， ，， ， ，

（1.湖南省芷江侗族自治縣質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)及計(jì)量檢定所，湖南 芷江 419100；2.中南林業(yè)科技大學(xué)a.食品科學(xué)與工程學(xué)院；b.林產(chǎn)可食資源安全與加工利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410004；3.湖南省通道南楚農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，湖南 通道 418599）

黑老虎Kadsura coccinea是木蘭科五味子屬常綠藤本植物，別名冷飯團(tuán)，苗語(yǔ)稱(chēng)“布福娜”等，主要分布于我國(guó)的湖南、貴州、四川、江西等地[1]。黑老虎的根和藤具有抗腫瘤、抗氧化等活性，還具有清熱解毒、袪風(fēng)活絡(luò)、調(diào)氣止痛、補(bǔ)血養(yǎng)顏等功效，是苗、侗等少數(shù)民族千百年來(lái)沿用至今的一種珍貴藥材[2]。黑老虎果實(shí)富含多種人體所需微量元素[3]，及多酚和維生素C 等活性成分[4]。果實(shí)成熟后，味道清甜可口，是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的藥食兩用水果，具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、保肝、養(yǎng)顏美白等作用[5]，侗族少女有將黑老虎果汁敷面的傳統(tǒng)，韓國(guó)最大的護(hù)膚品企業(yè)愛(ài)茉莉集團(tuán)的產(chǎn)品中也有應(yīng)用[6]。

黑老虎主要為鮮食野生水果，果肉可食部位僅40%～60%。在黑老虎果實(shí)的食用和生產(chǎn)加工過(guò)程中，其果皮和種子大多會(huì)被廢棄。現(xiàn)階段對(duì)黑老虎的研究主要集中在栽培、繁育[7]及根中化學(xué)成分[8]等方面，關(guān)于其果實(shí)皮和籽等副產(chǎn)物的生物活性的研究鮮有報(bào)道。

本研究中以2 種常見(jiàn)的黑老虎品種為原料，用乙醇提取黑老虎果皮、種子中的活性物質(zhì)，測(cè)定其抗氧化和抑菌活性及其對(duì)酪氨酸酶、α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制活性，評(píng)價(jià)其生物活性，旨在為黑老虎果皮和種子的加工利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

黑老虎果實(shí)采自湖南通道，包括大紅和紫黑2個(gè)品種。

試劑包括：DPPH（日本TIC 科技有限公司），ABTS（合肥博美生物有限公司），α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、酪氨酸酶（Worthington 化學(xué)公司），PNPG（上海斯信生物科技有限公司），阿卡波糖（拜耳醫(yī)藥保健有限公司）。

鼠傷寒沙門(mén)氏菌、枯草桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌均來(lái)自中南林業(yè)科技大學(xué)微生物教研室。

1.2 儀器與設(shè)備

UV1800 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），Rotavator R-3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（天津市泰斯特儀器有限公司），L420 多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)PerkinElmer 公司），F(xiàn)ORMA311 恒溫箱（美國(guó)Thermo 公司），JP-150A-8 高速多功能粉碎機(jī)（永康市久品工貿(mào)有限公司）。

1.3 方 法

1.3.1 活性物質(zhì)的提取

手工分離果皮和種子，用清水沖洗干凈粘附的果肉，晾干，置于45 ℃烘箱中干燥36 h 后，粉碎成粉末狀（過(guò)60 目篩）。稱(chēng)取10 g 果皮（種子）粉末，加入50 mL 70%的乙醇，在室溫下浸提4 h后過(guò)濾，用等量的乙醇再次浸提1 次濾渣。合并2次的濾液，在40 ℃下真空減壓濃縮至20 mL，得到相當(dāng)于含生藥500 g/L 的乙醇提取液，-20 ℃下保存，待用。

1.3.2 提取液活性成分含量的測(cè)定

參考Bursal 等[9]的方法測(cè)定提取液的多酚含量。取1 mL 提取液，依次加入22 mL 去離子水、500 μL 福林試劑和300 μL 10%的碳酸鈉溶液，室溫下反應(yīng)30 min 后，于760 nm 波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，取3 次重復(fù)的平均值作為試驗(yàn)結(jié)果。多酚含量以每克干樣品中沒(méi)食子酸當(dāng)量來(lái)計(jì)算（mg/g）。

