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壯藥青風(fēng)藤總生物堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠PDGF、PAF表達的影響

2020-12-14 04:02:56曹知勇張青槐龐宇舟
關(guān)鍵詞:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

曹知勇 張青槐 龐宇舟

【摘 要】 目的:觀察壯藥青風(fēng)藤總生物堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠的治療療效以及對模型大鼠血清PDGF、PAF表達的影響。方法:選用40只SD大鼠,隨機分為空白組、模型組、青風(fēng)藤總生物堿低、中、高劑量組五組。除空白組外,其余組均采用Ⅱ型膠原酶誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠,造模后進行關(guān)節(jié)炎評分和體重記錄。給藥4周后處死,取血清,采用ELISA法檢測血清中PDGF、PAF的表達。結(jié)果:造模后,大鼠關(guān)節(jié)腫脹明顯,血清中PDGF、PAF表達顯著增加。給藥后,大鼠關(guān)節(jié)腫脹明顯好轉(zhuǎn),血清中PDGF、PAF表達較模型組低。結(jié)論:壯藥青風(fēng)藤總生物堿能有效減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀,并能抑制血清中PDGF、PAF表達。

【關(guān)鍵詞】 壯藥青風(fēng)藤;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;血小板生長因子;血小板活化因子

【中圖分類號】R29?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517(2020)20-0016-03

The Effect of Total Alkaloids of Sinomenine on the Expression of PDGF and PAF in Rheumatoid Arthritis Rats

CAO Zhiyong ZHANG Qinghuai PANG Yuzhou*

Guangxi Zhuang Yao Medicine Center of Engineering and Technology, Guangxi University of

Chinese Medicine, Nanning 530200, China

Abstract:Objective To observe the therapeutic effect of total alkaloids of sinomenia on rheumatoid arthritis model rats and the effect on the expression of serum PDGF and PAF.Methods 40 SD rats were randomly divided into five groups: blank group, model group, low, medium and high dose group. Except for the blank group. The other groups were induced by type II collagenase. Arthritis score and body weight were recorded. After 4 weeks of administration, the serum was taken and the expression of PDGF and PAF were detected by ELISA.Results After the establishment of the model, the joint swelling was obvious, and the expression of PDGF and PAF in serum increased significantly. After administration, the joint swelling of rats was improved obviously, and the expression of PDGF and PAF in serum was lower than that of model group.Conclusion the total alkaloids of sinomenia can effectively alleviate the symptoms of rheumatoid arthritis. It can also inhibit the expression of PDGF and PAF in serum.

Keywords:Caulis Sinomenii; Rheumatoid Arthritis; Platelet Growth Factor; Platelet Activating Factor

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一種類風(fēng)濕因子侵犯滑膜、關(guān)節(jié)的慢性免疫性疾病,最明顯的病理反應(yīng)是對機體關(guān)節(jié)和骨質(zhì)的破壞。同時,它也能引起全身性的并發(fā)癥,如肺炎、泌尿系感染、口腔潰瘍等。然而由于對于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病機病因認識并不徹底,導(dǎo)致類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療,差異性較大。目前行之有效的治療RA的藥物分為4大類:NSAIDs、DMARDs、糖皮質(zhì)激素及植物藥制劑[1],可是都易形成耐藥性。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程常常伴隨著血細胞的變化,尤其以血小板的活化最為相關(guān)。血小板生長因子(PDGF)和血小板活化因子(PAF)作為血小板活化后的產(chǎn)物,是RA過程中血小板活化的標準性指標[2]。青風(fēng)藤是防己科植物青藤(Sinomenium acuturn)及毛青藤(Sinamenium acutum)的干燥藤莖,是壯藥龍鉆通痹方的主要組成藥物,能通“龍路”“火路”,臨床上多用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,且療效顯著。青藤堿是壯藥青風(fēng)藤的主要化合物,具有抗炎、抑制移植物排斥、抗腫瘤以及抑制免疫等藥理作用[3]。但對RA患者的血小板的影響機制還不明確。本實驗就此現(xiàn)狀,望探究出青藤堿在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的過程中對血小板因子PDGF、PAF表達的影響。

1 材料

1.1 實驗動物 SPF級健康(SD)大鼠40只,8~10周齡,雄性,體質(zhì)量(180±20)g(湖南斯萊克景達,SCXK(湘)2016-002),適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后開始實驗。

1.2 材料 青風(fēng)藤干燥藤莖(購于廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,經(jīng)韋松基鑒定為防己科植物青藤藤莖Sinomenium acuturn);天然牛Ⅱ型膠原蛋白、完全弗氏佐劑、P-選擇素檢測試劑盒、PECAM-1檢測測試盒購自與南寧市鵬碧實驗室器材經(jīng)營部。

2 方法

2.1 分組與造模 將40只SD大鼠隨機分為空白組8只以及造模組32只,將溶于醋酸的牛Ⅱ型膠原蛋白先于4 ℃低溫保存過夜,第2 d與完全弗氏佐劑以等體積乳化,乳化成功后,對模型組大鼠背部及尾部多點行皮下注射,誘導(dǎo)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型;空白對照組大鼠注射等量0.9%氯化鈉溶液[4]。

2.2 造模評分 按照關(guān)節(jié)指數(shù)評分標準對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠進行評分,首次注射后每3 d稱重1次,每周固定兩名實驗員記錄關(guān)節(jié)腫脹評分。

