陳夢(mèng)穎，索昊，張舒婷*，孫寶山*

（1. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)功能食品與葡萄酒學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110016；2. 深圳大學(xué)高等研究院，廣東深圳 518060）

葡萄酒釀造過(guò)程中可產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物——葡萄渣，常作為廢物被丟棄，成為環(huán)境污染源之一。利用葡萄渣制備具有生物活性的小分子物質(zhì)無(wú)疑具有良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。葡萄籽富含原花青素類(lèi)成分，基于其強(qiáng)效的抗氧化特性，近年來(lái)備受關(guān)注。原花青素單倍體和低聚體可直接吸收入血，發(fā)揮功效[1-2]，而高聚體則由于聚合度高，難以被人體吸收，導(dǎo)致生物利用度低；還會(huì)抑制機(jī)體內(nèi)的α-淀粉酶、脂肪酶、α-葡萄糖苷酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等消化酶的活性[3-5]。因此，將高聚原花青素降解轉(zhuǎn)化為低分子活性物質(zhì)成為葡萄酒廢渣利用的新途徑。本研究選用葡萄酒生產(chǎn)過(guò)程中的副產(chǎn)物葡萄籽高聚原花青素作為研究對(duì)象，采用實(shí)驗(yàn)室首次建立的降解方法，利用新型親核試劑硫普羅寧完全降解高聚原花青素，獲得新型降解產(chǎn)物。對(duì)所獲得降解產(chǎn)物進(jìn)行應(yīng)用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、2,2-連氮-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽（ABTS）自由基清除作用以及總抗氧化能力的體外抗氧化活性研究，建立H9C2和PC12細(xì)胞氧糖剝奪模型來(lái)研究新型降解產(chǎn)物對(duì)兩種細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，并從構(gòu)效關(guān)系角度探究降解產(chǎn)物活性的變化規(guī)律，對(duì)新型降解產(chǎn)物的潛在生物活性及構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行初步探索。

1 材料和儀器

1.1 材料與試劑

葡萄籽原花青素提取物購(gòu)自天津尖峰有限公司。

硫普羅寧購(gòu)自瑪雅生物科技有限公司；L-抗壞血酸購(gòu)自瑞士Fluka公司；過(guò)硫酸鉀、醋酸鈉、三氯化鐵、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉均購(gòu)自博迪化工有限公司；醋酸購(gòu)自科密歐化工有限公司；濃鹽酸、甲醇（分析級(jí)）、乙酸乙酯（分析級(jí)）購(gòu)自富宇精細(xì)化工有限公司；無(wú)糖DMEM培養(yǎng)液、高糖DMEM培養(yǎng)液、RPMI 1640均購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、DPPH、ABTS、2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪（TPTZ）、奎諾二甲基丙烯酸酯（Trolox）、DMSO均購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；CT、ECT、ECGT均為實(shí)驗(yàn)室自制（純度＞96.5%）；大鼠H9C2（2-1）心肌細(xì)胞、大鼠PC12神經(jīng)細(xì)胞均購(gòu)于北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜ACQUITY UPLC H-CLASS、Waters 2695、Waters PDA檢測(cè)器、Empower 2工作站，均產(chǎn)自美國(guó)沃特世公司；高速逆流色譜儀（TBE-300C），上海同田生化技術(shù)有限公司；YMC ODS-A-HG和5% CO2恒溫培養(yǎng)箱，日本YMC公司；KH-250DE超聲儀，禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；缺氧小室，加拿大Stemcell公司。

2 方法

2.1 高聚原花青素的制備降解與分離純化

2.1.1 高聚原花青素的制備

稱(chēng)取適量葡萄籽原花青素提取物加入100 mL蒸餾水溶解。將溶液上樣于蒸餾水預(yù)處理后的YMC ODS-A-HG（200×25 mm，25～40 μm）C18色譜柱，依次加入蒸餾水（pH7.0）、乙酸乙酯各200 mL洗脫層析柱，最后以200 mL甲醇洗脫出高聚原花青素。將高聚原花青素粗提液蒸發(fā)去除溶劑、蒸餾水溶解、凍干，粉末于-20 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 高聚原花青素的降解

稱(chēng)高聚原花青素提取物約1 g，置于500 mL具塞反應(yīng)瓶中，依次加入甲醇200 mL、濃鹽酸6.6 mL、硫普羅寧1 g，混勻密閉，于55 ℃反應(yīng)60 min，冰浴終止反應(yīng)。加入適量的水，并用0.1 mol NaHCO3調(diào)節(jié)pH7.0，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)替換甲醇溶劑，乙酸乙酯（200 mL）萃取3次。合并萃取層，加入適量的無(wú)水硫酸鈉除水，40 ℃減壓濃縮乙酸乙酯萃取層。真空凍干，粉末于-20 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 高速逆流色譜法分離降解產(chǎn)物

