(xiàn)象。2020年1月經(jīng)分離鑒定，確認導致該病的病原體為新型冠狀病毒[1]。2月11日，國際病毒分類學委員會將該病毒正式命名為SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome co-ronavirus 2)，同日，世界衛(wèi)生組織將其引發(fā)的新型冠狀病毒病命名為COVID-19 (corona virus disease 2019)。截至2020年8月17日，中國累計確診病例9萬例，現(xiàn)存確診614例，現(xiàn)存無癥狀感染者356例。雖然疫情在國內得到了有效控制，但近日美國、巴西等國家的感染人數(shù)暴增，全球累計確診病例已超過2500萬例，死亡人數(shù)接近85萬人。COVID-19已具有全球大流行趨勢[2]，疫情的爆發(fā)使全世界人民的健康安全及公共衛(wèi)生財產面臨巨大挑戰(zhàn)。

研究報道，SARS-CoV-2是含有包膜的正義單鏈RNA病毒，此前在人體中從未被發(fā)現(xiàn)，是一種全新的β屬冠狀病毒。SARS-CoV-2基因組約由3萬個核苷酸組成，與人類SARS-CoV的核苷酸具有82%的同源性[3]，主要含有6個功能性開放閱讀框(open reading frame, ORF)/蛋白編碼區(qū)：ORF1a/b、S、E、M、N[3](圖1)。SARS-CoV-2侵入人體宿主細胞的方式與人SARS-CoV一致，由細胞膜上血管緊張素轉換酶2 (ACE2)受體介導[4]，ACE2受體廣泛存在于口腔、呼吸道和結腸等部位的黏膜細胞，因此無防護措施下與外界環(huán)境相通的口腔、呼吸道、眼瞼等部位極易因暴露而感染[5]。

此次COVID-19潛伏期較長、傳染性強，疫情爆發(fā)期間亟需開發(fā)快速、準確、簡便的診斷技術，早確診、早隔離、早治療可幫助病人被盡早治愈。初期研究人員通過高通量測序技術最先檢出病毒并將其作為確診途徑[6]，但該技術成本高且費時，不滿足大規(guī)模檢測的需求，而核酸檢測技術具有高靈敏、高特異、結果可定量等優(yōu)勢，為COVID-19的確診及疫情防控提供了極大幫助，截至2020年8月17日，國家藥品監(jiān)督管理局應急批準的23個新型冠狀病毒檢測產品中囊括了15個核酸檢測試劑盒。本文主要綜述了目前國內SARS-CoV-2核酸檢測技術的研究進展及應用現(xiàn)狀，以期為COVID-19的快速篩查、確診提供更多的方案思路，同時提高公共衛(wèi)生領域對COVID-19等傳染性疾病的防控能力。

1 逆轉錄—實時熒光定量PCR (RT- qPCR)核酸檢測技術

美國生物化學家Kary Mullis于1985年首次提出聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)技術——一種在體外擴增特異DNA片段的技術[7]。SARS-CoV-2為RNA病毒，需先將目標片段逆轉錄為cDNA再進行PCR擴增，首先針對目標片段設計一對上下游引物，在DNA聚合酶的作用下，通過熱變性、退火、延伸等步驟按照半保留復制的機制完成新的DNA合成，新合成的DNA也可以作為模板，不斷重復這一過程，目標片段的合成量將呈指數(shù)級增長。實時熒光定量PCR技術在普通PCR技術的基礎上增加了化學發(fā)光物質，最常用的為TaqMan探針法，原理如圖2所示，探針的5?端標記熒光基團，3?端標記淬滅基團，在熒光諧振能量傳遞(fluo-rescence resonance energy transfer, FRET)效應下，熒光呈現(xiàn)淬滅狀態(tài)。當目標片段擴增時，酶對探針進行切割，熒光基團遠離淬滅基團，發(fā)出熒光，利用專門儀器測定熒光到達一定閾值所需的循環(huán)數(shù)(值)即可對初始模板進行精確定量。

