徐海軍，白雪梅，左瑞華，張圣堯，王廣林

(1.皖西學(xué)院 健康養(yǎng)殖與動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)預(yù)警工程技術(shù)中心，安徽 六安 237012；2.安徽金豐源畜牧科技有限公司，安徽 六安 237010；3.皖西學(xué)院分析測(cè)試中心，安徽 六安 237012)

近年來，我國優(yōu)質(zhì)土雞的飼養(yǎng)規(guī)模不斷擴(kuò)大，成為農(nóng)村新的經(jīng)濟(jì)增長點(diǎn)。然而土雞由于采用開放飼養(yǎng)的養(yǎng)殖方式，非常容易受到環(huán)境中各種病原的侵害，嚴(yán)重阻礙了土雞養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌是2種人獸共患的條件性致病菌，其在土雞身上的混合感染尚未見報(bào)道。本文報(bào)告了1例雛土雞肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌混合感染的病原鑒定和診治過程。

1 材料與方法

1.1 試劑和藥品 胰大豆蛋白胨瓊脂，購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；細(xì)菌藥敏試紙片，購自杭州微生物試劑有限公司；革蘭染色液，購自杭州天和微生物試劑有限公司；革蘭陰性菌和革蘭陽性菌檢測(cè)卡，購自法國梅里埃診斷產(chǎn)品(上海)有限公司；2.5%獸用恩諾沙星可溶性粉，購自鄭州世農(nóng)獸藥有限公司。

1.2 病樣來源 2018年9月22日，淮南市壽縣保義鎮(zhèn)某土雞養(yǎng)殖戶送檢3只雛土雞(1只死亡，2只存活)。

1.3 方法

1.3.1 病史調(diào)查 通過詢問養(yǎng)殖戶，對(duì)整個(gè)發(fā)病過程進(jìn)行調(diào)查。

1.3.2 臨床癥狀和病理剖檢觀察 觀察送檢存活病雞的臨床癥狀，然后進(jìn)行剖檢，觀察病變。

1.3.3 細(xì)菌分離、鑒定 剖檢時(shí)無菌采集2只存活病雞的肝臟組織，涂布接種于胰大豆蛋白胨瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)18 h。對(duì)分離菌進(jìn)行革蘭染色鏡檢，并用VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀細(xì)菌學(xué)專家系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

1.3.4 藥敏試驗(yàn) 采用紙片法對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈的直徑在20 mm以上時(shí)為極敏；直徑在15～20 mm為高敏；直徑在10～14 mm為中敏；直徑在10 mm以下時(shí)為低敏；直徑為0 mm時(shí)為耐藥。

1.3.5 防治措施 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物對(duì)土雞群進(jìn)行治療，對(duì)病土雞進(jìn)行隔離治療，同時(shí)對(duì)雞舍和周邊環(huán)境做好消毒。

2 結(jié)果

2.1 病史調(diào)查 該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)了5 000只土雞，發(fā)病時(shí)約1月齡。在送檢時(shí)已發(fā)病2 d，發(fā)病第1天有10多只發(fā)萎，3只死亡；發(fā)病第2天時(shí)死亡增加至5只，發(fā)萎雞數(shù)量也增加。

2.2 臨床癥狀和病理剖檢 送檢存活的病雞發(fā)蔫，縮頭蜷臥，雙翅下垂，閉眼，肛門周邊羽毛有黃綠色糞便污染。剖檢的主要病變包括肝腫脹，表面有少量出血點(diǎn)或不規(guī)則的黃綠色壞死灶；膽囊腫大，膽汁濃稠；腸道有點(diǎn)狀或條塊狀出血；胸腺表面有出血點(diǎn)；盲腸扁桃體出血；腎臟稍腫大，輸尿管充盈尿酸鹽；肺呈暗紅色、淤血；肌胃內(nèi)容物常為綠色，嗉囊內(nèi)有少量積液。

2.3 細(xì)菌分離、鑒定 從2只病雞的肝臟中均分離出2種細(xì)菌，其中細(xì)菌1菌落呈圓形、邊緣整齊、灰白色、不透明、隆起、表面濕潤、直徑約1mm，局部形成灰白色菌苔；細(xì)菌2分布于細(xì)菌1周圍，呈淺灰色、半透明、遷徙生長的菌苔，長滿整個(gè)平板。用接種環(huán)挑取單個(gè)細(xì)菌1的菌落用劃線法進(jìn)行純化培養(yǎng)，由于細(xì)菌1和細(xì)菌2在初次分離時(shí)呈混合生長，所以經(jīng)過6次純化，并且縮短培養(yǎng)時(shí)間至10 h，才最終獲得細(xì)菌1的單菌落。細(xì)菌2純化時(shí)由于其具有遷徙生長的特點(diǎn)，因此始終沒有獲得單菌落。