高速逆流色譜法的（H S C C C）色譜條件參考索昊等[6]的方法以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝0.12∶1.5∶0.5∶1（vol）為溶劑體系，采用正接正轉(zhuǎn)的洗脫模式。在25 ℃恒溫條件下，以流速35 mL/min和轉(zhuǎn)速950 r/min對(duì)400 mg降解產(chǎn)物進(jìn)行分離制備。在波長(zhǎng)254 nm下檢測(cè)記錄，根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集流出組分，35 ℃真空濃縮后，冷凍干燥備用。

2.1.4 降解產(chǎn)物的純化

色譜條件為YMC-Triart C18色譜柱（250 mm×10 mm，5μm）。柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：100 μL；流速：2.5 mL/min；洗脫條件：A為0.2%甲酸水溶液，B為0.2%甲酸乙腈溶液，梯度洗脫程序如表1。

2.2 降解產(chǎn)物的抗氧化活性研究

2.2.1 對(duì)照溶液及供試品溶液制備

稱(chēng)取Trolox對(duì)照品約10.3 mg至10 mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，搖勻，分別制得摩爾濃度為1.003 mmol的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取上述對(duì)照品溶液適量，用甲醇稀釋成濃度分別為0.201、0.401、0.602、0.802、1.003 mmol Trolox系列對(duì)照溶液。

精密稱(chēng)取兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）、兒茶素-4β-S-硫普羅寧甲酯（CT）、表兒茶素-4β-S-硫普羅寧甲酯（ECT）和表兒茶素沒(méi)食子酸酯-4β-S-硫普羅寧甲酯（ECGT）置于5 mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，搖勻，制得對(duì)照品儲(chǔ)備液，即C（4 mmol）、EC（4 mmol）、ECG（2 mmol）、CT（2 mmol）、ECT（2 mmol）、ECGT（2 mmol）。分別精密量取上述對(duì)照品溶液適量，用甲醇分別稀釋成一系列摩爾濃度的供試品溶液。

2.2.2 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參考Sá和Brand-Williams等[7-8]的方法，略作修改。96孔板中每孔依次加入DPPH工作液200 μL，不同濃度的供試品溶液或Trolox對(duì)照溶液5 μL，以DPPH工作液200 μL+甲醇5 μL為空白，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。室溫下暗處放置60 min，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定供試品、對(duì)照和空白溶液在517 nm處的吸光度，計(jì)算清除率SR，同時(shí)將能夠有效清除50%自由基的樣品濃度定義為抗氧化活性（EC50）。

A0為空白液吸光度；Ai為對(duì)照或供試品液吸光度。

2.2.3 ABTS自由基清除能力的測(cè)定

在96孔板中依次加入200 μL的ABTS工作液和10 μL不同濃度的樣品溶液和VC、Trolox溶液，搖勻，室溫下動(dòng)態(tài)測(cè)定波長(zhǎng)734 nm處的吸光度A（n＝3）?？瞻捉M用pH 4.5醋酸緩沖液代替ABTS工作液，對(duì)照組用甲醇代替樣品溶液。計(jì)算清除率SR，同時(shí)將能夠有效清除50%自由基的樣品濃度定義為抗氧化活性（EC50）。

2.2.4 FRAP法測(cè)定總抗氧化能力

在96孔板中依次加入180 μL的FRAP工作液和5 μL不同濃度的樣品溶液，Trolox、FeSO4溶液，搖勻，在37 ℃下進(jìn)行孵育，動(dòng)態(tài)測(cè)定波長(zhǎng)在593 nm處的吸光度A（n＝3）。對(duì)照組用甲醇代替樣品溶液，空白組用pH 3.6醋酸緩沖液代替FRAP工作液，以FeSO4溶液濃度為縱坐標(biāo)，A為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)反應(yīng)后A值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上求得相對(duì)應(yīng)的FeSO4的濃度（mmol），將其定義為FRAP值[9]。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure

2.3 降解產(chǎn)物對(duì)氧糖剝奪12h致大鼠PC12神經(jīng)細(xì)胞及H9C2心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將H9C2細(xì)胞培養(yǎng)于含有89%DMEM、10%Gibco FBS、1%雙抗（青霉素和鏈霉素）的培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。PC12神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)同H9C2細(xì)胞培養(yǎng)，但PC12神經(jīng)細(xì)胞基本培養(yǎng)基為RPMI 1640。