參考Zielinski 等[10]的方法測(cè)定提取液的黃酮含量。取250 μL 提取液，加入2 720 μL 30%的乙醇溶液和120 μL 的亞硝酸鈉溶液（0.5 mol/L），振蕩30 s 后，靜止反應(yīng)5 min，再加入120 μL 10%的氯化鋁溶液反應(yīng)5 min，最后加入800 μL 氫氧化鈉溶液（1 mol/L），于510 nm 波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，取3 次重復(fù)的平均值作為試驗(yàn)結(jié)果。黃酮含量以每克干樣品中兒茶素當(dāng)量計(jì)算（mg/g）。

1.3.3 提取液生物活性的測(cè)定

1.3.3.1 抗氧化活性的測(cè)定

采用3 種方法進(jìn)行抗氧化活性的測(cè)定[11]，每組試驗(yàn)均進(jìn)行3 次平行試驗(yàn)，取其平均值作為試驗(yàn)結(jié)果?？寡趸芰σ悦靠烁蓸悠分蠺rolox 當(dāng)量（μmoL/g）計(jì)算。

DPPH·清除活性的測(cè)定方法：取300 μL 提取液，加入1.9 mL 的DPPH 溶液（0.094 mmol/L）混合均勻后，置于室溫下反應(yīng)30 min，以80%的甲醇調(diào)零，并于517 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

ABTS+·清除活性測(cè)定方法：取1 mL 提取液和4 mL ABTS+·混合溶液，搖勻，以無(wú)水乙醇作為空白，于734 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

鐵離子還原力（FRAP）測(cè)定方法：取900 μL提取液，加入2.7 mL 的FRAP 溶液和270 μL 超純水，振蕩均勻，置于37 ℃的水浴鍋中30 min。以80%的甲醇溶液作為空白，于595 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。

1.3.3.2 抑菌活性的測(cè)定

試驗(yàn)用菌種包括鼠傷寒沙門(mén)氏菌、枯草桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。采用打孔法[12]測(cè)定提取液的抑菌活性。每孔加入30 μL 不同濃度的樣品，以等量的無(wú)菌蒸餾水為陰性對(duì)照，以等量的0.3 mg/L 青霉素為陽(yáng)性對(duì)照，在35 ℃的溫度條件下培養(yǎng)24 h。重復(fù)試驗(yàn)3 次，取其平均值。采用刃天青法[13]測(cè)定提取液的最小抑菌濃度，取無(wú)菌96 孔板，向所需各孔中加入80 μL 液體培養(yǎng)基，第1排孔加80 μL 樣品（500 g/L）；用逐步梯度法稀釋樣品濃度，分別用無(wú)菌水和0.3 mg/L青霉素作為陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。每孔加入10 μL 細(xì)菌稀釋液（5×106CFU/mL），混勻后，于37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)20 h，再分別加入10 μL 刃天青，放置2 h 后觀察試驗(yàn)結(jié)果。粉紅色表示有細(xì)菌生長(zhǎng)，藍(lán)色表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)樣品的最小濃度作為最小抑菌濃度。

1.3.3.3 抑酶活性的測(cè)定

1）酪氨酸酶活性抑制率的測(cè)定。參考王雅等[14]的方法進(jìn)行酪氨酶活性的測(cè)定?？瞻捉M準(zhǔn)確量取30 μL去離子水和80 μL磷酸緩沖溶液于96孔板中，在37 ℃的恒溫水浴中保存10 min；再加入50 μL比活力為835 U/mg的酪氨酸酶溶液，反應(yīng)5 min后，用酶標(biāo)儀于492 nm 波長(zhǎng)下迅速測(cè)定吸光度（A1）。酪氨酸對(duì)照組以50 μL 的L-酪氨酸溶液和30 μL的磷酸緩沖溶液代替空白組的磷酸緩沖液，測(cè)定吸光度（A2）；樣品對(duì)照組以30 μL 的樣品溶液代替空白組的去離子水，測(cè)定吸光度（A3）；試驗(yàn)組以30 μL 的樣品溶液代替酪氨酸對(duì)照組的去離子水，測(cè)定吸光度（A4）。每組以4 個(gè)重復(fù)孔為平行，計(jì)算黑老虎不同部位提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率（R1），并且以維生素C 溶液（10 g/L）作為對(duì)照。

