李延新，杜 雄

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，陜西 延安 716000)

胃癌是指起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，該病屬于消化科常見(jiàn)疾病，也是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的腫瘤之一，排名第五。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球每年約有100萬(wàn)新發(fā)胃癌病例，雖然胃癌發(fā)病率有逐年下降趨勢(shì)，但死亡率并未出現(xiàn)下降，仍然位居所有癌癥中的第二位，約占10%。我國(guó)是胃癌高發(fā)國(guó)家之一，發(fā)病人數(shù)及死亡人數(shù)均約占全世界的50%，每年死于胃癌人數(shù)高達(dá)約22萬(wàn)人[1-3]。胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，早期臨床癥狀并不明顯，多為噯氣、上腹不適等，與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病類(lèi)似，易被忽略，多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，且胃癌預(yù)后較差，5年生存率不足20%[4-6]。早期的診斷及分析對(duì)后續(xù)治療具有重要的意義，也是改善胃癌患者預(yù)后的重要手段，因而尋找一種能夠?qū)ξ赴┻M(jìn)行病情監(jiān)控及預(yù)后判斷的指標(biāo)尤為重要[7]。近些年隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的基因指標(biāo)被應(yīng)用于胃癌的診斷與治療中，DOK2是一種位于人類(lèi)染色體8P21.3上的抑癌基因，能夠編碼412個(gè)氨基酸，在人體的胸腺、脾、腎臟等組織中均有表達(dá)，已被應(yīng)用于卵巢癌、肺腺癌、大腸癌等疾患的診斷中[8-9]。本研究旨在探究DOK2基因在早期胃癌患者中的表達(dá)意義，并對(duì)DOK2基因表達(dá)同早期胃癌病理特征的相關(guān)性進(jìn)行分析，以期為早期胃癌的診斷和鑒別提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至12月于延安大學(xué)附屬醫(yī)院接受治療的30例胃癌患者為實(shí)驗(yàn)組，采集其胃癌組織、癌旁組織，同時(shí)采集30例正常胃黏膜組織作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組男性16例，女性14例，年齡38～67歲，平均年齡(53.01±3.11)歲，胃癌TNM分期：T1+T2期13例，T3+T4期17例，N0+N1期15例，N3+N4期15例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移14例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移16例，低分化20例，中高分化10例。對(duì)照組男性15例，女性15例，年齡30～65歲，平均年齡(53.12±3.02)歲。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①實(shí)驗(yàn)組個(gè)體均經(jīng)臨床診斷確診為早期胃癌；②意識(shí)清晰能夠配合調(diào)研；③入組對(duì)象病歷資料齊全；④經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施；⑤患者或其家屬簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②妊娠或哺乳期女性；③調(diào)研前接受放療者；④并發(fā)其他影響調(diào)研結(jié)果疾患者。

1.2 方法

采集胃癌患者的胃癌組織及癌旁組織，采集對(duì)照組個(gè)體正常胃黏膜組織，采用RT-PCR法對(duì)3種組織DOK2基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并實(shí)施差異性比較；而后采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3種組織中DOK2蛋白表達(dá)情況；最后對(duì)DOK2蛋白表達(dá)與早期胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后生存的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)及評(píng)估方法

①不同胃黏膜組織中DOK2mRNA表達(dá)情況；②不同胃黏膜組織中DOK2蛋白表達(dá)情況，蛋白表達(dá)情況采用半定量積分法，即隨機(jī)選擇顯微鏡下10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野中標(biāo)記100個(gè)細(xì)胞，合計(jì)評(píng)估1000個(gè)細(xì)胞，分別對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞占比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分；其中陽(yáng)性細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞0%計(jì)為0分，占比<10%為1分，占比10%～50%為2分，占比>50%為3分；染色強(qiáng)度無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；總分為陽(yáng)性細(xì)胞占比計(jì)分和染色強(qiáng)度計(jì)分的乘積，研究中總分4分以下代表低表達(dá)，4分以上代表高表達(dá)[10]；由2名醫(yī)務(wù)人員在雙盲條件下進(jìn)行閱片計(jì)分；③DOK2蛋白表達(dá)與早期胃癌患者臨床病例特征的相關(guān)性；④對(duì)早期胃癌患者實(shí)施隨訪(fǎng)，評(píng)估DOK2蛋白表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)(mean±S.D.)的形式表達(dá)，組間差異性比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]的形式表達(dá)，組間差異性比較采用卡方檢驗(yàn)，取P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，取P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同胃黏膜組織DOK2mRNA表達(dá)強(qiáng)度比較

癌組織中DOK2mRNA表達(dá)明顯低于癌旁組織和正常組織(P<0.05)，癌旁組織與正常組織表達(dá)水平差異不明顯(P>0.05，見(jiàn)表1)。

表1 不同胃黏膜組織DOK2 mRNA表達(dá)強(qiáng)度比較

2.2 不同胃黏膜組織DOK2蛋白表達(dá)情況

胃癌組織DOK2蛋白高表達(dá)率明顯低于癌旁組織和正常組織(P<0.05)，癌旁組織與正常組織DOK2蛋白表達(dá)強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05，見(jiàn)表2)。

表2 不同胃黏膜組織DOK2蛋白表達(dá)情況比較[n(%)]