2.3 給藥 造模后第21 d進行關(guān)節(jié)評分,評分>4分即認定為造模成功。成模大鼠隨機分為模型組n=8)和青藤堿低劑量組、青藤堿中劑量組、青藤堿高劑量組。分組后開始給藥:青藤堿組灌胃給予青藤堿的混懸液,低劑量組給藥青藤堿5 mg/kg/d;中劑量組給與10 mg/kg/d;高劑量組給藥20 mg/kg/d。模型組與對照組灌胃等量0.9%氯化鈉溶液;灌胃劑量按照10 mL/kg/d,每天1次,持續(xù)28 d。

2.4 實驗取材 造模成功后,行第一次眼眶取血,離心保存血清。第二輪取血于實驗結(jié)束后;此次取血先禁食一夜,次日于大鼠眼眶取血。ELISA法測定血清中PDGF、PAF水平,操作方法嚴格按試劑盒說明書操作。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠足關(guān)節(jié)指數(shù)的變化 造模后,大鼠多關(guān)節(jié)腫脹明顯,并伴有明顯紅腫;給藥后,大鼠關(guān)節(jié)明顯好轉(zhuǎn)。給藥第7、14、21 d時,壯藥青藤堿高劑量組足關(guān)節(jié)指數(shù)評分明顯低于模型組P<0.05),第28 d顯著低于模型組P<0.01);給藥第7、14、21、28 d,壯藥青藤堿中劑量組關(guān)節(jié)指數(shù)明顯下降,關(guān)節(jié)腫脹改善情況優(yōu)于模型組P<0.05);給藥第14、21、28 d,壯藥青藤堿低劑量組關(guān)節(jié)指數(shù)下降,關(guān)節(jié)腫脹改善情況優(yōu)于模型組P<0.05)。見表1。

3.2 各組大鼠血清PDGF、PAF的表達情況 給藥后,壯藥青藤堿高劑量組和空白組大鼠血清PDGF、PAF的表達顯著下降,且低于模型組P<0.01);壯藥青藤堿中、低劑量組大鼠血清PDGF、PAF的表達明顯下降,且低于模型組P<0.05)。見表2。

4 討論

RA在我國的發(fā)病率僅約為0.35%,但由于我國人口基數(shù)大,患病總?cè)藬?shù)超500萬,嚴重影響人民身心健康,甚至在某些地區(qū),患者中存在很高的抑郁率,給患者家庭和社會帶來了巨大負擔。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病和多種炎癥因子相關(guān),如腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、IL-4[5]、IL-6、IL-17[6]、IL-10、IL-1[7]、IL-1β[8]等。董文哲等[9]研究發(fā)現(xiàn),血細胞血小板的計數(shù)變化和RA的關(guān)系尤為密切,血小板的激活和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥反應(yīng)呈正相關(guān);而血小板的激活必然會分泌PDGF和PAF,導(dǎo)致PDGF和PAF在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎炎性反應(yīng)中呈現(xiàn)高表達[10]。

壯醫(yī)認為,RA屬于壯醫(yī)“發(fā)旺”(壯名:Fungcaep)范疇。該病的主要發(fā)病機理為風(fēng)、寒、濕、熱等毒邪乘虛侵入人體,阻滯“龍路” “火路”,使氣血運行不暢,痹阻于筋骨肌肉、關(guān)節(jié)所致;治療當祛風(fēng)除濕,行氣消腫止痛。壯藥龍鉆通痹方是壯醫(yī)治療活動期RA的經(jīng)驗方,該方遵循壯醫(yī)主幫配伍的組方原則。由飛龍掌血、大鉆、八角楓、兩面針、青風(fēng)藤、九龍?zhí)俚冉M成,能疏通“龍路”“火路”之瘀滯,直接祛邪外出,恢復(fù)天、人、地三氣的同步運行,從而達到治療目的。

青藤堿是壯藥青風(fēng)藤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎主要有效的化學(xué)成分,現(xiàn)代臨床及實驗發(fā)現(xiàn),青藤堿治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床效果顯著,對類風(fēng)濕發(fā)病過程中的各種炎性因子都有一定的影響。如能降低細胞因子IL-1、IL-6[14]、IL-1、IL-17[15]、TNF-α等的表達;還能上調(diào)IL-4[16]的表達,從而減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的滑膜增生和骨破壞。但是對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中血小板的影響情況卻研究不多。

本實驗發(fā)現(xiàn),青藤堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠的血小板因子PDGF和PAF有抑制作用,并能有效緩解大鼠關(guān)節(jié)腫脹,達到治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的效果。但在藥物濃度上有一定的要求。

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(收稿日期:2020-06-09 編輯:程鵬飛)

基金項目:國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81973976);壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心(桂教科研〔2013〕20號);廣西一流學(xué)科建設(shè)項目(編號:桂教科研[2018]12)。

作者簡介:曹知勇(1994-),男,土家族,碩士研究生在讀,研究方向為民族醫(yī)藥、中醫(yī)疑難雜病。E-mail:caozhiyong2019@163.com

通信作者:龐宇舟(1963-),男,漢族,碩士,教授,博士研究生導(dǎo)師,研究方向為民族醫(yī)藥、中醫(yī)內(nèi)科。E-mail:2017yuzhoupang@sina.com

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