周 軍 金福源

1.蘇州市動物園，江蘇蘇州215000；2.江蘇省蘇州市吳江區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇蘇州215200

病理組織觀察是研究動物疾病的病因、發(fā)病機理和患病機體內(nèi)所呈現(xiàn)的代謝、機能和形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，進而來闡明疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，為疾病的診斷和防治提供理論基礎(chǔ)和診斷依據(jù)[1]。病理組織觀察即將病變組織制成切片，染色后經(jīng)光學顯微鏡進行組織和細胞病理變化的觀察。肝臟是幾乎所有脊椎動物消化系統(tǒng)中最大的消化腺，是機體新陳代謝的重要器官。動物機體發(fā)生傳染病、自身免疫性疾病或消化、代謝類疾病，其肝臟組織一般會發(fā)生相應(yīng)的變化[2]。肝臟組織是由肝小葉和肝腺泡組成，肝小葉以中央靜脈為中心，匯管區(qū)為邊緣的六邊形結(jié)構(gòu)，而肝腺泡中心為匯管區(qū)。病理學常把肝損傷分為7種經(jīng)典類型，即：纖維化和肝占位、小葉性損傷、脂肪變性、炎性細胞浸潤、細膽管反應(yīng)、未見明顯異常，往往病變類型對應(yīng)不同的病因。然而也有研究證明，肝臟組織病變是牽連性的，即多種類型的疾病或其他器官的疾病均可累及肝臟。本研究通過原收集、固定的肝臟組織，通過組織病理學觀察，對不同種屬的圈養(yǎng)野生動物的肝臟組織病理變化進行分類，并對常見病變類型進行分析和總結(jié)，進而摸索圈養(yǎng)野生動物肝臟組織病理變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 材 料

本研究選取85例本動物園保存的福爾馬林溶液固定的肝臟組織，其中包括35例草食動物、13例雜食動物、18例肉食類動物、19例鳥類動物。

1.2 切片制作和染色

取出固定肝組織，用清水沖洗4 h，經(jīng)50%酒精脫水12 h后依次經(jīng)70%、85%、90%、100%酒精脫水，然后將肝臟組織塊放入3∶1 酒精+二甲苯混合液、2∶1 酒精+二甲苯混合液、1∶1 酒精+二甲苯混合液30 min，再放入二甲苯，2次各30 min。將恒溫箱調(diào)至57℃并保持恒定，將肝組織依次浸入二甲苯+石蠟混合溶液（3∶1）、二甲苯+石蠟混合溶液（2∶1）、二甲苯+石蠟混合溶液（1∶1）、石蠟溶液各1 h。最后進行包埋、切片，切片厚度約為5 mm，石蠟切片經(jīng)脫蠟復(fù)水后進入染色步驟[3]。

染色采用經(jīng)典的蘇木精-伊紅染色法（H.E.染色），基本步驟如下：切片放入蘇木精中染色約8 min，用自來水流水沖洗3～5 min后，將切片放入1%鹽酸乙醇液中褪色15 s。伊紅染液染色15 min后用85%酒精清洗，再次經(jīng)歷脫水步驟后，用中性樹膠封存。

1.3 數(shù)據(jù)整理和分析

用光學顯微鏡對制作好的肝臟組織切片進行觀察，將觀察結(jié)果錄入Excel 2016，統(tǒng)計相應(yīng)的病變類型及比例，進行相應(yīng)的描述性分析。

2 結(jié)果與分析

85例圈養(yǎng)野生動物肝組織石蠟切片中共出現(xiàn)9種病變類型，分別為肝細胞變性、肝小葉排列紊亂、中央靜脈淤血、炎性細胞浸潤、肝竇水腫、肝竇充血、出血、纖維組織增生、血黃素沉著，其中肝細胞變性（83.53%，71/85）、肝小葉排列紊亂（70.59%，60/85）、炎性細胞浸潤（65.88%，56/85）為主要病變類型。雜食、肉食和鳥類動物中肝細胞變性、肝小葉排列紊亂，炎性細胞浸潤均排在各類型動物肝組織病變中的前3位。食草動物中央靜脈淤血達25例，檢出率為71.43%（25/35），位于肝小葉排列紊亂（30，85.71%）和肝細胞變性（28，80.00%）。在食草動物中，還發(fā)現(xiàn)肝竇水腫（5例）、充血（10例）、出血（6例）、纖維組織增生（4例）和血黃素沉著（3例）。此外，雜食動物組織切片還觀察到肝竇充血6例，無其他病變類型。肉食動物無肝竇水腫和含鐵血黃素沉著類型，鳥類動物無肝竇水腫、出血，纖維組織增生和含鐵血黃素沉著等類型（表1）。

