黃佳雯，梁佳威，景曉寧，鄭楓

（1.中國藥科大學(xué)，江蘇南京211198；2.南京卡文迪許生物工程技術(shù)有限公司，江蘇南京210033）

乙酰氨基酚，又名撲熱息痛，是一種有效的乙酰苯胺類解熱鎮(zhèn)痛藥。乙酰氨基酚的經(jīng)典工業(yè)生產(chǎn)工藝為鐵粉還原對硝基苯酚后使用乙酸和乙酸酐酰化。

乙酸酐，又名醋酐、無水乙酸，是一種重要的有機(jī)化工生產(chǎn)原料，多應(yīng)用于醋酸纖維、農(nóng)藥、醫(yī)藥、染料、香料等生產(chǎn)行業(yè)。目前,乙酸酐的工業(yè)制備方法主要為乙醛氧化法、乙烯酮法和醋酸甲酯羰基合成法三種[1]。由于生產(chǎn)工藝的差異，乙酸酐中的雜質(zhì)也多種多樣，常見的有：乙酸、丙酸、丙酸酐、乙丙酸酐、乙腈、亞乙基二乙酸酯等[2]。

在乙酰氨基酚合成工藝中發(fā)現(xiàn)乙酸酐中微量的丙酸酐雜質(zhì)參與酰化反應(yīng)，生成丙酰氨基酚。企業(yè)根據(jù)原料實(shí)際情況，按照ICH 指導(dǎo)原則中未知雜質(zhì)的要求對丙酰氨基酚進(jìn)行控制，不考慮富集作用，丙酸酐以1∶1 轉(zhuǎn)化為丙酰氨基酚，因此在原料乙酸酐中控制丙酸酐含量，將限度擬定為0.1%?，F(xiàn)行GB/T 10668-2000 工業(yè)乙酸酐標(biāo)準(zhǔn)未對雜質(zhì)丙酸酐含量作出要求，基于現(xiàn)狀，急需開發(fā)一種測定乙酸酐中丙酸酐殘留量的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

氣相色譜儀：Agilent6890，Agilent 色譜工作站。

1.2 試劑

乙酸酐（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170301、20180124；國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20180705）、二氯甲烷（農(nóng)殘級，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）、丙酮（色譜純，TEDIA）、乙腈（色譜純，Merk）、丙酸酐（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度：98.5%，批號(hào)：B1915168）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1（60m×0.53mm×3.0μm）；進(jìn)樣口溫度：150℃；檢測器溫度：180℃；載氣：氮?dú)?；柱流量?mL/min；程序升溫：初始柱溫80℃，保持5min，以10℃/min 升溫至140℃，保持10min；分流比為20∶1；進(jìn)樣量為1μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品貯備液的配制

精密稱取丙酸酐對照品50mg，置于10mL 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻，作為對照品貯備液。

2.2.2 對照品溶液的配制

精密移取貯備液0.1mL，置于10mL 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3 混合對照品溶液的配制

精密稱取乙酸酐50mg、丙酸酐50mg、乙酸50mg、丙酸50mg，置于同一10ml 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻，作為混合對照品貯備液，再精密移取該貯備液0.1mL，置于10mL 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的配制

精密稱定乙酸酐0.5g，置于10mL 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

考察在此色譜條件下空白溶劑以及乙酸酐樣品中可能存在的雜質(zhì)如乙酸、丙酸對丙酸酐的測定是否有干擾。取混合對照品溶液，按照擬定色譜條件進(jìn)行檢測分析，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果表明，空白溶劑不干擾檢測，乙酸酐中其它殘留溶劑均不干擾丙酸酐的檢測，本方法專屬性良好。

