楊浪，陳愷，王波娜，廖朝選，魏杰，謝源

（1.貴州省分析測(cè)試研究院，貴陽(yáng) 550014； 2.貴州健安德科技有限公司，貴陽(yáng) 550014）

唑啉草酯（Pinoxaden）是一種新苯基吡唑啉類除草劑，具有殺草譜較寬、除草效果好、對(duì)環(huán)境友好的特點(diǎn)，而且雜草對(duì)其較難產(chǎn)生抗性。唑啉草酯與其它傳統(tǒng)除草劑無(wú)交互抗性，是防除麥田禾本科雜草藥劑中安全性最高的農(nóng)藥之一［1］。炔草酯（Clodinafop-propargyl）是芳氧苯氧基丙酸類（AOPP）專門防除禾本科雜草的除草劑，具有吸收快、起效快、耐雨水沖刷、低溫下穩(wěn)定的特點(diǎn)［2］。兩種農(nóng)藥對(duì)禾本科植物都有優(yōu)異的防治效果，同時(shí)各具特點(diǎn)，混配后對(duì)小麥田雜草預(yù)防效果良好［3］，當(dāng)前在我國(guó)已有應(yīng)用。農(nóng)藥應(yīng)用于田間后，可能因隨雨水徑流、土壤淋溶等進(jìn)入自然水體，影響水中生物生長(zhǎng)，從而造成水生態(tài)系統(tǒng)風(fēng)險(xiǎn)，分析兩種農(nóng)藥在水中的殘留量，對(duì)評(píng)估農(nóng)藥產(chǎn)生的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)非常必要［4–5］。

關(guān)于兩種農(nóng)藥的分析，俞霖潔等［6］、謝俊婷等［7］分別使用乙腈–水、乙腈–0.01%磷酸溶液建立了同時(shí)測(cè)定唑啉草酯和炔草酯含量的高效液相色譜分析方法；潘靜等［8］、楊聞翰等［9］采用高效液相色譜法分別測(cè)定了炔草酯和唑啉草酯，郭玉香［10］采用電子捕獲檢測(cè)器氣相色譜法測(cè)定了麥田土壤中的炔草酯。農(nóng)藥在農(nóng)作物及土壤中的殘留量通常較低，高效液相色譜分析法的檢出限較難滿足分析要求，液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法是常用于痕量農(nóng)藥殘留的分析手段［11–12］，具有更高的靈敏度。井靜等［13］利用液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定了小麥和麥稈中的炔草酯；徐瀟穎等［14］利用液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行了炔草酯在蔬菜中的殘留分析。關(guān)于水中唑啉草酯和炔草酯的分析目前未見報(bào)道。

筆者以甲醇–0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，建立了同時(shí)測(cè)定水中唑啉草酯和炔草酯含量的液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，可用于唑啉草酯和炔草酯相關(guān)產(chǎn)品的水生毒性試驗(yàn)濃度測(cè)定與水中農(nóng)藥殘留分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilent 1260–G6465B 型，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

電子天平：XSE105DU 型，梅特勒–托利多儀器（中國(guó)）有限公司；

唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度為99.19%，國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心；

炔草酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度為99.19%，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer 公司；

甲醇：色譜純，批次為SHBK6874，德國(guó)默克公司；

10%唑啉草酯·炔草酯可分散油懸浮劑：唑啉草酯、炔草酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為5%，貴州省分析測(cè)試研究院；

地表水樣品：曝氣生態(tài)水，充氧并經(jīng)活性炭脫氯48 h，pH=7.8；

實(shí)驗(yàn)用水：去離子水，自制。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取0.010 1 g 唑啉草酯和0.010 2 g 炔草酯于稱量瓶中，用色譜純甲醇少量多次溶解后，將其定量轉(zhuǎn)入100 mL 容量瓶中，定容至標(biāo)線，搖勻，得到兩種農(nóng)藥質(zhì)量濃度均為100 mg／L 的混合標(biāo)準(zhǔn)母液。然后分別量取不同體積的母液，用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為0.10，0.20，0.50，1.0，2.50，5.0 μg／L 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 試樣溶液的制備

準(zhǔn)確稱取0.010 2 g 10%唑啉草酯· 炔草酯可分散油懸浮劑于稱量瓶中，然后用曝氣生態(tài)水少量多次轉(zhuǎn)入1 L 燒杯中，制備得1.02 mg／L 的試樣溶液，稀釋至500 倍體積，過(guò)0.45 μm 濾膜。

1.2.3 加標(biāo)樣品的制備

取曝氣生態(tài)水作為基質(zhì)樣品，然后分別向1 L基質(zhì)樣品中添加0.05，0.50 μg 炔草酯和唑啉草酯作為基質(zhì)加標(biāo)樣品。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 高效液相色譜

色譜柱：Eclipse Plus-C18柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm，SN：USDAY55083，美國(guó)安捷倫科技有限公司）；進(jìn)樣體積：10 μL；流動(dòng)相：甲醇–0.1%甲酸水溶液（90∶10），流量為0.3 mL／min；柱溫：30℃。