2.3.2 氧糖剝奪試驗(yàn)

將細(xì)胞正常培養(yǎng)在培養(yǎng)皿內(nèi)，待細(xì)胞飽和度達(dá)到80%～90%時(shí)進(jìn)行傳代，待細(xì)胞貼壁穩(wěn)定24 h后，對(duì)照組換成正常培養(yǎng)液，于正常培養(yǎng)箱培養(yǎng)；模型組換成無(wú)糖DMEM培養(yǎng)液，不含血清；給藥組換成無(wú)糖DMEM配置相應(yīng)濃度藥物，不含血清。模型組和給藥組同時(shí)放入缺氧小室（95%N2＋5%CO2），氧糖剝奪12 h進(jìn)行細(xì)胞存活率測(cè)定。

2.3.3 噻唑藍(lán)（MTT）法測(cè)定細(xì)胞存活率

氧糖剝奪時(shí)間結(jié)束后棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，換成新鮮培養(yǎng)液；每孔加入10 μL配制好的MTT溶液（0.5 mg/mL），使細(xì)胞與MTT于37 ℃下共同作用4 h后，棄掉上清，加入100 μL DMSO于570 nm處測(cè)定OD值。

國(guó)內(nèi)齒圈熱處理主要應(yīng)用高頻感應(yīng)淬火工藝，但是因感應(yīng)器的結(jié)構(gòu)會(huì)帶來(lái)不同的淬硬效果。通常齒圈上下兩端面的淬硬層深度相同，即兩端面的淬硬層硬度也相同，硬度高了就會(huì)產(chǎn)生齒心部脆易斷裂的缺陷，大大降低齒的耐用性。在齒圈的實(shí)際工作時(shí)，僅僅與嚙合齒輪接近的端面受較大的沖擊，而與飛輪連接貼合的端面應(yīng)該保持較軟具有緩沖的功用最佳。這樣歸結(jié)起來(lái)就是齒面硬、齒心部相對(duì)較軟才是最佳的齒圈淬火狀態(tài)，倒梯形結(jié)構(gòu)的淬火感應(yīng)器可以達(dá)到這個(gè)“外硬內(nèi)軟”的理想狀態(tài)。

數(shù)據(jù)處理：以一次實(shí)驗(yàn)3個(gè)復(fù)孔計(jì)算每組樣品的平均OD值。按照公式：CV/%=OD(給藥組)/OD(對(duì)照組)×100，計(jì)算出細(xì)胞相對(duì)活力變異系數(shù)（CV）。相同實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以3次CV%平均值進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

2.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 22.0軟件處理，用GrahPad Prism 6.0作圖。采用單因素方差分析（ANOVA）和雙變量相關(guān)性分析，并用Dunnett's test分析方法比較組間差異，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。

3 結(jié)果與分析

3.1 高聚原花青素制備降解及分離純化

采用硫普羅寧作為親核試劑完全降解葡萄籽高聚原花青素，運(yùn)用HSCCC結(jié)合半制備液相色譜分離高聚原花青素降解產(chǎn)物，共獲得3個(gè)原花青素單體成分，分別是兒茶素（C）、表兒茶素（EC）和表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）；3種新型降解產(chǎn)物分別為硫普羅寧衍生物兒茶素-4β-S-硫普羅寧甲酯（CT）、表兒茶素-4β-S-硫普羅寧甲酯（ECT）和表兒茶素沒(méi)食子酸酯-4β-S-硫普羅寧甲酯（ECGT）。一步HSCCC可以成功分離獲得3個(gè)單體降解產(chǎn)物和一個(gè)組分A，其中單體降解產(chǎn)物ECG、ECT、ECGT的產(chǎn)量為6.50 mg、29.8 mg、10.3 mg，純度分別為90.3%、93.7%、89.5%。組分A經(jīng)半制備液相色譜分離與純化，獲得C、EC與CT，產(chǎn)量分別為12.2 mg、7.70 mg與11.8 mg，純度均可以達(dá)到95%以上。

3.2 降解產(chǎn)物的抗氧化活性

3.2.1 降解產(chǎn)物的體外DPPH自由基的清除能力

對(duì)不同濃度6種降解產(chǎn)物的體外DPPH自由基的清除能力進(jìn)行測(cè)定，對(duì)它們的抗氧化性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，EC50值與線(xiàn)性范圍見(jiàn)表2。6種降解產(chǎn)物的EC50值在210～350，均小于Trolox（陽(yáng)性對(duì)照）的EC50788.24，表明6種降解產(chǎn)物清除DPPH自由基的能力強(qiáng)于Trolox（陽(yáng)性對(duì)照）。其中活性最強(qiáng)的是ECG。C、CT、ECT的抗氧化活性相似。

