周 鵬，厲世笑，夏愛(ài)曉，林 忠，馬凱昀（.浙江省臺(tái)州醫(yī)院藥劑科，浙江 臺(tái)州 37000；.浙江省臺(tái)州醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江臺(tái)州 37000）

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Waters系列高效液相色譜儀，包括Waters 717自動(dòng)進(jìn)樣器，1525四元泵，2487檢測(cè)器，Waters Spherisorb S10 ODS2色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），Breeze數(shù)據(jù)獲取處理系統(tǒng)，KL-15C型恒溫箱，WH-966調(diào)速混勻器，TU-1810APC紫外吸收儀，雷磁PHS-型PH計(jì)，TGL-1離心機(jī)，AE-240型電子天平，超聲清洗機(jī)等。

1.2 試劑

利奈唑胺（規(guī)格：1 g，批號(hào)：5-ARP-79-1，加拿大多倫多研究化學(xué)品公司）；甲醇（色譜純，天津四友化工公司）；水為高純水。

2 方法

2.1 色譜條件

流動(dòng)相：甲醇∶水 = 40∶60；流速：1.5 mL·min-1；柱溫：25 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

2.2 方法驗(yàn)證

2.2.1 樣品處理與測(cè)定 取空白腦脊液200 μL，加定量藥品溶液，渦旋混勻30 s，離心（3000 r·min-1，5 min）后取上清液20 μL進(jìn)樣測(cè)定。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定 配制含利奈唑胺40.00、20.00、10.00、5.00、2.50、1.00、0.50、0.10、0.05 μg·mL-1的腦脊液樣品。按“2.2.1”項(xiàng)下方法操作，用外標(biāo)法以利奈唑胺峰面積對(duì)濃度作圖，采用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取空白腦脊液若干份，配置成高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度（40.00、5.00、0.05 μg·mL-1）的樣品各5份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法操作，分別在同日內(nèi)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算腦脊液日內(nèi)及日間精密度。

2.2.4 回收率試驗(yàn) 取空白腦脊液若干份，配置成高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度（40.00、5.00、0.05 μg·mL-1）的樣品各5份，按“2.2.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其含量，再與加入量相比即為相對(duì)回收率。

2.3 用藥方案及樣本處理

此3例病人均為神經(jīng)外科所收治顱腦外傷需側(cè)腦室引流患者，給予利奈唑胺片劑600 mg口服，q 12 h給藥，用藥2 d至血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，取腦脊液2 mL檢測(cè)藥物濃度。

3 結(jié)果

3.1 紫外掃描圖譜

經(jīng)紫外掃描，利奈唑胺在198 nm和250 nm處有最大吸收峰，選擇位于紫外光區(qū)位置254 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

3.2 利奈唑胺色譜圖

從圖1中可見(jiàn)利奈唑胺峰形、分離度均良好，無(wú)干擾峰，保留時(shí)間為7.76 min。

圖1 HPLC色譜圖A-空白腦脊液，B-利奈唑胺+腦脊液；1-利奈唑胺Fig 1 HPLC chromatogramA-blank CSF, B-linezolid + CSF; 1-linezolid

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

線性回歸方程為：Y= 22 436X+ 9156，r= 0.999 5，在0.05～40.00 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4 精密度與回收率

日內(nèi)、日間精密度及回收率見(jiàn)表1。由表1數(shù)據(jù)可知，此方法的日間RSD ＜ 5%，日內(nèi)RSD ＜ 10%，表明具有較好的精密度，且回收率也很高，說(shuō)明該方法可行。

表1 腦脊液中利奈唑胺精密度與回收率.± s，n = 5Tab 1 Precision and recovery of linezolid in CSF.± s , n = 5

表1 腦脊液中利奈唑胺精密度與回收率.± s，n = 5Tab 1 Precision and recovery of linezolid in CSF.± s , n = 5

利奈唑胺濃度/μg·mL-1回收率RSD/%0.05 3.63±1.86 3.23±1.29 101.2±0.42 5.00 1.06±2.49 2.94±1.88 103.2±0.57 40.00 3.41±2.94 8.94±1.78 92.1±0.41日間RSD/%日內(nèi)RSD/%

3.5 CSF濃度

患者使用利奈唑胺2 d后，從引流管抽取CSF進(jìn)行濃度測(cè)定，3例患者血藥濃度分別為4.8、4.1、1.7 mg·L-1，2例達(dá)到了臨床治療要求（MIC≤ 2 μg·mL-1），1例未達(dá)標(biāo)。

4 討論

利奈唑胺為時(shí)間依賴性抗菌藥物，血漿蛋白結(jié)合率較低，廣泛分布于組織間液，平均表觀分布容積達(dá)40～50 L，藥物的Cmax、AUC0～24h及致病菌的MIC均是影響其臨床療效的重要因素[5]。理想的利奈唑胺血藥濃度AUC0～24h/MIC介于80～120，T ＞ MIC值大于85%是預(yù)示利奈唑胺良好臨床和微生物學(xué)療效的PK/PD指標(biāo)[6]。盡管利奈唑胺具有獨(dú)特的作用機(jī)制和良好的抗菌活性，且具有強(qiáng)大的組織和體液穿透性，能保證有足量藥物到達(dá)感染部位，但在腦脊液中的濃度和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化比較大[7]，特別是危重癥患者的病理和生理改變一般區(qū)別于其他患者，如膿毒癥液體復(fù)蘇時(shí)的液體過(guò)負(fù)荷，血流高動(dòng)力循環(huán)，低蛋白血癥致第三間隙液體增多等，均可影響親水性抗菌藥物利奈唑胺在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程[8]。利奈唑胺的藥物濃度不足，無(wú)法保證臨床治療效果，反之濃度過(guò)高則增加了血小板減少等不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，所以監(jiān)測(cè)腦脊液中藥物濃度可更準(zhǔn)確的指導(dǎo)臨床合理用藥。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在常規(guī)劑量下顱腦外傷合并側(cè)腦室引流患者腦脊液中利奈唑胺的血藥濃度波動(dòng)范圍較大，低于細(xì)菌的MIC值，需要調(diào)整用藥方案。

本實(shí)驗(yàn)建立的利奈唑胺腦脊液檢測(cè)方法，使用甲醇：水的流動(dòng)相，相比于其他檢測(cè)方法（如免疫法、液質(zhì)聯(lián)用等）步驟簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉[9]，其線性、精密度、回收率等指標(biāo)均符合生物樣品分析標(biāo)準(zhǔn)，利奈唑胺對(duì)大多數(shù)臨床分離的常見(jiàn)G+菌的MIC在0.5～2.0 mg·L-1，本方法建立的線性范圍為0.05～40.00 mg·L-1，可滿足臨床腦脊液中利奈唑胺藥物濃度檢測(cè)，為臨床給藥方案提供參考依據(jù)。