摘要：膳食纖維可以影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)，通過(guò)觀察聚葡萄糖對(duì)于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響，對(duì)其調(diào)節(jié)免疫機(jī)制效應(yīng)有重要意義。巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈、吞噬、殺傷等功能，是機(jī)體起關(guān)鍵作用的免疫細(xì)胞，在機(jī)體非特異性防御中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)巨噬細(xì)胞被活化后，還能被作為抗原遞呈細(xì)胞參與，是先天免疫和后天免疫的橋梁，巨噬細(xì)胞的活化在免疫調(diào)節(jié)中起到了關(guān)鍵作用。

關(guān)鍵詞：聚葡萄糖;巨噬細(xì)胞;調(diào)控作用

聚葡萄糖（Polydextrose，PDX）為白色或類(lèi)白色顆粒，以1，6-糖苷鍵結(jié)合為主經(jīng)葡萄糖隨機(jī)聚合而成，是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜且高度分支含有多種糖苷鍵的多糖類(lèi)聚合物平均分子質(zhì)量約3200左右，聚合度約20，屬于可溶性膳食纖維。PDX雖然不能被人體消化，但可在腸道內(nèi)被有益菌分解為SCFA，可以起到改善腸道菌群微環(huán)境以及防治許多腸道疾病的作用。隨著生活條件的改善，人們的飲食中攝入的膳食纖維逐漸減少，所以現(xiàn)在對(duì)于膳食纖維的重要作用及合理應(yīng)用也越來(lái)越重視。人體攝入PDX后，不僅不會(huì)升高血糖，而且還能使縮短胃腸道消化吸收時(shí)間，在腸道中經(jīng)過(guò)腸道菌群分解后產(chǎn)生SCFA，從而調(diào)整腸道PH，改善腸道菌群微環(huán)境。雖然PDX對(duì)肥胖、心血管疾病、便秘、腹瀉以及結(jié)腸癌等多種疾病都具有防治作用，但在臨床上的應(yīng)用尚沒(méi)有明確的使用標(biāo)準(zhǔn)，其對(duì)于調(diào)控機(jī)體免疫功能的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

1.實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)材料

聚葡萄糖（批號(hào)：F2017112053112，廣州匯健生物科技有限公司）、RPMI-1640培養(yǎng)基（Gibco）、胎牛血清（Gibco）、MTT（Sigma）、PBS（上海麥克林生化科技有限公司）、DMSO（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

手術(shù)器械、超凈工作臺(tái)、TDL-5離心機(jī)、電子天平、CO2恒溫培養(yǎng)箱、MCO-17A倒置相差顯微鏡（COICXDS-1B）、酶標(biāo)儀（Multi-skan GO）等。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM小鼠，體重18-22g，雌雄不限（濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司），許可證號(hào)：SCXK（魯）20140007。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的制備

小鼠頸椎脫臼處死，75%酒精浸泡5min，腹腔注入5ml1640培養(yǎng)基，輕輕揉腹，剪開(kāi)皮膚，吸出腹腔液，1500rpm離心5min，棄掉上清液，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。將細(xì)胞加入96孔細(xì)胞板，每孔1×10個(gè)，100μl，放入CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h。

2.2 PDX溶液的制備

用RPMI-1640培養(yǎng)基配成0.01mg/ml、0.1mg/ml、1mg/ml儲(chǔ)備液備用，用滅菌后0.22μm濾膜過(guò)濾器過(guò)濾除菌。

2.3 PDX對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活性的影響

設(shè)置空白組，實(shí)驗(yàn)組（濃度分別為0.01mg/ml、0.1 mg/ml、1mg/ml），每組設(shè)置30個(gè)重復(fù)孔，空白組加入100μlRPMI-1640培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組依次加入100μl配好的試劑，分別培養(yǎng)2d，4d，6d，8d，10d，每組取6個(gè)重復(fù)孔，每孔加入20μlMTT溶液，培養(yǎng)4h后，棄去上清液，加入150μlDMSO，振蕩10min后，測(cè)量490nm波長(zhǎng)處OD值。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，采用IBM SPSS Statistics22.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

從表1中可以看出，與對(duì)照組比較，從第4d至第10d，PDX劑量組OD值對(duì)于空白組，均顯著升高（n=6，p<0.01），從表2中可看出，從第4d至第10d，PDX不同劑量組增值率均顯著高于對(duì)照組（P<0.01），因此，可推斷PDX能夠提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性。

5.總結(jié)

巨噬細(xì)胞活化后在形態(tài)上有著比較大的差別，但在功能上有許多相似點(diǎn)，比如抗原遞呈功能：能夠特異性結(jié)合T細(xì)胞表面的TCRαβ、CD3復(fù)合物分子，或者結(jié)合協(xié)同刺激分子受體CD2和CD28與T細(xì)胞相互作用從而調(diào)節(jié)獲得性免疫反應(yīng)。Chaen Y等經(jīng)過(guò)研究證明，活化后的巨噬細(xì)胞其吞噬能力大大增強(qiáng)，并且能夠分泌多種細(xì)胞因子，如TNF-α、ROI等，還能起到殺滅腫瘤細(xì)胞的效果，其釋放出的TNF-α、IL-6、IL-12能夠誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，從而起到殺滅病原微生物的作用。而在對(duì)于葡聚糖的研究中發(fā)現(xiàn)，樹(shù)突細(xì)胞dectin-1受體能夠被葡聚糖微顆粒激活從而使糖化血紅蛋白腫瘤壞死因子受體（GITRL）表達(dá)增加，通過(guò)GITRL通路可使T細(xì)胞得到增殖，進(jìn)而延緩腫瘤細(xì)胞的發(fā)展起到明顯效果。經(jīng)過(guò)體外研究證明，β-葡聚糖可影響多種免疫受體，如Dectin-1，CR3 和TLR-2/6，從而誘導(dǎo)免疫細(xì)胞發(fā)揮作用。

聚葡萄糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，預(yù)防結(jié)腸癌等作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比不同濃度PDX對(duì)于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響觀察得出，PDX可提高巨噬細(xì)胞活性，這一結(jié)果為應(yīng)用于調(diào)節(jié)免疫及防治免疫缺陷疾病奠定了理論基礎(chǔ)，并為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)含膳食纖維藥品提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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[2]帥小雪.基于甘露糖受體的黑靈芝多糖免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D].2015.

作者簡(jiǎn)介：王新功（1963.09）男，籍貫：山東省煙臺(tái)市，單位：山東中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，職稱(chēng)：副主任藥師，研究方向：中藥炮制。