3.2.2 降解產(chǎn)物的體外ABTS自由基的清除能力

6種降解產(chǎn)物的EC50值在72～141，均小于陽(yáng)性對(duì)照Trolox的EC50值384，即6種降解產(chǎn)物清除ABTS自由基能力均強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照。C、EC和ECT之間以及ECG、CT和ECGT之間清除ABTS自由基能力無(wú)顯著性差異，其中ECG清除ABTS自由基的能力最強(qiáng)（表3）。

3.2.3 FRAP法測(cè)定總抗氧化能力

6種降解產(chǎn)物的FRAP值與范圍見(jiàn)表4。測(cè)定結(jié)果與DPPH和ABTS抗氧化的結(jié)果相似，各降解產(chǎn)物的FRAP值在2.21～2.96，大于Trolox（陽(yáng)性對(duì)照）的FRAP 2.03，即6種降解產(chǎn)物的還原Fe3+-TPTZ能力均大于Trolox（陽(yáng)性對(duì)照）。C和CT之間FRAP以及EC和ECT之間的FRAP還原能力無(wú)顯著差異。降解產(chǎn)物中ECG的還原能力最大，ECT的還原能力最小。

綜合分析DPPH、ABTS和FRAP三種方法的抗氧化活性測(cè)定結(jié)果，6種原花青素降解產(chǎn)物的抗氧化活性均大于陽(yáng)性對(duì)照Trolox，活性順序?yàn)镋CG＞ECGT＞CT≈C＞ECT≈EC＞Trolox。降解獲得到的6種化合物有希望作為強(qiáng)效的抗氧化劑使用。

3.3 降解產(chǎn)物對(duì)氧糖剝奪致大鼠PC12神經(jīng)細(xì)胞及H9C2心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究

3.3.1 降解產(chǎn)物對(duì)氧糖剝奪致大鼠PC12神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

表2 DPPH法測(cè)定的6種化合物的抗氧化活性和線(xiàn)性范圍Table 2 Antioxidant activity and linear range of six compounds by DPPH assays

表3 ABTS法測(cè)定的6種化合物的抗氧化活性和線(xiàn)性范圍Table 3 Antioxidant activity and linear range of six compounds by ABTS assays

表4 FRAP測(cè)定的6種化合物的抗氧化活性和線(xiàn)性范圍Table 4 Antioxidant activity and linear range of six compounds by FRAP assays

如圖1所示，與對(duì)照組相比，氧糖剝奪12 h后模型組細(xì)胞存活率明顯下降，表明已成功建立了氧糖剝奪致PC12神經(jīng)細(xì)胞損傷模型。在原花青素的6種降解產(chǎn)物中，ECGT在11 μmol和33 μmol時(shí)可以顯著提高氧糖剝奪的PC12神經(jīng)細(xì)胞的存活率，并呈現(xiàn)出明顯地劑量依賴(lài)性，而降解產(chǎn)物C、EC和ECG未見(jiàn)其對(duì)氧糖剝奪12 h致PC12神經(jīng)細(xì)胞存活率有明顯的積極作用。此外，通過(guò)C和CT、EC和ECT以及ECG和ECGT的三對(duì)母體與衍生物的結(jié)果對(duì)比中發(fā)現(xiàn)，在ECG對(duì)細(xì)胞損傷不具有明顯改善作用時(shí)，ECGT能夠表現(xiàn)出較好的改善作用。側(cè)面反映ECG在引入硫普羅寧甲酯基團(tuán)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后能夠?qū)?xì)胞損傷的保護(hù)起到積極作用，說(shuō)明ECGT的活性強(qiáng)于ECG。

3.3.2 降解產(chǎn)物對(duì)氧糖剝奪致大鼠H9C2心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

如圖2所示，與對(duì)照組相比，氧糖剝奪12 h后模型組細(xì)胞存活率顯著降低，表明已成功建立氧糖剝奪致H9C2心肌細(xì)胞損傷模型。在原花青素的6種降解產(chǎn)物中，ECGT在33 μmol時(shí)可以顯著提高氧糖剝奪12 h致H9C2心肌細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率，而降解產(chǎn)物CT和ECT均未見(jiàn)其對(duì)氧糖剝奪12 h致H9C2心肌細(xì)胞存活率具有改善作用。