由于RNA病毒容易發(fā)生變異，RT-qPCR技術用于檢測SARS-CoV-2時一般會在ORF1ab、S、N、E 等基因中選取多個靶標進行檢測，防止出現(xiàn)漏檢錯檢，從而提高檢測準確度。RT-qPCR技術可以高靈敏、高特異地完成SARS-CoV-2的檢測，易于在臨床上推廣普及，成為《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中首推的檢測方法[8]。截至2020年8月17日，國家藥監(jiān)局已應急批準10個以RT-qPCR技術為主要原理的核酸檢測試劑盒，其中大部分試劑盒選擇SARS-CoV-2的多個基因作為檢測靶標，以提高檢測準確率。

然而，在臨床實際診斷過程中，出現(xiàn)了RT-qPCR檢測結果為假陽性及假陰性的問題，分析產生假陽性的原因如下：(1)樣本轉運、提取過程中被污染；(2)引物設計不當產生非特異性擴增；(3)閾值設置過低導致假陽性判讀結果；而產生假陰性的原因如下：(1)病毒基因組變異，影響與原先設計引物/探針的結合；(2)感染早期，采樣部位所含病毒量低于檢測限；(3)樣本轉運、保存過程不規(guī)范；(4)檢測人員操作不當、儀器設備等因素；(5)試劑存在質量問題或者不同試劑盒提取擴增效率不一致；(6)閾值設置過高導致假陰性判讀結果。據(jù)報道，目前RT-qPCR技術檢測SARS-CoV-2感染的準確率僅達到30%~50%[9]，因此亟需研究開發(fā)出準確度更高、效果更好的核酸檢測技術。

2 非RT-qPCR核酸檢測技術

目前針對SARS-CoV-2的核酸檢測大多通過RT-qPCR技術進行，由于需要專業(yè)的技術人員及精密的溫控設備，不斷升降溫導致反應時間過長，檢測速度較慢且存在假陽性及假陰性問題，世界衛(wèi)生組織已于2020年2月明確指出“開發(fā)準確并且使用簡便的檢測方法是當務之急”。我國國家藥品監(jiān)督管理局為進一步滿足疫情防控的需求，已應急批準以下5種原理不同于RT-qPCR技術的核酸檢測試劑盒，各試劑盒所使用的檢測技術和靶標如表1所示。

圖1 SARS-CoV-2基因組結構模式及常見的引物擴增位置

橙色位置為擴增片段擴增位置。

圖2 實時熒光定量PCR技術(TaqMan探針法)原理

2.1 恒溫擴增芯片技術

相比于需要不斷升降溫的RT-qPCR技術，核酸恒溫擴增技術在恒定溫度下即可進行擴增反應，操作簡單、快速、性價比高，且靈敏度和特異性與PCR反應相當。環(huán)介導的恒溫擴增技術[10~12](loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是2000年開發(fā)的一種新穎的恒溫核酸擴增技術，其原理是針對目標基因的6個區(qū)域設計4種特異性引物，利用鏈置換DNA聚合酶在等溫條件(63 ℃左右)下保溫30~60 min，即可完成核酸擴增反應，具體原理如圖3所示。

成都博奧晶芯生物科技有限公司在2019年通過將LAMP恒溫擴增技術與蝶式微流控技術相結合[13,14]，實現(xiàn)同時檢測6種豬病毒的目的，在此研究基礎上，該公司設計出全球首個能在1.5 h內檢測包括SARS-CoV-2、甲型流感病毒、新型甲型H1N1流感病毒(2009)、甲型H3N2流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒共6項呼吸道病毒的核酸檢測芯片試劑盒，通過熒光進行實時檢測。此前的SARS- CoV-2核酸檢測產品均只能針對SARS-CoV-2單一指標進行檢測，而該試劑盒可以針對多個靶標實現(xiàn)多重檢測，能夠有效快速地區(qū)分普通流感患者與COVID-19患者，為臨床上大量的疑似感染患者提供更加簡便快速的診斷，實現(xiàn)精準診斷、精準治療。

