張冬麗,霍萬學(xué)，王 迪，呂 廣

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼028000)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種能特異性感染人類皮膚和黏膜的小型雙鏈環(huán)狀DNA病毒，具有多種型別，目前已經(jīng)確定的HPV型別大約有100余種，其中40多種與生殖道疾病有關(guān)[1]。HPV根據(jù)其導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的能力大小分為低危型HPV 和高危型HPV，通過大量的流行病學(xué)和病原學(xué)研究，已經(jīng)明確高危型HPV是宮頸癌前病變和浸潤性宮頸癌發(fā)生的必要條件[2]，低危型HPV多引起良性病變[3]。故HPV分型檢測對于宮頸病變的早期篩查、防治及預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。本研究采用導(dǎo)流雜交的方法對565例女性患者HPV感染進(jìn)行了分型檢測，將檢測結(jié)果與其他地區(qū)對比分析，旨在為臨床醫(yī)生對本地區(qū)HPV感染的預(yù)防和治療提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 研究對象2016年3月至2018年11月在內(nèi)蒙古民族大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)研究所就診的565例患者，年齡21-65歲。

1.2 試劑與儀器HPV21分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)，快速導(dǎo)流核酸雜交儀(凱普生物技術(shù)有限公司)，PCR 儀(ABI2720)，離心機(jī)(珠海黑馬公司)。

1.3 方法

1.3.1樣本的采集 采集人員以窺器暴露宮頸口，用棉拭子將宮頸口多余的分泌物擦去。將采樣刷深入宮頸口，順時(shí)針輕輕轉(zhuǎn)動采樣刷5周，取出采樣刷，將其放入裝有細(xì)胞保存液的樣本管中，在瓶口處將刷柄折斷，將刷頭留在樣本管中，旋緊管蓋，注明姓名和日期。如不能馬上檢測，應(yīng)將樣本置于4℃存放，并于兩周內(nèi)完成檢測。

1.3.2檢測方法與結(jié)果判讀 采用PCR儀、潮州凱普生物化學(xué)有限公司的快速導(dǎo)流核酸雜交儀及其配套試劑，對標(biāo)本進(jìn)行DNA分離提取、擴(kuò)增，以凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交儀為平臺，利用導(dǎo)流雜交原理，在已經(jīng)固定好核酸探針的低密度基因芯片膜上，可一次性快速檢測21種HPV亞型的基因分型。包括15種高危亞型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68；6種低危亞型:6、11、42、43、44 和81(CP8304)。檢測過程嚴(yán)格參照說明書進(jìn)行，其中包括DNA分離提取、PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物雜交、顯色和結(jié)果判斷。

1.3.3不同地區(qū)數(shù)據(jù)處理與對比方法 按上述檢測方法得到通遼地區(qū)565例女性HPV分型檢測結(jié)果，將21種基因亞型的陽性率進(jìn)行了排序。同時(shí)，將檢索獲得的2013年以來我國其他不同地區(qū)以相同檢測試劑、相同的檢測方法獲得的21種HPV亞型的陽性率進(jìn)行了同樣的處理。東北地區(qū)選擇黑龍江省[4]、華北地區(qū)選擇河北省[5]、華中地區(qū)選擇湖南省[6]、華東地區(qū)選擇江西省[7]、華南地區(qū)選擇廣東省[8]、西南地區(qū)選擇貴州省[9]、西北地區(qū)選擇寧夏[10]。具體數(shù)據(jù)處理以6亞型為例，通遼地區(qū)及其他7個(gè)地區(qū)陽性率和該亞型陽性率在本地區(qū)21種HPV亞型陽性率中的排序分別是：9.84%(6)、6.05%(10)、7.08%(4)、2.15%(14)、0.75%(15)、2.74%(12)、6.87%(5)、4.63%(5)；將上述8個(gè)地區(qū)某一種HPV亞型陽性率排序數(shù)的和除以8共得到21個(gè)平均基數(shù)，將這些平均基數(shù)按照大小排序，即得到某一種HPV亞型的平均序位。如果有的地區(qū)某一種HPV亞型檢測數(shù)據(jù)欠缺，排序數(shù)的和除以數(shù)據(jù)完整的地區(qū)數(shù)，得到實(shí)際平均序位。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)均采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染的年齡分布情況、各年齡段的總例數(shù)以及陽性率565例女性標(biāo)本中共檢出陽性標(biāo)本183例，總感染率為32.39%。不同年齡組受檢人數(shù)及陽性例數(shù)、陽性率見表1。各年齡組HPV感染的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.84，P<0.05)。