R1＝[1-(A4-A3)/(A2-A1)]×100%。

2）α-葡萄糖苷酶活性抑制率的測(cè)定。參考李項(xiàng)輝[15]的方法，并適當(dāng)修改，進(jìn)行α-葡萄糖苷酶活性的測(cè)定。取30 μL 黑老虎提取液置于96孔板孔中，試驗(yàn)組加入50 μL 的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg） 和50 μL 的PNPG（24 mmol/L），37 ℃條件下反應(yīng)30 min，加100 μL 的Na2CO3溶液（0.1 mol/L），37 ℃條件下反應(yīng)10 min，用酶標(biāo)儀于405 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值（A1）?？瞻捉M（A2）以50 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替50 μL的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg）。樣品對(duì)照組（A3）以30 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替30 μL 的樣品。溶劑對(duì)照組（A4）以80 μL 磷酸鉀緩沖液（0.1 mol/L）代替30 μL 的樣品和50 μL 的α-葡萄糖苷酶（0.2 U/mg）。以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，通過(guò)下式計(jì)算黑老虎不同部位提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制率（R2）。

R2＝[1-(A1-A2)/(A3-A4)]×100%。

3）α-淀粉酶活性抑制率的測(cè)定。參考葉瓊仙等[16]的方法進(jìn)行α-淀粉酶抑制活性的測(cè)定。取200 μL 樣品溶液與200 μL 的α-淀粉酶溶液混合，在37 ℃下孵育10 min 后加入400 μL 0.25%的淀粉溶液，置于37 ℃水浴中反應(yīng)10 min 后加入1.0 mL DNS 顯色劑，置于沸水中加熱10 min 后冷卻至室溫。加入10 mL 蒸餾水稀釋后，于540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A1），以200 μL 20 mmol/L pH6.9 的磷酸鈉緩沖液代替200 μL 的α-淀粉酶溶液作為背景對(duì)照（A2），以200 μL 20 mmol/L pH6.9 的磷酸鈉緩沖液代替200 μL 樣品溶液作為陰性對(duì)照（A3）。通過(guò)下式計(jì)算黑老虎不同部位提取液對(duì)α-淀粉酶活性的抑制率（R3）。

R3＝[1-(A1-A2)/A3]×100%。

以酶活性抑制率為50%時(shí)樣品的濃度為半數(shù)抑制濃度（IC50）。使用GraphPad Prism7.0 軟件計(jì)算IC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑老虎果皮和種子提取液的多酚和黃酮含量

黑老虎果皮和種子提取液中多酚和黃酮含量如圖1所示。由圖1可見(jiàn)，黑老虎果皮和種子提取液的多酚含量為0.21 ～0.95 mg/g，4 種樣品提取液的多酚含量存在顯著性差異（P＜0.05），按其含量由高到低依次為大紅果皮、紫黑果皮、紫黑種子、大紅種子，2 個(gè)品種黑老虎果皮的多酚含量均高于種子。黑老虎果皮和種子提取液的黃酮含量為0.66 ～1.61 mg/g，換算成鮮果皮和種子的黃酮含量為0.09 ～0.22 mg/g，低于貴州黑老虎鮮果皮和種子的黃酮含量（1.21 ～12.69 mg/g），接近湖南黑老虎鮮果皮和種子的黃酮含量（0.98 ～4.22 mg/g）[17]。其中，紫黑果皮的黃酮含量最高，紫黑種子的含量最低。與多酚含量相似，2 個(gè)品種黑老虎果皮的黃酮含量高于種子。黑老虎果皮的多酚和黃酮含量均高于種子，其他產(chǎn)地的黑老虎也存在這種差異[17]，可能與黑老虎的品種、部位以及果實(shí)成熟度等因素有一定關(guān)系。