綜合對比LAMP恒溫擴增技術與蝶式微流控技術，恒溫擴增芯片技術步驟簡單、擴增高效、有較高的靈敏度及特異性、樣品用量少，利用微流控分區(qū)可對多項指標同時進行檢測，有效降低醫(yī)務人員感染的風險。但是該技術沒有將核酸提取步驟與擴增、檢測流程集成，仍需依靠其他設備或人工提取病毒核酸，并未完全實現(xiàn)“樣本進、結果出”的集成化和全自動化。

2.2 SAT-RNA實時熒光恒溫擴增技術

SARS-CoV-2檢測存在的“假陰性”問題與樣本采集、保存運輸、預處理、核酸提取、擴增檢測等過程息息相關，提取出高質量的病毒核酸可有效改善這一問題。SARS-CoV-2為RNA病毒，傳統(tǒng)的濾膜吸附洗脫提取會損失部分樣本，特異性靶標捕獲技術(磁珠法) (specific target capture technology (mag-netic bead method))[15]可以提取到高純度RNA，通過在磁珠表面標記Oligo (dT)，與含有互補Oligo (dA)的特異性捕獲核酸配對結合，若樣本中存在待測靶標，捕獲探針將會與其互補配對，最終利用磁鐵吸附磁珠，可特異性提取出待測靶標，原理如圖4所示。

上海仁度生物科技有限公司采用獨特的樣本保存液對RNA病毒樣本進行常溫保存，減少樣本損失，然后通過特異性靶標捕獲技術以及SAT-RNA實時熒光恒溫擴增技術(simultaneous amplification and testing-RNA technology)開發(fā)了高通量、全自動一體化的SARS-CoV-2檢測平臺(Auto-SAT新冠自動檢測平臺)。在42 ℃恒溫條件下，靶標RNA在M-MLV逆轉錄酶的作用下合成帶T7啟動子的雙鏈cDNA，T7 RNA聚合酶以該雙鏈DNA為模板進行轉錄，每個cDNA分子可以轉錄出100~1000拷貝的RNA，合成的RNA與分子信標結合，釋放出熒光，通過高分辨率的分子信標檢測技術來監(jiān)控擴增循環(huán)情況，可完全實現(xiàn)“樣本進、結果出”的自動化檢測，具體原理如圖5所示。

表1 國家藥品監(jiān)督管理局批準的非RT-qPCR技術的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒

圖3 環(huán)介導等溫擴增(LAMP)技術原理

A：LAMP外部引物F3/B3和內部引物FIP/BIP與靶標的6個區(qū)域互補；B：恒溫擴增過程。

與國內其他快速分子診斷平臺相比，該平臺有更高的檢測靈敏度、準確度及特異性，采用雙靶標/雙內標分管模式進行獨立檢測，一次性放置80個樣本并實現(xiàn)連續(xù)上樣，做到病毒核酸提取純化、擴增檢測、結果報告的全程一體化。整個檢測過程在密閉環(huán)境內進行，保證了實驗的生物安全性，降低了檢測人員的感染風險，且全流程標準化操作，無需人工干涉，可排除人為因素引起的結果偏差。

圖4 特異性靶標捕獲技術(磁珠法)原理

同時檢測多個樣本時，Auto-SAT新冠自動檢測平臺90 min后給出第一個結果，后續(xù)每10 min出6個結果，24 h即可檢測700個樣本[16]，適合對大批量樣本進行篩查。雖然該平臺展現(xiàn)出大通量檢測的差異性優(yōu)勢，但需要昂貴的大型設備，若只需要檢測少量樣本，則會導致平均檢測費用較高。同時SAT恒溫擴增檢測技術由于循環(huán)過程復雜，需重復加入多種酶，造成試劑成本相對較高，不適合在疫情一線進行快速現(xiàn)場檢測。

2.3 交叉引物恒溫擴增—實時熒光技術

在某些疫情一線地區(qū)沒有專門的生物安全實驗室及專業(yè)檢測人員，無法對SARS-CoV-2進行快速檢測，杭州優(yōu)思達生物技術有限公司利用交叉引物恒溫擴增技術[17](cross priming amplification, CPA)以及試劑玻璃化技術開發(fā)了EasyNAT 新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒。試劑運輸過程無需冷鏈，配套使用全自動CPA核酸分析儀，能夠快速準確地檢測樣本中的SARS-CoV-2，實現(xiàn)診斷關口前移，確保更好地防控和治療。該產品已在浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院進行了60例臨床驗證，其臨床靈敏度達100%、特異性達100%，優(yōu)于對照的PCR試劑盒[18]。

