張紹君,李俊巧,張永剛，劉靜

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是由環(huán)境、遺傳等因素引起的以B淋巴細(xì)胞異?；罨?、自身抗體產(chǎn)生、免疫復(fù)合物沉淀為主要病理特征的自身免疫性疾病[1]。 SLE病因、發(fā)病機(jī)制尚不十分明確 。磷脂酰絲氨酸特異性磷脂酶A1(PS-PLA1)是一種特異性作用于磷脂酰絲氨酸并產(chǎn)生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，被認(rèn)為是一種參與免疫系統(tǒng)的溶血磷脂介質(zhì)[2]。趨化因子配體19(CCL19)結(jié)合趨化因子受體7(CCR7)后，參與多種炎性反應(yīng)及免疫反應(yīng)性疾病[3]。PS-PLA1、CCL19在SLE中的研究報(bào)道十分少見(jiàn)，其與SLE免疫功能障礙是否存在關(guān)聯(lián)尚不清楚，現(xiàn)檢測(cè)SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平，分析其臨床意義，旨在為臨床治療提供新的靶點(diǎn)和思路，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年2月—2019年10月河北省保定市第一中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科收治SLE患者73例(SLE組)，男11例，女62例，年齡22～51(38.15±6.35)歲；臨床癥狀：口腔潰瘍21例，光過(guò)敏35 例，漿膜炎(胸膜炎和心包炎)19例，繼發(fā)干燥綜合征18例；有家族遺傳史21例。另選擇同期于醫(yī)院體檢的性別、年齡相匹配的健康志愿者50例為健康對(duì)照組，男9例，女41例，年齡26～57(39.05±6.49)歲。2組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理會(huì)批準(zhǔn)，受試者及家屬均知情同意并簽署同意書(shū)。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合“系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南”中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②首次確診SLE，既往無(wú)SLE或其他自身免疫性疾病史；③入組前未接受糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療；④SLE 疾病活動(dòng)度評(píng)分(SLEDAI)[5]≥5分。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并自身免疫性肝炎、自身免疫性胃炎、風(fēng)濕/類風(fēng)濕等其他免疫性疾病；②急、慢性感染者；③肝、腎功能障礙者。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 血清PS-PLA1、CCL19檢測(cè)：空腹采集靜脈血3 ml注入促凝試管，待血液凝固取上層液于離心管，置于TDZ4-WS低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)離心取血清，保存于-70℃低溫冰箱(日本三洋電器股份有限公司)，于48 h內(nèi)采用瑞士Hamilton FAME全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清PS-PLA1、CCL19水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司。

1.3.2 血常規(guī)檢測(cè)：空腹采集靜脈血3 ml注入抗凝試管，采用西門(mén)子ADVIA 2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分比(L)、血小板(PLT)、血紅蛋白(Hb)等。

1.3.3 免疫功能指標(biāo)檢測(cè)：空腹采集靜脈血3 ml注入干燥試管，采用免疫透射比濁法檢測(cè)靜脈血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM，補(bǔ)體C3、C4，試劑盒購(gòu)自美國(guó)Epitope Diagnostics公司。

1.3.4 疾病活動(dòng)度評(píng)價(jià)：收集臨床和實(shí)驗(yàn)室資料，采用SLEDAI[5]評(píng)價(jià)SLE疾病活動(dòng)度，該評(píng)分從胸膜炎、黏膜潰瘍、新發(fā)皮疹、脫發(fā)、膿尿、蛋白尿、血尿、管型尿、肌炎、關(guān)節(jié)炎、脈管炎、腦血管意外等18項(xiàng)內(nèi)容進(jìn)行評(píng)價(jià)，0～4分為基本無(wú)活動(dòng)，5～9分為輕度活動(dòng)，10～14分為中度活動(dòng)，≥15分為重度活動(dòng)。根據(jù) SLEDAI評(píng)估結(jié)果將患者分為輕度亞組(20例)、中度亞組(39例)、重度亞組(14例)。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清PS-PLA1、CCL19水平比較 SLE組血清PS-PLA1、CCL19水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 2組受試者血清PS-PLA1、CCL19水平比較