1.3.2 質(zhì)譜

離子源：AJS ESI 源，正離子模式；干燥氣：N2；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流量：7 L／min；鞘氣：N2；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流量：11 L／min；霧化氣壓力：241.3 kPa；噴嘴電壓：1 000 V；毛細(xì)管電壓：4 000 V；監(jiān)測(cè)模式：質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），MRM 離子采集參數(shù)見表1。

表1 MRM 離子采集參數(shù)

1.4 樣品測(cè)定

在1.3 儀器工作條件下，待儀器基線穩(wěn)定，且相鄰2 次標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的色譜峰面積相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按混合標(biāo)準(zhǔn)溶液–試樣溶液–試樣溶液–混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的次序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 結(jié)果計(jì)算

將試樣溶液兩次測(cè)定結(jié)果與前后各一次的標(biāo)準(zhǔn)樣品中唑啉草酯和炔草酯色譜峰面積分別取平均值，利用式(1)計(jì)算唑啉草酯和炔草酯的含量：

式中：w——唑啉草酯或炔草酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；

A1，A2——標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液中唑啉草酯或 炔草酯色譜峰面積的平均值；

m1，m2——標(biāo)準(zhǔn)樣品、試樣溶液中唑啉草酯或 炔草酯的質(zhì)量，g；

P——標(biāo)準(zhǔn)樣品中唑啉草酯或炔草酯的質(zhì)量 分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

用液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定炔草酯或唑啉草酯時(shí)，井婧等［12］使用乙腈–水作為流動(dòng)相，韓何丹等［13］采用乙腈–0.1%甲酸水作為流動(dòng)相。唑啉草酯和炔草酯均溶解于乙腈，也溶解于甲醇，使用甲醇作為流動(dòng)相時(shí)分析時(shí)間較乙腈短，而兩個(gè)組分的色譜峰面積、峰形未見明顯差異，因此選擇甲醇–水體系作為流動(dòng)相。在該體系中，甲醇比例較低時(shí)，色譜峰拖尾嚴(yán)重，逐步增加甲醇比例，峰形明顯改善；而且在水相中添加0.1%甲酸后可增強(qiáng)目標(biāo)物的質(zhì)子化，使色譜峰形更加理想，靈敏度更高［15］，最終確定最佳流動(dòng)相為甲醇–0.1%甲酸水溶液（90∶10）。

2.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

以甲醇–0.1%甲酸水溶液（90∶10）為流動(dòng)相，選擇10.0 μg／L 的唑啉草酯和炔草酯混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入離子源中，在正負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式下對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行全掃描以確定目標(biāo)物母離子。根據(jù)不同傳輸電壓下母離子的響應(yīng)值確定最佳傳輸電壓，并根據(jù)響應(yīng)值最高的碎片離子確定定量和定性子離子，然后確定碰撞能量并對(duì)其它參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)條件見表1。

2.3 方法選擇性

分別測(cè)定空白基質(zhì)樣品、質(zhì)量濃度均為1.0 μg／L 的唑啉草酯、炔草酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在儀器最高靈敏度下空白樣品無(wú)可見干擾，唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間為0.79 min，炔草酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間為0.76 min。

2.4 線性方程與檢出限、定量限

在1.3 儀器工作條件下，分別測(cè)定唑啉草酯、炔草酯系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以唑啉草酯、炔草酯的質(zhì)量濃度（x，μg／L）為自變量，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積（y）為因變量進(jìn)行線性擬合，得到唑啉草酯、炔草酯的線性方程。結(jié)果表明：唑啉草酯、炔草酯的質(zhì)量濃度在0.10～5.0 μg／L 范圍內(nèi)與色譜峰面積具有良好的線性關(guān)系，回歸方程分別為y=14 858.98x+154.31，y=2 042.03x+15.44；相關(guān)系數(shù)（r）分別為0.999 5，0.999 7。以信噪比3 確定唑啉草酯和炔草酯的檢出限分別為1.8×10–3，3.1×10–3μg／L；以信噪比10確定唑啉草酯和炔草酯的定量限分別為6.0×10–3，1.0×10–2μg／L。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

取曝氣生態(tài)水，進(jìn)行兩個(gè)濃度水平的基質(zhì)加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平平行試驗(yàn)6 次。分別用本法測(cè)定樣品本底及加標(biāo)樣品中唑啉草酯和炔草酯的含量，加標(biāo)樣品質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖如圖1 所示。計(jì)算唑啉草酯和炔草酯的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，相關(guān)數(shù)據(jù)列于表2。由表2 可知，在0.10，0.50 μg／L 兩個(gè)加標(biāo)水平下，唑啉草酯、炔草酯的回收率分別為93.0%～106.4%，93.0%～108.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.90%，4.46%，表明本方法的精密度、準(zhǔn)確度良好。

圖1 地表水加標(biāo)樣品質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖

表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

利用高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)測(cè)定地表水中的唑啉草酯、炔草酯殘留，該方法的準(zhǔn)確度與精密度良好，操作簡(jiǎn)單、快速，有推廣應(yīng)用價(jià)值。