圖5 SAT-RNA實時熒光恒溫擴增檢測技術

CPA技術共需要設計兩對引物：交叉擴增引物和外圍置換引物[19,20]。將RNA病毒逆轉錄為cDNA樣本后，交叉擴增引物與cDNA中的互補區(qū)域結合，在Bst DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，外圍置換引物與cDNA的前端序列互補，一邊與cDNA形成雙鏈結構一邊置換交叉擴增引物合成的單鏈產物，最終形成兩端帶有交叉引物結合位點的單鏈擴增產物。隨著交叉擴增引物的不斷雜交和延伸，分支狀擴增產物的拷貝數(shù)不斷增加，體系里含有的熒光探針與其結合后發(fā)出熒光，可達到實時檢測的目的，主要原理如圖6所示。

圖6 交叉引物恒溫擴增技術原理

A：帶有交叉引物位點的擴增產物的產生；B：交叉引物擴增最終生成分支狀產物。

SARS-CoV-2具有較高的傳染性，全自動CPA核酸分析儀只需將樣本加入密閉的獨立檢測管，放入儀器中即可快速進行反應，無接觸感染風險，極大地保障了醫(yī)護及檢測人員安全。全自動“傻瓜式”操作可以實現(xiàn)“樣本進、結果出”，對檢測人員的技能要求低。該技術能夠快速、方便、準確地對SARS-CoV-2核酸進行檢測，尤其適用于疫情一線配置薄弱的生物檢測實驗室，但該儀器一次只能檢測兩個樣本，不適合用于疫情嚴重地區(qū)的大規(guī)模檢測篩查。

2.4 雜交捕獲免疫熒光技術

上述幾種方法均需配備專門的檢測設備，無法實現(xiàn)儀器小型化、操作簡單化、報告結果即時化的現(xiàn)場快速檢測，導致COVID-19的確診周期較長。安邦(廈門)生物科技有限公司基于2019年公開的核酸雜交捕獲免疫熒光技術[21]開發(fā)了新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，該技術無需提取純化SARS-CoV-2核酸，無需進行PCR擴增，利用處理液直接裂解病原體并釋放靶核酸，反轉錄為cDNA后，設計能與該核酸片段雜交的探針來捕獲待測樣本中的靶核酸，形成RNA/DNA雙鏈雜交體，該雜交體在免疫熒光層析試紙條上的加樣區(qū)與熒光素標記第一捕獲抗體結合，通過毛細管作用到達檢測區(qū)與第二捕獲抗體結合形成三元復合物，恒溫反應45 min左右對該復合物進行熒光信號識別，可對樣本中SARS-CoV-2的核酸實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測，主要原理如圖7所示。

雜交捕獲免疫熒光技術是一種新型的快速分子診斷技術，一步即可快速檢測病毒、操作簡單、試劑盒所需組分常溫條件下即可儲存運輸、檢測儀器方便攜帶、無需專業(yè)人員及PCR實驗室，一臺儀器一小時最多可測試60份樣本，可實現(xiàn)隨到隨檢的現(xiàn)場快速檢測且不會引起實驗室陽性產物污染。該試劑盒已在3家臨床單位完成670例臨床試驗，臨床靈敏度88.61%，臨床特異性94.92%，總體符合率達92.69%[22]。

圖7 雜交捕獲免疫熒光技術原理

但是該技術只能給出定性結果，無法精確定量；檢測限為500拷貝/mL，靈敏度較低；且不適合用于檢測咽部2 h內用藥的病人。同時不合理的樣本采集、轉運及處理、樣本中病毒含量過低、待檢病原體探針結合位點的較大變異均有可能導致假陰性結果，另外臨床數(shù)據(jù)也顯示不同病程不同階段樣本的陽性率存在不一致的情況。

