余連喜，黃建軍，黃 真，梁雄燕

（1.江陵縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 荊州 434100；2.長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

鴨坦布蘇病毒病 （Duck Tembusuvirus，DTMUV）是一種由黃病毒科黃病毒屬恩塔亞病毒群中的黃病毒引起的可以導(dǎo)致鴨共濟(jì)失調(diào)、癱瘓、卵巢出血壞死及產(chǎn)蛋量驟降的傳染性疾病[1-2]。2010年該病首次在我國的江蘇、浙江和福建等地區(qū)的鴨群中暴發(fā)[3-5]，隨后迅速蔓延到全國各地鴨群[6-9]，成為嚴(yán)重威脅我國養(yǎng)鴨業(yè)的重要疾病。

2019年秋，湖北荊州某蛋鴨養(yǎng)殖場的5000只3周齡雛鴨突然出現(xiàn)采食量下降、排綠色稀便，進(jìn)而站立不穩(wěn)、共濟(jì)失調(diào)和迅速死亡。經(jīng)過剖檢和實驗室診斷，確診為鴨坦布蘇病毒感染。用小柴胡散和扶正解毒散等藥物治療后鴨群病情迅速得到控制，并逐步恢復(fù)健康。

1 材料與方法

1.1 病例及主要試驗材料

病鴨為湖北荊州某蛋鴨場的3周齡雛鴨。RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR Mix等相關(guān)試劑均購自于北京艾德萊生物科技有限公司。

1.2 臨床診斷與剖檢

詢問病史，觀察送檢病鴨的臨床癥狀，并按常規(guī)方法進(jìn)行病理學(xué)剖檢。

1.3 病原學(xué)檢測

取具有明顯病變的病鴨腦組織，用市售的RNA提取試劑盒提取RNA；以cDNA第一鏈合成試劑盒的隨機(jī)引物為引物，合成cDNA第一鏈作為模板；參照文獻(xiàn)[5，10-12]及genebank中的相關(guān)序列設(shè)計合成鴨坦布蘇病毒特異性PCR檢測引物，進(jìn)行鴨坦布蘇病毒核酸檢測。RNA提取、cDNA第一鏈合成具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行；PCR引物由武漢擎科創(chuàng)新生物科技公司合成，基因序列見表1。PCR體系采用25 μL體系，即：2× PCR Mix 12.5 μL，cDNA 模板 2 μL，10 pmol/μL的上下游引物DTMUV-iF、DTMUV-iR 各0.5 μL，去離子 H2O 9.5 μL。 熱循環(huán)條件為：94 ℃2 min；94 ℃ 10 s,55 ℃ 10 s,72 ℃ 10 s，30個循環(huán)；72℃ 5 min；16℃ 10 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖電泳進(jìn)行檢測。

表1 鴨坦布蘇病毒特異性RT-PCR檢測引物

1.4 治療

及時將確診鴨群中有明顯癥狀的鴨只從鴨群中挑出并分欄隔離，鴨舍每天用聚維酮碘進(jìn)行消毒。其余鴨只均使用小柴胡散粉劑和葡萄糖飲水，扶正解毒散拌料進(jìn)行治療。小柴胡散粉劑和扶正解毒散均為江西某藥廠生產(chǎn)，具體用量按以下比例進(jìn)行：小柴胡散粉劑100 g和葡萄糖粉3 kg加水100 L，供鴨群飲用。扶正解毒散按0.1%混飼，5 d為一個療程，視具體情況可適當(dāng)延長用藥時間或療程。治療過程中，對發(fā)病鴨只及時進(jìn)行分欄隔離，對死亡鴨只及時無害化處理。

2 結(jié)果

2.1 病史與臨床癥狀

畜主自訴鴨場共5000只3周齡的雛鴨，3 d前采食量突然下降，發(fā)病后第2天鴨群中部分鴨只跛行，站立不穩(wěn)，并出現(xiàn)零星死亡。第3天鴨只出現(xiàn)大批量死亡，3 d共死亡213只。為了弄清病因，將病鴨送檢，送檢的5只病鴨外觀羽毛蓬松凌亂，精神萎靡，其中3只斜頸跛行，站立不穩(wěn)，排綠色糞便。

2.2 病理變化

剖檢發(fā)現(xiàn)病鴨主要表現(xiàn)為腦膜充血、出血，脾臟腫大，肝臟有不規(guī)則出血點，卵巢及腎臟有散在出血點，如圖1。

2.3 特異性RT-PCR檢測結(jié)果

取具有臨床癥狀和剖檢病變明顯的病鴨腦組織提取RNA，用隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA第一鏈作為模板，然后用2對鴨坦布蘇病毒特異性引物分別進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果兩對引物分別從被檢樣本中擴(kuò)增出約250 bp和400 bp大小的條帶，與鴨坦布蘇病毒特異性RT-PCR預(yù)期擴(kuò)增片段大小相符，如圖2。

2.4 治療結(jié)果

對患病鴨群使用小柴胡散飲水和扶正解毒散拌料進(jìn)行治療，用藥3 d后鴨群精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，日死亡數(shù)大幅度減少，用藥5 d后停止死亡，用藥10 d后鴨群恢復(fù)正常。全程共死亡288只，死亡率5.76%。

3 討論

鴨坦布蘇病毒病是一種由黃病毒科黃病毒屬恩塔亞病毒群的坦布蘇病毒引起的鴨病毒性傳染病[1-2]。鴨坦布蘇病毒病可以通過蚊蟲傳播，不同日齡或不同階段的鴨都可感染發(fā)病，臨床表現(xiàn)和癥狀不盡相同，而且這些癥狀容易與其他疾病相混淆[1,3,13]，所以在臨床上常需與臨床表現(xiàn)、病理剖檢結(jié)合病原學(xué)進(jìn)行確診。本研究中養(yǎng)殖場送檢的鴨以站立不穩(wěn)、跛行和共濟(jì)失調(diào)為主要癥狀，病理剖檢主要表現(xiàn)為腦膜充血出血，高度疑似鴨黃病感染，進(jìn)一步用兩對鴨黃病特異性引物進(jìn)行RT-PCR檢測，結(jié)果兩對特異性引物均擴(kuò)增出了與鴨坦布蘇病毒對應(yīng)的特異性條帶。因此，確診為鴨坦布蘇病毒感染。

對鴨坦布蘇病毒病目前仍無特效治療藥物，我國雖然已研制出可用于預(yù)防鴨坦布蘇病毒病的疫苗，但是在生產(chǎn)實踐中一些預(yù)防意識不強的中小規(guī)模養(yǎng)殖戶常忽視疫苗接種而給該病的發(fā)生提供了可乘之機(jī)，因此近年該病在我國各地鴨群中時有發(fā)生。中草藥是我國的瑰寶，其源于天然，具有副作用小、療效確切、價格相對低廉的特點和優(yōu)勢，在我國人和動物疫病防治中一直發(fā)揮著重要作用，尤其在防治動物病毒性疾病方面效果顯著。據(jù)報道，在臨床試驗中一些中草藥制劑可以對鴨坦布蘇病毒病起到一定的防治作用[13-17]。為了盡快控制疫情，我們嘗試用中草藥制劑小柴胡散飲水和扶正解毒散拌料混飼，對患病鴨群進(jìn)行治療，結(jié)果鴨群的病情得以迅速控制，治愈率達(dá)到90%以上，收到了較好的療效。這一結(jié)果表明，中草藥在鴨的坦布蘇病毒病防治中具有較大的探索空間。