2.2 黑老虎果皮和種子提取液的生物活性

2.2.1 抗氧化活性

使用3 種方法測(cè)得的黑老虎果皮和種子提取液的抗氧化活性見(jiàn)表1。由表1可知，提取液的DPPH·清除活性為0.35 ～0.40 μmol/g，各樣品中以大紅果皮的DPPH·清除活性最高。ABTS+·清除活性為0.16 ～0.29 μmol/g，4 種樣品中大紅果皮的活性最高。鐵離子還原力也是以大紅果皮提取液最高。此外，4 種樣品中除紫黑果皮的DPPH·清除活性外，其他均呈現(xiàn)出果皮抗氧化活性大于種子的趨勢(shì)。這可能是因?yàn)楣ぽ^種子的多酚和黃酮含量高[18]。

圖1 黑老虎果皮和種子提取液中多酚和黃酮的含量Fig.1 The contents of polyphenols and flavonoids in extracts of peel and seed from K.coccinea

表1 黑老虎果皮和種子提取液的抗氧化活性?Table1 Antioxidant activity of peel and seed extracts from K.coccinea μmol/g

2.2.2 抑菌活性

抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，黑老虎果皮和種子提取液對(duì)大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌3 種細(xì)菌未顯示抑菌效果，對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌和枯草桿菌有一定的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，黑老虎果皮和種子提取液在試驗(yàn)濃度下對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的抑菌圈直徑為7.22 ～11.90 mm。其中，大紅果皮提取液的抑菌圈直徑最大，為(11.90±0.04) mm，大紅種子提取液的抑菌圈直徑最小，紫黑果皮和種子的抑菌圈直徑無(wú)顯著性差異。4 種樣品提取液對(duì)枯草桿菌的抑菌圈直徑為7.30 ～13.40 mm，紫黑果皮提取液抑菌圈直徑最大，為(13.40±0.05) mm，紫黑種子提取液的抑菌圈直徑最小。黑老虎果皮提取液對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌和枯草桿菌的抑菌效果均優(yōu)于種子，這可能是因?yàn)楣ぶ卸喾雍忘S酮含量均高于種子。

最小抑菌濃度試驗(yàn)結(jié)果（表2）也表明，果皮提取液的抑菌活性顯著優(yōu)于種子，大紅不同部位提取液的抑菌活性強(qiáng)于紫黑。由表2可知，在對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的最小抑菌濃度試驗(yàn)中，大紅果皮的抑菌效果最好，其最小抑菌質(zhì)量濃度最小，為31.25 g/L，顯著優(yōu)于紫黑果皮和紫黑種子提取液的抑菌活性，后兩者的最小抑菌質(zhì)量濃度均為62.5 g/L，也顯著高于大紅種子的抑菌活性，后者的最小抑菌質(zhì)量濃度為125 g/L。在對(duì)枯草桿菌的最小抑菌濃度試驗(yàn)中，2 個(gè)黑老虎品種均為果皮的抑菌效果優(yōu)于種子，果皮的最小抑菌質(zhì)量濃度均為31.25 g/L，種子的最小抑菌質(zhì)量濃度均為62.50 g/L。黑老虎大紅種子提取液對(duì)枯草桿菌的抑菌效果與紫黑種子相當(dāng)，但對(duì)沙門(mén)氏菌的抑菌效果遠(yuǎn)不如紫黑種子。

2.2.3 抑酶活性

2.2.3.1 對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率

黑老虎果皮和種子提取液對(duì)酪氨酸酶的抑制活性如圖2所示。由圖2可見(jiàn)，在一定的濃度范圍內(nèi)，隨著果皮和種子提取液濃度的增大，其對(duì)酪氨酸酶的抑制率均呈上升趨勢(shì)，當(dāng)提取液質(zhì)量濃度為67.5 g/L 時(shí)，對(duì)酪氨酸酶的抑制率為23.51%～45.13%，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到500 g/L 時(shí)，種子提取液的抑制率僅為55.43%～60.43%，而果皮提取液的抑制率可達(dá)到90%以上，低于對(duì)照組維生素C 溶液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率，維生素C溶液質(zhì)量濃度為10 g/L 時(shí)，抑制率為96.81%。IC50計(jì)算結(jié)果表明，大紅果皮提取液IC50為117.23 g/L，紫黑果皮為90.27 g/L，大紅種子為248.57 g/L，紫黑種子為310.64 g/L。因此，黑老虎果皮和種子提取液對(duì)酪氨酸酶的抑制活性由大到小依次為紫黑果皮、大紅果皮、大紅種子、紫黑種子。