2.5 聯(lián)合探針錨定聚合測序技術

在抗“疫”前線，高通量測序儀可快速助力未知病原體的鑒定。疫情初期，正是高通量測序第一時間幫助科研人員獲得了SARS-CoV-2的全基因組序列[23]。華大生物科技(武漢)有限公司以聯(lián)合探針錨定聚合測序技術為原理設計了SARS-CoV-2核酸檢測試劑盒，這一技術的具體細節(jié)尚未完全公布。主要步驟如下：首先對樣本進行DNA提取并片段化處理，對DNA片段末端進行修復并加上接頭序列，利用DNA納米球技術擴增，DNA分子錨和熒光探針在DNA納米球上聚合，此過程可通過該公司的自動化樣本制備工作站MGISP系列完成，隨后利用MGIDL-T7全自動樣本加載系統(tǒng)將DNA納米球加載到載片上以完成測序載片的制備，DNBSEQ-T7高通量測序儀對載片上DNA納米球產生的光信號進行采集分析，讀取堿基信息并給出測序結果。

聯(lián)合探針錨定聚合測序技術在DNBSEQ-T7高通量測序儀的幫助下能夠獲得特定的病毒基因組序列，即使病毒基因組序列產生變異，也不影響對整體同源性的比對。該技術可以對核酸檢測呈陰性但臨床癥狀疑似感染的患者提供復檢及混合感染診斷等幫助，同時可對病毒序列提供持續(xù)監(jiān)測，方便科研人員對病毒變異進行研究。

聯(lián)合探針錨定聚合測序技術通過全自動化平臺可對SARS-CoV-2實現(xiàn)快速高效的核酸檢測，靈敏度高、不易漏診錯診、對操作人員要求較低。但其結果也易受多種因素影響，如：(1)未規(guī)范保存樣本、未及時檢測樣本導致的錯檢；(2)檢測環(huán)境溫度過高對結果判讀的影響等。

3 結語與展望

目前我國新型冠狀病毒肺炎疫情已得到較好的控制，局部地區(qū)出現(xiàn)的反彈現(xiàn)象能得到及時處理，武漢等地區(qū)大范圍的篩查工作也有序展開，但每天仍有數(shù)例境外輸入病例及無癥狀感染者，個人防護仍需重視。目前針對新型冠狀病毒肺炎最有效的防治措施仍是早確診、早隔離、早治療，這需要快速、準確、簡便的檢測技術支持。除了新冠病毒的核酸檢測技術，國家藥品監(jiān)督管理局還批準了8個新冠病毒特異性抗體檢測試劑盒，主要為IgM和IgG兩類。IgM抗體在免疫應答中首先分泌，一經(jīng)感染快速產生，但維持時間短，只適合診斷早期感染；IgG抗體屬于記憶性抗體，在機體再次產生免疫應答時產生，產生時間較晚，維持時間長，可提高診斷準確性。該類基于血清學的檢測方法無需特殊儀器、用時短，適合對大規(guī)模人群進行初步篩查，但檢測靈敏度及特異性與機體感染時長密切相關，對潛伏期及感染初期的病例容易漏診，因此不適合作為COVID-19確診和排除的單一途徑，臨床診斷標準仍需以核酸檢測結果為主要參考。

本文針對國內SARS-CoV-2核酸檢測的分子診斷新技術作了簡單綜述，高靈敏、高特異、可定量的RT-qPCR技術是臨床診斷的“金標準”，使用高質量試劑盒、提高操作熟練度可減少假陽性及假陰性問題，該技術仍然是臨床上最為廣泛使用的技術；由于普通流感與COVID-19的初期癥狀相似，恒溫擴增芯片技術可同時檢測6種呼吸道病毒，快速診斷或排除疑似感染患者，減少醫(yī)院內的交叉感染；聯(lián)合探針錨定聚合測序技術和SAT-RNA實時熒光恒溫擴增技術通量大，能實現(xiàn)全自動化檢測，適合對大范圍樣本進行篩查，且前者可監(jiān)測病毒突變；交叉引物恒溫擴增——實時熒光技術雖可實現(xiàn)全自動化，但通量小，適合在疫情一線地區(qū)進行快速檢測；雜交捕獲免疫熒光技術所需儀器方便攜帶，檢測過程快速簡便，能夠滿足隨到隨檢的現(xiàn)場即時檢測(point-of-care testing, POCT)。本文介紹的每一種方法各有其優(yōu)缺點(表2)，可根據(jù)檢測人群及檢測目的的不同選擇合適的檢測方法。

