廣東省佛山市順德區(qū)廣州中醫(yī)藥大學(xué)順德醫(yī)院附屬均安醫(yī)院（528329）梁曉靜

1 資料與方法

1.1 一般資料 ①選擇2017年～2018年收集的1164株腸桿菌科菌株開展研究，選擇對于碳青霉烯類不敏感的腸桿菌科細(xì)菌共計(jì)152株（樣本來源1）。②選擇2017年～2018年我院臨床分離的腸桿菌科菌株506株，擇選亞胺培南≥2mg/L細(xì)菌菌株216株（樣本來源2）。③選擇2017～2018年臨床分離腸桿菌科細(xì)菌318株，選擇對于亞胺培南/美羅培南腸桿菌科細(xì)菌34株（樣本來源3）。

1.2 方法 ①碳青霉烯基因酶篩選以及確定：本實(shí)驗(yàn)使用Hodge實(shí)驗(yàn)開展基因酶篩選。加入苯硼酸以及苯唑西林改良后的實(shí)驗(yàn)和EDTA協(xié)同實(shí)驗(yàn)針對碳青霉烯藥物敏感性下降的402株腸桿菌科細(xì)菌開展酶表型篩查。并使用PCR擴(kuò)增法針對相關(guān)基因開展了擴(kuò)增以及測序。所使用的引物參照文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行，針對陽性產(chǎn)物實(shí)施測序以及確認(rèn)；②藥物敏感性檢測；③實(shí)施脈沖腸凝膠電泳；④多位點(diǎn)序列分型；⑤接合實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)利用描述性方式，完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析工作。

2 結(jié)果

2.1 耐藥基因測定 本實(shí)驗(yàn)內(nèi)，在碳青霉烯藥物敏感度下降的細(xì)菌內(nèi)，酶基因攜帶率為26.4%。表型篩查以及基因檢測符合率達(dá)到了100.00%。在此同時(shí)，針對生產(chǎn)酶菌株用PCR擴(kuò)增法檢測喹諾酮、ESBLs等諸多耐藥基因以及整合子，106株產(chǎn)碳青霉烯腸桿菌科細(xì)菌也攜帶多類耐藥基因，其整合子的攜帶率達(dá)到了5.7%。其為I類整合子。

2.2 藥物敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果 針對106株腸桿菌科細(xì)菌使用瓊脂稀釋法開展厄他培南、亞胺培南、美羅培南以及其余臨床常見MIC測定，見附表。

附表 產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌細(xì)菌針對抗菌藥物MIC分布詳情（株）

2.3 產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌水平傳播和分子流行病學(xué)分析情況 ①PFGE分型情況 將66株產(chǎn)碳青霉烯克雷伯菌砸分為三型2個(gè)亞型。18株產(chǎn)碳青霉烯弗勞地砸枸緣酸桿菌分為四個(gè)亞型，10株產(chǎn)碳青霉烯酶陰溝腸桿菌分成4個(gè)型。12株產(chǎn)碳青霉烯情酶大腸埃希菌為相同型。②接合實(shí)驗(yàn) 把106株產(chǎn)碳青霉烯酶類的腸桿菌細(xì)菌和大腸埃希菌EC600完成接合。取得56株帶有碳青霉烯耐藥基因接合子。其接合成功率達(dá)到了52.8%。③MLST 66株產(chǎn)碳青霉烯酶克雷伯菌使用MLST，對內(nèi)部存在的7個(gè)管家基因片段經(jīng)PCR擴(kuò)增以及測序，得出引物。且經(jīng)比對證實(shí)。在58株產(chǎn)KPC-2型碳青霉烯克雷伯菌均是ST11。攜帶IMP-4內(nèi)，6株為ST876（來自相同醫(yī)院）。2株為ST147（來自于同一地）。

3 討論

目前，諸多體外藥敏監(jiān)測結(jié)果表示，替加環(huán)素以及多黏菌素針對碳青霉烯酶非敏感腸桿菌科細(xì)菌依舊保持高度活性。因?yàn)槎囵ぞ兀兄叨拘缘奶卣?。因此其在使用上受到了一定限制。針對臨床多重耐藥中包含碳青霉烯酶耐藥腸桿菌科細(xì)菌依舊保留了較為良好的體外抗菌活性，因此其可以被視為臨床治療多重耐藥菌感染的新的選擇方向[1][2]。本實(shí)驗(yàn)利用結(jié)合實(shí)驗(yàn)針對106株產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌分別和大腸埃希菌EC600完成結(jié)合，有效研究碳青霉烯酶耐藥基因于不同腸桿菌科細(xì)菌間水平傳遞狀況。結(jié)果證實(shí)：碳青霉烯酶基因結(jié)合成功率為52.8%，證實(shí)碳青霉烯酶基因很容易與不同腸桿菌科細(xì)菌之間呈現(xiàn)出水平轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。這必須引起醫(yī)院的高度重視，以有效防止院內(nèi)感染暴發(fā)流行。