表2 黑老虎果皮和種子提取液的抑菌活性Table2 The bacteria inhibition activities of peel and seed extracts from K.coccinea

圖2 黑老虎果皮和種子提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率Fig.2 The tyrosinase inhibition rate of peel and seed extracts from K.coccinea

2.2.3.2 對(duì)α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制率

由黑老虎果皮和種子提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶（圖3）和α-淀粉酶的抑制活性（圖4）可以看出，4 種提取液對(duì)2 種酶的抑制效果均呈劑量濃度效應(yīng)。當(dāng)提取液質(zhì)量濃度在125 g/L 時(shí)，抑制效果較弱，抑制率僅為3.43%～13.56%。隨著質(zhì)量濃度提升至250 g/L，提取液對(duì)2 種酶的抑制率明顯提高，尤其是大紅果皮提取液展現(xiàn)了最好的抑制活性，在此質(zhì)量濃度下，對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)到了(43.47±1.37)%，對(duì)α-淀粉酶的抑制率達(dá)到了(49.73±0.99)%。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到500 g/L時(shí)，4 種提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率為31.18%～62.96%，仍以大紅果皮提取液的抑制活性為最高，大紅果皮提取液對(duì)α-淀粉酶的抑制效果也最好，達(dá)到了(71.68±1.25)%。

圖3 黑老虎果皮和種子提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制率Fig.3 The α-glucosamine inhibitory rate of peel and seed extracts from K.coccinea

相同品種的黑老虎均是果皮提取液對(duì)2 種酶的抑制率大于種子，這可能是因?yàn)楣ぶ泻休^多的多酚類(lèi)物質(zhì)所致。但整體活性弱于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖，質(zhì)量濃度為5 g/L 的阿卡波糖對(duì)0.2 U/mL 的α-葡萄糖苷酶的抑制率為(85.14±2.29)%；質(zhì)量濃度為2 g/L 的阿卡波糖對(duì)0.5 U/mL 的α-淀粉酶的抑制率為(89.87±2.36)%。阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率明顯高于對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率。

圖4 黑老虎果皮和種子提取液對(duì)α-淀粉酶活性的抑制率Fig.4 The α-amylase inhibition rate of peel and seed extracts from K.coccinea

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)中對(duì)湖南通道黑老虎果皮和種子提取液的生物活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明2 個(gè)黑老虎品種（紫黑和大紅）的果皮和種子提取液對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌和枯草桿菌有較好的抑菌活性，有較高的酪氨酸酶抑制活性，同時(shí)顯示了較好的抗氧化活性及對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制效果，且果皮提取液的生物活性優(yōu)于種子提取液。其中，大紅果皮提取液對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的抑制效果最佳，紫黑果皮對(duì)枯草桿菌和酪氨酸酶的抑制效果最佳。黑老虎作為我國(guó)少數(shù)民族的傳統(tǒng)中藥材，具有較高的藥用價(jià)值，但其果實(shí)目前主要作為鮮果食用，尚未得到充分利用，會(huì)產(chǎn)生大量的皮籽等副產(chǎn)物，該研究結(jié)果可為黑老虎果皮種子的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考，尤其是其果皮提取液具有抑制酪氨酸酶的功效，可作為美容產(chǎn)品活性成分的來(lái)源。