將細(xì)菌1和細(xì)菌2涂片、革蘭染色后鏡檢，發(fā)現(xiàn)兩者均為革蘭陰性菌(見中插彩版圖1和圖2)。其中，細(xì)菌1呈卵圓形或球桿狀，單個(gè)散在或兩兩相連，有莢膜；細(xì)菌2兩端鈍圓，呈單個(gè)或成對(duì)的球狀、球桿狀、長絲狀或短鏈狀的多形性桿菌，以桿狀為主，多單在。經(jīng)VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀細(xì)菌學(xué)專家系統(tǒng)鑒定，細(xì)菌1為肺炎克雷伯菌(正確率為98 %)，細(xì)菌2為奇異變形桿菌(正確率為99 %)。

2.4 藥敏試驗(yàn) 對(duì)2種菌分別進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見表1。從表1可見，肺炎克雷伯菌對(duì)頭孢拉定極敏，對(duì)氧氟沙星、磷霉素、丁胺卡那霉素高敏，對(duì)強(qiáng)力霉素、多黏菌素中敏，對(duì)氟苯尼考耐藥。奇異變形桿菌對(duì)氧氟沙星、磷霉素極敏，對(duì)丁胺卡那霉素、頭孢拉定高敏，對(duì)氟苯尼考低敏，對(duì)強(qiáng)力霉素和多黏菌素耐藥。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.5 治療方法 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇氧氟沙星的同類藥物恩諾沙星(因?yàn)楂F用氧氟沙星自2016年12月31日起，停止經(jīng)營、使用于食品動(dòng)物)作為治療藥物，按使用說明，每1 L水用本品2 g，2次/d，飲水給藥，連用4 d。1周后回訪得知用藥后已控制病情，雞群恢復(fù)正常。

3 討論

肺炎克雷伯菌是一類廣泛分布于人和動(dòng)物皮膚、呼吸道、消化道等部位及環(huán)境中的重要條件致病菌，可以引起人和動(dòng)物的多種感染[1-5]。有學(xué)者認(rèn)為肺炎克雷伯菌已成為僅次于大腸桿菌、綠膿桿菌，引起感染死亡率較高的條件致病菌[6]。我國關(guān)于雞感染肺炎克雷伯菌的報(bào)道還較少[7-9]，這可能與臨床上一般很少對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定有關(guān)，導(dǎo)致一些疾病治愈后也未能確診病原。肺炎克雷伯菌感染動(dòng)物后可引起肺炎、腸炎、子宮炎、腹膜炎，甚至引起敗血癥[9-10]，可見其引起的癥狀和病變十分廣泛，缺乏特異性，這給基層獸醫(yī)對(duì)該病的確診帶來了一定的困難。

奇異變形桿菌廣泛分布于自然界及人與動(dòng)物的體表，也是一種較常見的人獸共患條件致病菌。雞奇異變形桿菌病是近些年來國內(nèi)新發(fā)現(xiàn)的一種急性熱性細(xì)菌性傳染病[11-15]。本病的特征是呼吸困難、咳嗽、體溫升高、腹瀉，病雞主要表現(xiàn)為菌血癥、敗血癥，一側(cè)性或兩側(cè)性癱瘓或水樣腹瀉，各種日齡的雞群都可感染本病，但以7周齡以下的雛雞最易感[15]。奇異變形桿菌用常規(guī)培養(yǎng)方法很難獲得單個(gè)菌落，但在含 0.1%石碳酸或 0.4%硼酸的培養(yǎng)基上，該菌遷徙生長受到抑制，可形成單個(gè)菌落[14]。

本病例中，肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌發(fā)生混合感染，尚未見類似報(bào)道。2種菌混合感染也加劇了臨床癥狀和病變的復(fù)雜性，單純通過流行病學(xué)、臨床癥狀和剖檢病變難以作出確診，必須通過細(xì)菌分離和鑒定才能獲得確診。由于這2種菌廣泛存在于環(huán)境中，甚至也存在于動(dòng)物(包括人)機(jī)體中，對(duì)它們的危害應(yīng)引起足夠重視。孫秋艷等(2006年)對(duì)來自于河南、安徽、山東、廣西等省的雞血清進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明，奇異變形桿菌抗體陽性率普遍較高[12]。由于這2種菌感染后缺乏特異性的臨床癥狀和病變，而基層獸醫(yī)一般缺少細(xì)菌分離鑒定的條件，因此，這2種病的實(shí)際發(fā)生率可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于人們的現(xiàn)有認(rèn)識(shí)。研制這2種細(xì)菌感染的快速診斷方法，對(duì)于臨床正確診斷和評(píng)估這2種細(xì)菌病的流行情況有重要作用。