4種類型圈養(yǎng)野生動物肝組織切片病變類型多種，且隨著病變數(shù)量增多，其切片數(shù)量下降。1種病變類型檢出率為95.29%，食草圈養(yǎng)野生動物檢出率最高為100%，其次為鳥類動物。2種病變類型檢出率為64.71%，其中雜食類動物檢出率最高（84.62%），鳥類檢出率最低（36.84%）。3種病變類型檢出率為31.76%，雜食類檢出率最高，其次是食草動物。4種及以上僅食草類動物和雜食動物的肝組織切片存在，其余2類型動物不存在4種及以上病變類型（表2）。

3 討 論

H.E.染色鏡檢是目前最為常用的組織病理切片制作方法，本次研究通過該方法發(fā)現(xiàn)圈養(yǎng)野生動物病變中以肝細胞變性、肝小葉排列紊亂和炎性細胞浸潤為主，且部分組織切片具有2種及2種以上病變類型，但其數(shù)量較1種病變類型較低。除該3種較多的病變類型中，還伴隨諸如中央靜脈淤血、肝竇充血、出血等病變類型。食草和肉食動物肝組織病變類型最多，而雜食動物和鳥類動物病變類型相對較少。此外，食草動物肝組織中央靜脈淤血比例顯著高于其他3種類型動物。肉食動物的肝竇充血、出血的比例顯著高于其他類型動物。3種主要病變類型，包括肝細胞變性、肝小葉排列紊亂和炎性細胞浸潤檢出比例相差不大。

病理組織鏡檢要求鏡檢人員具有豐富的病理基礎(chǔ)知識和實踐經(jīng)驗[4]，不同的獸醫(yī)觀察人員針對同樣的病理組織切片可能會得出不同的觀察結(jié)果，尤其是病變類型較多的切片。本次研究為避免此現(xiàn)象的出現(xiàn)，初步采用1名觀察人員進行判定，但在后期的研究中可采用1名或多名獸醫(yī)進行觀察，并采用一致性分析對結(jié)果做出研判。隨著飼養(yǎng)條件的改善，傳染性疾病在圈養(yǎng)野生動物中發(fā)生的比例逐步下降，但應(yīng)激性、免疫性等非傳染性疾病和養(yǎng)殖過程中不明原因的致病因素呈上升趨勢，再對癥狀觀察得不到確切診斷結(jié)論時，組織病理觀察可為診斷疾病提供重要的輔助，尤其對于因肝臟病變?nèi)缰靖巍⒅卸拘愿窝椎瓤商峁┓浅Ｖ匾囊罁?jù)。

表1 圈養(yǎng)野生動物肝組織病變類型 例

表2 圈養(yǎng)野生動物肝組織病變數(shù)量

此外，影響切片的制作也會影響觀察效果，石蠟切片制作時間較長，制作工藝也相對復(fù)雜，其中幾個步驟較為關(guān)鍵，如脫水、切片、透明、染色等[5]。因此，在制作石蠟切片的過程中需要標準化程序，且選擇制作經(jīng)驗較為豐富的人員進行質(zhì)量控制。此外，石蠟切片相對制作較為簡單的冰凍切片可長期保存，具有復(fù)檢復(fù)核的優(yōu)勢。

4 結(jié) 論

本研究通過對本園保存的85例肝臟組織進行石蠟切片制作和觀察發(fā)現(xiàn)，肝細胞變性、肝小葉排列紊亂和炎性細胞浸潤為收集肝臟組織中最主要的病變類型。肝細胞變性常見于缺氧、缺血、中毒、感染等系列疾病，肝小葉排列紊亂可見于肝硬化的早期，而炎性細胞浸潤可出現(xiàn)在多種情況下，以肝炎為主。在獸醫(yī)臨床實踐中，尤其是動物園中圈養(yǎng)野生動物疾病的實踐中，除觀察相應(yīng)的癥狀外，可結(jié)合相應(yīng)的病理組織切片觀察，總結(jié)多種疾病造成肝組織切片病變類型，從而對疾病做出準確診斷并進行疾病防治，尤其是對較為珍貴的野生動物具有較大的經(jīng)濟和實踐價值。