保健和皮膚美白已成為廣大民眾關(guān)注的熱點(diǎn)。大量研究結(jié)果表明，人體很多疾病的發(fā)生與體內(nèi)活性氧自由基的增多有較大關(guān)系。血清中脂質(zhì)自由基的分解產(chǎn)物醛可與蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)中的氨基反應(yīng)，并使蛋白質(zhì)變性和酶失活，進(jìn)而被吞噬細(xì)胞吞噬，但這些變性物質(zhì)未能被完全消化，在細(xì)胞內(nèi)累積，使皮膚色素沉積。同時(shí)，色素的生成與酪氨酸酶有緊密關(guān)系，酪氨酸酶是生物體內(nèi)黑色素生成的關(guān)鍵酶，酪氨酸酶抑制劑被廣泛應(yīng)用于美白化妝品領(lǐng)域，在醫(yī)藥方面用于預(yù)防和治療黑色素瘤、黃褐斑等色素沉積性疾病。多酚類(lèi)物質(zhì)能有效地清除自由基，酚類(lèi)化合物通過(guò)羥基基團(tuán)提供氫質(zhì)子，使具有高度氧化性的自由基還原，進(jìn)而發(fā)揮清除自由基的目的，或通過(guò)抑制或阻斷氧化反應(yīng)的啟動(dòng)/傳播鏈，將自由基轉(zhuǎn)化為危害性較小的分子，修復(fù)人體細(xì)胞的氧化損傷[19]。同時(shí)，一些多酚類(lèi)化合物具有較好的抑制酪氨酸酶活性，如從紫花苜蓿鮮花瓣中分離得到山奈酚對(duì)蘑菇酪氨酸酶的50%酶抑制濃度（IC50）為67 mg/L[20]。篩選具有較高抗氧化活性成分的天然產(chǎn)物已成為研究熱點(diǎn)[21-22]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，果皮提取液對(duì)酪氨酸酶的抑制率明顯優(yōu)于種子，這可能與不同品種的果皮和種子中黃酮含量不同有關(guān)，這與櫸樹(shù)葉對(duì)酪氨酸酶抑制率的變化趨勢(shì)一致[23]，其抑制酪氨酸酶的具體化合物成分有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)中，黑老虎提取液展示了較好的清除自由基活性、抑制酪氨酸酶活性和抑菌活性，且果皮提取液的生物活性強(qiáng)于種子提取液，可能與其所含的活性成分，尤其是多酚類(lèi)化合物，有較大關(guān)系。多酚可以破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)而增加細(xì)胞通透性，或多酚結(jié)構(gòu)中的酚羥基易與蛋白質(zhì)分子多點(diǎn)結(jié)合，使酶的活性降低，減緩細(xì)菌能量代謝速度，達(dá)到預(yù)防并阻止微生物侵染的目的，因而具有抗菌活性[24]。劉麗[25]對(duì)五味子屬南五味子的研究結(jié)果表明果皮的抑菌效果一般優(yōu)于種子，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。南五味子醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌也顯示出較好的抑菌活性[26]。有研究結(jié)果表明，黑老虎果皮中含有矢車(chē)菊素-3-木糖基-蕓香糖苷、飛燕草素-3-木糖基-蕓香糖苷、矢車(chē)菊素-3-葡糖基-蕓香糖苷和矢車(chē)菊素-3-蕓香糖苷等花青素[27]，這些活性成分主要通過(guò)抑制活性氧（ROS）的形成，抑制酶的活性，螯合參與自由基生成的微量元素等途徑發(fā)揮抗氧化作用，清除活性氧，以及上調(diào)或保護(hù)抗氧化防御系統(tǒng)[28]。同時(shí)，花青素類(lèi)多酚化合物還有一定的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，如具有矢車(chē)菊苷元的矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷能改善H2O2氧化應(yīng)激引起的脂肪細(xì)胞對(duì)胰島素的抵抗[29]，富含矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷的紅樹(shù)莓花色苷提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的半抑制質(zhì)量濃度（IC50）為178.89 mg/L，低于陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖[30]。另外，黑老虎果皮中的維生素C 也具有抗氧化活性，可促進(jìn)膠原蛋白的形成，具有抗氧化、抗衰老的作用，可用于皮膚美容。

黑老虎種子的主要成分為脂肪酸。有研究結(jié)果表明，黑老虎籽含有8 種飽和脂肪酸和4 種不飽和脂肪酸，其中不飽和脂肪酸總量為2.13×105mg/kg，占脂肪酸總量的87.19%，還含有一些黃酮類(lèi)化合物（18.4 g/kg）[31]。但對(duì)于黑老虎種子中黃酮類(lèi)化合物具體組成的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。此外，生物活性成分的組成也受提取方法、提取溶劑的影響。本試驗(yàn)中采用常規(guī)溶劑乙醇作為多酚提取劑，在超聲波產(chǎn)生的空穴效應(yīng)作用下，使果皮中更多的多酚類(lèi)物質(zhì)釋放到溶劑中，但未能對(duì)多酚類(lèi)化合物的具體組成及含量進(jìn)行檢測(cè)，后續(xù)將通過(guò)超高壓液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（UPLCQ-TOF）等色譜手段進(jìn)一步對(duì)其具體活性成分進(jìn)行分析。