2.2 不同臨床特征SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平比較 有口腔潰瘍、光過(guò)敏、漿膜炎、繼發(fā)干燥綜合征的SLE患者血清PS-PLA1水平高于無(wú)口腔潰瘍、光過(guò)敏、漿膜炎、繼發(fā)干燥綜合征患者(P<0.05)。繼發(fā)干燥綜合征患者血清CCL19水平高于無(wú)繼發(fā)干燥綜合征患者(P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.3 SLE不同亞組間血清PS-PLA1、CCL19水平比較 血清PS-PLA1、CCL19水平比較，輕度亞組<中度亞組<重度亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表3。

2.4 2組血常規(guī)及免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平比較 SLE組WBC、L百分比、PLT、Hb、補(bǔ)體C3和C4水平低于健康對(duì)照組(P<0.01)，IgA、IgM、IgG水平高于健康對(duì)照組(P<0.01)，見(jiàn)表4。

2.5 SLE患者血清PS-PLA1、CCL19水平與SLEDAI評(píng)分、免疫功能指標(biāo)的相關(guān)性分析 SLE患者血清PS-PLA1水平與SLEDAI評(píng)分、IgG呈正相關(guān)(P<0.05)，與補(bǔ)體C3水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與IgA、IgM、補(bǔ)體C4水平無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。血清CCL19水平與SLEDAI評(píng)分、IgA、IgM、IgG水平呈正相關(guān)(P<0.05)，與補(bǔ)體C3、C4水平無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表5。

表3 SLE不同亞組患者血清PS-PLA1、CCL19水平比較

表5 血清PS-PLA1、CCL19水平與SLEDAI評(píng)分、免疫功能指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討 論

SLE是一種慢性、異質(zhì)性自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)和病程多種多樣，其病因、發(fā)病機(jī)制及最佳治療方法仍不清楚[6]。隨著臨床、病理學(xué)研究的不斷深入，SLE診斷、分類、治療藥物、疾病活動(dòng)度評(píng)估均不斷完善，患者生存率有了顯著提高，但是與健康人群相比，SLE病死率仍然較高，嚴(yán)重威脅患者健康和生命安全[7]。免疫功能障礙是SLE發(fā)病的主要病理基礎(chǔ)，探討與SLE免疫功能障礙相關(guān)的機(jī)制有助于評(píng)估該病的病情。本研究中SLE組IgA、IgM、IgG水平高于健康對(duì)照組，C3、C4水平低于健康對(duì)照組，推測(cè)原因?yàn)镾LE患者普遍存在體液免疫失衡，破壞正常免疫耐受機(jī)制，導(dǎo)致IgA、IgM、IgG水平升高，而由于自身抗體增多，抗原—抗體復(fù)合物形成，導(dǎo)致補(bǔ)體過(guò)度消耗，補(bǔ)體C3、C4水平下降[8-9]。PS-PLA1是產(chǎn)生溶血磷脂酰絲氨酸的磷脂酶，溶血磷脂酰絲氨酸是一種類似于溶血磷脂的甘油介質(zhì)，PS-PLA1可特異性水解溶血解磷脂酰絲氨酸，產(chǎn)生溶血磷脂酰絲氨酸，其代謝底物和代謝產(chǎn)物都有廣譜的生物學(xué)功能[10]。PS-PLA1屬于第二代生物活性脂質(zhì)介質(zhì)，由細(xì)胞膜中釋放的花生四烯酸衍生而來(lái)，通過(guò)細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與人體各種生理反應(yīng)，與細(xì)胞活化有關(guān)[11]。近期研究發(fā)現(xiàn)，PS-PLA1是一種參與免疫系統(tǒng)的溶血磷脂介質(zhì)，其基因多態(tài)性與Graves病發(fā)病有關(guān)[12]，但PS-PLA1在SLE中的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前缺乏相關(guān)臨床報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)SLE組患者血清PS-PLA1水平明顯升高，且PS-PLA1水平與SLEDAI評(píng)分、IgG呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3水平呈負(fù)相關(guān)，提示PS-PLA1可能通過(guò)體液免疫、補(bǔ)體系統(tǒng)參與SLE發(fā)病和疾病活動(dòng)進(jìn)展。