2.3 早期胃癌患者DOK2蛋白表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性分析

30例胃癌患者中DOK2蛋白低表達(dá)率為40.00%(12/30)，DOK2蛋白低表達(dá)與早期胃癌患者病灶浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均存在密切相關(guān)性(P<0.05)，與早期胃癌患者年齡、性別、是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05，見(jiàn)表3)。

表3 早期胃癌患者DOK2蛋白表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性分析[n(%)]

2.4 早期胃癌患者DOK2蛋白表達(dá)與其生存時(shí)間相關(guān)性分析

經(jīng)隨訪(fǎng)記錄發(fā)現(xiàn)，早期胃癌患者生存時(shí)間同其浸潤(rùn)深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度以及DOK2蛋白表達(dá)程度均呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性(P<0.05，見(jiàn)表4)。

表4 早期胃癌患者DOK2蛋白表達(dá)與其生存時(shí)間相關(guān)性分析

3 討論

胃癌是現(xiàn)階段常見(jiàn)惡性腫瘤之一，我國(guó)的流調(diào)學(xué)顯示，胃癌的死亡率已經(jīng)由20世紀(jì)70年代的第4位上升至第1位，這些數(shù)據(jù)均提示，胃癌已經(jīng)對(duì)我國(guó)居民的生命健康造成了嚴(yán)重威脅[11-12]。胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中以胃竇部為主，其次為胃底賁門(mén)部，發(fā)生與胃體部的相對(duì)較少。早期胃癌臨床癥狀不明顯，因而多數(shù)患者確診時(shí)以處于胃癌中晚期，這給治療帶來(lái)了較大的影響。近些年隨著分子生物學(xué)在癌癥治療中應(yīng)用的推廣，各類(lèi)基因療法在早期胃癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中都發(fā)揮了重要作用，成為醫(yī)務(wù)工作者的研究重點(diǎn)方法。

DOK屬于酪氨酸殘基磷酸化蛋白質(zhì)的一種，共包括DOK1-DOK77個(gè)成員，DOK是多種蛋白酪氨酸激酶的共同底物，廣泛參與了多種細(xì)胞的增殖、凋亡、生長(zhǎng)、遷移等進(jìn)程。近些年已有較多研究證實(shí)DOK2同細(xì)胞癌變進(jìn)程具有密切聯(lián)系[13]。DOK2屬于人類(lèi)染色體8P21.3上的抑癌基因，在人體的胸腺、脾、腎臟等組織中均有表達(dá)。有學(xué)者[14]的細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DOK2具有抑制肺癌細(xì)胞增殖的作用;同時(shí)還有研究指出[10]，結(jié)直腸癌組織中DOK2表達(dá)相對(duì)正常組織呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)態(tài)，缺失率達(dá)36%，這些數(shù)據(jù)都說(shuō)明DOK2的表達(dá)缺失同細(xì)胞癌變存在一定關(guān)聯(lián)性。

本研究通過(guò)對(duì)比分析的方式，對(duì)DOK2在早期胃癌中的表達(dá)意義以及DOK2同早期胃癌患者病理相關(guān)性分析顯示，DOK2在胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜中都有表達(dá)，但在胃癌組織中存在明顯的表達(dá)缺失現(xiàn)象。不同組織DOK2蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較顯示，胃癌組織中DOK2蛋白呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)態(tài)，高表達(dá)態(tài)僅為40.00%，而癌旁組織和正常胃黏膜組織DOK2蛋白高表達(dá)態(tài)分別達(dá)到86.67%和90.00%，差異明顯，這與翟立廣，等[10]的研究結(jié)果相一致，該學(xué)者的研究顯示116例胃癌患者中DOK2蛋白低表達(dá)態(tài)占62.9%，上述數(shù)據(jù)提示DOK2蛋白的表達(dá)在早期胃癌中呈現(xiàn)異常狀態(tài)，分析其原因可能與DOK2的表達(dá)缺失影響了細(xì)胞代謝，或DOK2能夠通過(guò)影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控細(xì)胞代謝有關(guān)。本研究對(duì)DOK2的表達(dá)同早期胃癌病例特征的相關(guān)性分析顯示，DOK2蛋白低表達(dá)與早期胃癌患者病灶浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度均存在密切相關(guān)性(P<0.05)，與早期胃癌患者年齡、性別、是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，DOK2基因?qū)儆谝职┗虻囊环N，DOK2低表達(dá)態(tài)對(duì)應(yīng)癌細(xì)胞的活躍狀態(tài)，胃癌患者細(xì)胞分化程度越低、浸潤(rùn)深度越深或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都代表病情較為嚴(yán)重，預(yù)后較差，這也對(duì)應(yīng)提示DOK2的表達(dá)越低。DOK2高表達(dá)態(tài)胃癌患者的生存時(shí)間要明顯優(yōu)于DOK2低表達(dá)態(tài)的胃癌患者，提示DOK2可以作為判斷早期胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一。

綜上所述，DOK2表達(dá)減少或缺失與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有可能成為胃癌預(yù)防、診斷和治療中的一個(gè)新靶點(diǎn)。期待未來(lái)會(huì)有更多關(guān)于DOK2在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用研究，并明確其分子機(jī)制，以利于胃癌的診斷、治療和預(yù)后。