隨著科學技術的不斷發(fā)展，研究人員也在不斷開發(fā)更多用于臨床檢測的分子診斷新技術，如微滴式數(shù)字化PCR(droplet digital PCR, ddPCR)技術[24,25]、重組酶聚合酶擴增(recombinase polymerase ampli-fication, RPA)技術[26]、基于CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13系統(tǒng)的核酸檢測技術[27,28]等。ddPCR技術將水相溶液樣本封裝為數(shù)萬個納升體積大小的微液滴，經(jīng)過PCR擴增后，含有待測靶標的微液滴產生熒光信號，無需標準品即可實現(xiàn)絕對定量。該技術檢測靈敏度高，在低病毒載量的樣本檢測中更有優(yōu)勢且能給出樣本中的病毒載量數(shù)值。目前已有公司開發(fā)出試劑盒，檢測下限低至3拷貝/反應，但只限于科研使用，若該技術獲得批準用于臨床診斷，可對微量病毒攜帶者進行篩查，大大降低漏檢率及錯檢率。RPA技術被認為是可以替代PCR的核酸等溫擴增技術，該技術在37 ℃左右依賴重組酶的鏈置換活性即可對模板進行擴增，反應迅速且靈敏度與PCR相當，目前尚無將RPA技術單獨用于檢測SARS-CoV-2的報道，但張鋒團隊[29]將其與CRISPR-Cas13偶聯(lián)，開發(fā)出SHERLOCK (specific high-sensitivity enzymatic reporter unlocking)技術，利用CRISPR-Cas13a在向導序列的介導下與靶標結合時被激活的附屬無特異性的RNA酶活性，切割體系中的單鏈RNA報告探針，發(fā)出熒光，實現(xiàn)特異性檢測，靈敏度可達10拷貝/反應。未來高靈敏度、高特異性、可定量、用時短、可攜帶的多重檢測將成為分子診斷新技術的研究重點，為臨床預防及控制傳染病提供更加快捷準確的診斷方式。

表2 臨床SARS-CoV-2核酸檢測的分子診斷技術總結對比

“?”：暫未公布具體數(shù)據(jù)。

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New molecular diagnostic technologies for clinical detection of SARS-CoV-2

Chunmei Xie1, Haiping Wu1, Xueping Ma1, Guohua Zhou1,2

The severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) has caused an ongoing pandemic of new coronavirus pneumonia (corona virus disease 2019, COVID-19). The virus has a long incubation period and strong infectivity, which poses a major threat to global health and safety. Detection of SARS-CoV-2 nucleic acid lies at the center of rapid detection of COVID-19, which is instrumental for mitigation of the ongoing pandemic. As of August 17, 2020, The National Medical Products Administration in China has approved 15 new coronavirus nucleic acid detection kits, 10 kits of which are based on reverse transcription-real-time quantitative PCR (RT-qPCR) technology. The remaining kits use five molecular diagnostic technologies different from RT-qPCR. This article reviews the principles, reaction time, advantages and disadvantages of above 15 detection kits, in order to provide references for rapid screening, diagnosis, prevention and control of COVID-19 and similar infectious diseases.

novel coronavirus; nucleic acid detection; molecular diagnostic technology

2020-06-22;

2020-08-19

國家自然科學基金項目(編號：61871403)和江蘇省杰出青年基金項目(編號：BK20180005)資助[Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.61871403), and Jiangsu Provincial Science Fund for Distinguished Young Scholars (No. BK20180005)]

謝春梅，在讀碩士研究生，專業(yè)方向：分子診斷。E-mail: 15151868313@163.com

周國華，博士，研究員，研究方向：分子診斷。E-mail: ghzhou@nju.edu.cn

10.16288/j.yczz.20-189

2020/9/10 7:18:21

URI: https://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20200908.1130.002.html

(責任編委: 謝建平)