通過(guò)對(duì)氧糖剝奪致神經(jīng)細(xì)胞和心肌細(xì)胞損傷兩種模型的作用結(jié)果可以得出，降解衍生物ECGT對(duì)兩種模型的細(xì)胞損傷均具有顯著的改善作用，其活性強(qiáng)于其它兩個(gè)降解產(chǎn)物CT、ECT。

圖1 降解產(chǎn)物對(duì)OGD誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞活力降低的影響Figure 1 Effects of degradation products on OGD-induced reduction of PC12 cell viability###: P＜0.001 vs.ctrl, **: P＜0.01, ***: P＜0.001 vs.model

圖2 降解產(chǎn)物對(duì)OGD誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞活力降低的影響Figure 2 Effects of degradation products on OGD-induced reduction of H9C2 cell viability###: P＜0.001 vs.ctrl, ***: P＜0.001 vs.model

4 討論與結(jié)論

抗氧化研究方面，6種降解產(chǎn)物的抗氧化活性與其自身化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)?？傮w趨勢(shì)是母體中的羥基數(shù)目越多，其抗氧化能力越強(qiáng)，因此原花青素ECG及其衍生物ECGT的抗氧化活性明顯高于非沒(méi)食子?；脑ㄇ嗨谻、EC及其衍生物CT、ECT。研究表明，降解衍生物對(duì)母體進(jìn)行修飾，引入帶有羥基的化合物，可以增強(qiáng)母體的抗氧化活性。在本課題組的前期研究中，Zhang等[10]采用間苯三酚作為親核試劑，在酸性條件下葡萄籽高聚原花青素能高效的降解為原花青素單體C、EC、ECG及其間苯三酚衍生物CP、ECP、ECGP。在上述6種降解產(chǎn)物中，連接有間苯三酚（P）的ECGP的抗氧化活性高于其他5種化合物，而相應(yīng)的衍生物CP、ECP的抗氧化活性也高于其母核C、EC。而本研究中，在母體化合物中引入硫普羅寧甲酯后，其衍生產(chǎn)物的抗氧化活性并沒(méi)有得到顯著加強(qiáng)，這可能與硫普羅寧甲酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。

氧糖剝奪致細(xì)胞損傷的保護(hù)作用方面，從新型降解產(chǎn)物CT、ECT和ECGT化學(xué)結(jié)構(gòu)看，ECGT的羥基數(shù)目最多，說(shuō)明羥基數(shù)目的多少影響對(duì)氧糖剝奪致細(xì)胞損傷的改善活性。羥基數(shù)目越多，其活性越強(qiáng)。在對(duì)比母體ECG和降解產(chǎn)物ECGT的活性時(shí)發(fā)現(xiàn)，在母體ECG沒(méi)有明顯改善作用的濃度下，降解衍生物ECGT對(duì)氧糖剝奪后的兩種細(xì)胞均具有較好的改善作用。從ECG與ECGT的結(jié)構(gòu)分析，引入硫普羅寧甲酯后，新型降解產(chǎn)物ECGT的活性強(qiáng)于母體ECG，說(shuō)明引入硫普羅寧甲酯也可以增加細(xì)胞的存活率。

眾所周知，原花青素具有強(qiáng)的抗氧化活性，其對(duì)心腦血管具有保護(hù)作用[11-13]。親核試劑硫普羅寧也有減輕阿霉素所致大鼠心肌組織的氧化損傷而達(dá)到對(duì)心肌組織的保護(hù)作用等報(bào)道[14]。原花青素-硫普羅寧衍生物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)表明，其有可能成為一種新的抗氧化劑和心腦血管保護(hù)劑。本研究以葡萄酒生產(chǎn)過(guò)程中的廢棄物葡萄籽高聚原花青素為研究對(duì)象，采用新型親核試劑硫普羅寧對(duì)其進(jìn)行降解轉(zhuǎn)化。首次對(duì)高聚原花青素的新型降解產(chǎn)物CT、ECT和ECGT的生物活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，3種新型降解產(chǎn)物CT、ECT、ECGT及其母體化合物均具有強(qiáng)抗氧化活性。降解產(chǎn)物對(duì)氧糖剝奪致H9C2心肌細(xì)胞及PC12神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究中，引入硫普羅寧的新型降解衍生物ECGT對(duì)氧糖剝奪損傷后的細(xì)胞有顯著的改善作用。因此，ECGT等作為原花青素與硫普羅寧加成的降解衍生物，其抗氧化活性可顯著的改善細(xì)胞損傷活性，即高聚原花青素降解轉(zhuǎn)化為可利用的生物活性物質(zhì)，為今后葡萄酒廢棄物高聚原花青素的開(kāi)發(fā)利用提供又一有效方法。