表2 SLE組不同臨床特征患者血清PS-PLA1、CCL19水平比較

表4 2組受試者血常規(guī)及免疫功能相關(guān)指標(biāo)水平比較

趨化因子配體參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞選擇性地遷移定植不同靶器官的過(guò)程，并調(diào)節(jié)靶器官病理免疫反應(yīng)，參與SLE發(fā)病及多系統(tǒng)受損的疾病進(jìn)展[13]。CCL19 屬于CC 類趨化因子，是誘導(dǎo)T細(xì)胞活化、免疫耐受、免疫監(jiān)視及炎性反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子。CCL19主要通過(guò)與B細(xì)胞表面受體CCR7結(jié)合發(fā)揮趨化作用[14]。B 細(xì)胞是表達(dá)CCR7 的重要細(xì)胞之一，而自身反應(yīng)性B細(xì)胞免疫耐受被打破是SLE主要發(fā)病機(jī)制之一，表現(xiàn)為自身反應(yīng)性B 細(xì)胞比例升高，免疫調(diào)節(jié)B 細(xì)胞數(shù)量下降，因此CCL19/ CCR7信號(hào)通路可能參與SLE的發(fā)生。相關(guān)報(bào)道指出，原發(fā)性干燥綜合征患者唾液腺中CCL19/CCR7表達(dá)顯著升高，與抗干燥綜合征相關(guān)抗原A (SSA)抗體、IgG水平有關(guān)，CCL19被報(bào)道同樣參與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病[15-16]。本研究SLE組血清CCL19水平高于健康對(duì)照組，分析原因?yàn)镾LE患者B細(xì)胞免疫失衡導(dǎo)致CCR7 表達(dá)減少，CCL19 水平升高，同時(shí)CCL19通過(guò)募集免疫細(xì)胞和炎性細(xì)胞激活免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致B 淋巴細(xì)胞異常活化，提示CCL19可能通過(guò)干擾B細(xì)胞亞群的穩(wěn)態(tài)參與SLE的發(fā)病過(guò)程。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清CCL19 水平與IgG、IgM、IgA水平呈正相關(guān)，說(shuō)明SLE患者血清CCL19水平升高可能與自身抗體的產(chǎn)生有關(guān)，CCL19可能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫球蛋白水平參與SLE的發(fā)病、疾病活動(dòng)過(guò)程。本研究在既往研究基礎(chǔ)上還對(duì)CCL19與SLE患者疾病活動(dòng)度的相關(guān)性進(jìn)行了初步探討，發(fā)現(xiàn)CCL19與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)，說(shuō)明CCL19與SLE活動(dòng)有關(guān)，CCL19 水平可反映SLE活動(dòng)狀態(tài)，這與既往相關(guān)報(bào)道指出CCL19隨著SLE發(fā)病時(shí)間和疾病活動(dòng)性不同而改變的結(jié)論相符[17]。 本研究發(fā)現(xiàn)CCL19與SLE患者繼發(fā)干燥綜合征有關(guān)，既往研究發(fā)現(xiàn)干燥綜合征是一種皮膚自身免疫性疾病，存在淋巴趨化因子配體CCL19、CXCL13、CCL21等異位表達(dá)[18]，提示CCL19與SLE繼發(fā)免疫系統(tǒng)損傷有關(guān)，可能是導(dǎo)致疾病進(jìn)展的主要因素之一，但是機(jī)制尚不清楚，可能與CCL19高度表達(dá)引起免疫球蛋白升高，增加抗體產(chǎn)生有關(guān)[19]。

綜上，SLE 患者血清PS-PLA1、CCL19水平明顯升高，PS-PLA1、CCL19可能通過(guò)體液免疫和/或補(bǔ)體調(diào)節(jié)參與SLE發(fā)病和疾病活動(dòng)過(guò)程，可作為輔助評(píng)估SLE疾病活動(dòng)度的潛在生物標(biāo)志物。本研究不足之處為研究時(shí)間尚短，研究樣本量較小，尚未對(duì)二者參與SLE疾病活動(dòng)和免疫功能異常的具體機(jī)制及遠(yuǎn)期預(yù)后進(jìn)行探討，在以后研究中會(huì)進(jìn)一步探討PS-PLA1、CCL19與SLE疾病活動(dòng)和免疫功能異常的分子機(jī)制，并完善SLE患者的隨訪，獲取更加全面的結(jié)論。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

張紹君：提出研究思路，設(shè)計(jì)研究方案、研究流程、撰寫(xiě)論文；李俊巧：設(shè)計(jì)論文框架、修訂論文、論文終審；張永剛：實(shí)施研究過(guò)程，數(shù)據(jù)收集，分析整理；劉靜：進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研與整理