表1 不同年齡人群感染率

2.2HPV感染的型別分布情況在21種HPV亞型中除43型外，其他20種亞型均有檢出，最常見類型依次為16、58、39、6、11。其中單一亞型感染115例(20.35%，115/565)，混合亞型感染68例(12.04%，68/565)。在HPV高危型別感染中以HPV16型最多共38例次，其次為HPV58型27例次，39型23例次。在HPV低危型別感染中以HPV6型最多共18例次，其次是11型15例次。見表2。

2.3 通遼地區(qū)與其他地區(qū)HPV分型檢測結(jié)果對比見表3。

3 討論

本研究共有565例女性患者，HPV感染率為32.39%，與國內(nèi)其他7個(gè)地區(qū)比較：東北地區(qū)的黑龍江省45.36%、華北地區(qū)的河北省38.49%、華中地區(qū)的湖南省14.81%、華東地區(qū)的江西省49.17%、華南地區(qū)的廣東省24.69%、西南地區(qū)的貴州省34.47%、西北地區(qū)的寧夏34.36%。與上述地區(qū)相比感染率處于中等偏下水平，提示HPV感染率可能與地域差異有關(guān)，也可能由于不同的研究者篩查時(shí)選取的研究對象有關(guān)。

表2 HPV各型別感染構(gòu)成比

文獻(xiàn)報(bào)道HPV感染情況與年齡有一定關(guān)系。本研究在不同年齡組HPV感染陽性率有差異：21-30歲年齡組感染率最高，其次為50歲以上組。可能由于年輕女性，因?yàn)樾陨铑l繁而感染HPV的機(jī)會增多[11]，而對于年長女性，又處于絕經(jīng)期、卵巢功能下降和機(jī)體對外界有害因素的抵抗力降低，加上宮頸因多次分娩而受損容易被HPV感染[12]。

本研究在21種HPV亞型中除43型外，其他20種亞型均有檢出，高危型以HPV16、58、39為主，低危型以HPV6、11為主。與前述的其他7個(gè)地區(qū)相比：與平均序位無差別的有HPV16、53、58、59、42、43；低于平均序位1位的有HPV68；低于平均序位2位有HPV45；低于平均序位4位的有HPV18；低于平均序位5位的有HPV52；低于平均序位7位的有HPV81；低于平均序位10位的有HPV33。高于平均序位1位的有HPV35、56、44；高于平均序位2位的有HPV6；高于平均序位4位的有HPV66、11；高于平均序位5位的有HPV31、51；高于平均序

表3 通遼地區(qū)與其他地區(qū)HPV分型檢測結(jié)果對比

位6位的有HPV39。這說明在各個(gè)地區(qū)HPV流行的亞型是有差異的，這對疫苗的研發(fā)具有指導(dǎo)意義。目前第一代疫苗只針對HPV16和18型，在新一代疫苗的研發(fā)中，世界衛(wèi)生組織專家提出如果增加HPV31、33、35、45、52和58型，可以在預(yù)防70%的子宮頸癌基礎(chǔ)上增加約20%的預(yù)防能力[13]，同時(shí)我國的疫苗研發(fā)還應(yīng)對HPV39型予以重視。