圖1 專屬性試驗(yàn)氣相色譜圖

2.4 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取丙酸酐對照品溶液，按照擬定色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖。計(jì)算結(jié)果得到連續(xù)6 次進(jìn)樣丙酸酐峰面積的RSD 為1.3%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.5 對照溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取丙酸酐對照品溶液，按照擬定色譜條件，在0h、2h、4h、6h、8h、10h 進(jìn)樣，記錄色譜圖。計(jì)算結(jié)果得到0～10h 內(nèi)丙酸酐峰面積的RSD 為2.9%，表明丙酸酐對照品溶液在10h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 線性試驗(yàn)

精 密 移 取 對 照 品 貯 備 液0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，各置于100mL 量瓶中，加入二氯甲烷定容，搖勻。分別相當(dāng)于限度質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%、50%、80%、100%、120%、150%，每份線性溶液進(jìn)一針，按照擬定色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以質(zhì)量分?jǐn)?shù)C 為橫坐標(biāo)，丙酸酐峰面積A 為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，試驗(yàn)結(jié)果見表1 和圖2。結(jié)果表明丙酸酐在10.09～75.68μg/mL 范圍峰面積與質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈良好的線性關(guān)系。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

圖2 丙酸酐標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7 定量限與檢測限試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下20%對照溶液，按信噪比為10∶1的要求逐級稀釋配制定量限溶液，擬定色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。按信噪比為3∶1 的要求逐級稀釋配制檢測限溶液，擬定色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明：定量限質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.08μg/mL，靈敏度為4.16%；檢測限質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.62μg/mL，靈敏度為1.25%。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

分別精密稱定9 份乙酸酐0.5g，置于10mL量瓶中，分加入對照品貯備液0.03mL、0.1mL、0.13mL，加入二氯甲烷定容，搖勻，即獲得30%回收率溶液、100%回收率溶液、130%回收率溶液（其中每個(gè)水平的回收率溶液配制3 份），按照擬定色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明丙酸酐的總平均回收率為100.3%，RSD 為0.8%。數(shù)據(jù)見表2。

表2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.9 耐用性試驗(yàn)

取對照溶液，進(jìn)樣分析，分別考察不同載氣流速（±0.2mL/min）、進(jìn)樣口溫度（±5℃）對耐用性的影響。結(jié)果表明，各條件下丙酸酐的精密度均符合要求，RSD ≤5%。

2.10 樣品測定

取三批乙酸酐（上海凌峰：20170301，上海凌峰：20180124，國藥滬試：20180705），按照“2.2.4”項(xiàng)下配制供試品溶液，按照擬定色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，測定丙酸酐殘留量。結(jié)果表明，三批供試品中均未檢出丙酸酐。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

分別在DB-1（60m×0.53mm×3.0μm）、DB-FFAP（30m ×0.53mm ×1.5μm）、HP -5 （30m ×0.32mm ×0.25μm）、DB-5 （30m×0.53mm×1.00μm）、SE-30（30m×0.53mm×0.5μm）色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，分析比較試驗(yàn)結(jié)果后得出在DB-1 色譜柱上分離效果好，因此選擇該毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。

3.2 溶劑的選擇

乙酸酐、丙酸酐易溶于丙酮、乙腈、二氯甲烷等有機(jī)試劑，考慮到乙酸酐、丙酸酐遇水分解，應(yīng)選擇含水量少的溶劑。使用870 卡氏水分儀測定溶劑含水量，得到丙酮含水量0.46%，乙腈含水量0.02%，二氯甲烷含水量0.01%。因此采用二氯甲烷作為溶劑。

3.3 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)的選擇

考 察30mg/mL、40mg/mL、50mg/mlL、60mg/mL樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)，對應(yīng)0.1%限度質(zhì)量分?jǐn)?shù)目標(biāo)物響應(yīng)大小。結(jié)果表明：樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50mg/mL，對照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50μg/mL 時(shí)丙酸酐響應(yīng)達(dá)到要求，且峰對稱度高。因此選擇50mg/mL 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行試驗(yàn)。數(shù)據(jù)見表3。

表3 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)選擇