李 峰，高志光，蔣杏麗，安 然，金 夢

（黑龍江省醫(yī)院耳鼻咽喉科，黑龍江 哈爾濱 150036）

聲帶白斑（vocal cord leukoplakia）具有惡變潛能的特質(zhì)，因此需要得到臨床的高度重視。細(xì)胞增殖的異常調(diào)控是惡性腫瘤發(fā)生的主要特征，而研究發(fā)現(xiàn)各種致病因素均會導(dǎo)致細(xì)胞中的癌基因激活，且抑癌基因失活，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞周期的調(diào)控發(fā)生改變，進(jìn)而引發(fā)癌變[1]。本研究應(yīng)用免疫組化的方法，對比分析成年聲帶白斑和成年聲帶良性病變患者中標(biāo)志蛋白的表達(dá)進(jìn)行探討，旨在為臨床早期診斷和預(yù)后判斷提供可靠的指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究納入2017年8月～2019年8月我院鼻咽喉頭科收治的120例換這個(gè)，所有患者均經(jīng)顯微手術(shù)明確病理性質(zhì)，其中成年聲帶白斑55例（包括伴上皮單純增生22例，伴上皮異型增生33例），成年聲帶良性病變42例（包括聲帶息肉28例，聲帶任克水腫14例）。成年聲帶良性病變組（n=42）中：男27例，女25例，年齡23～82歲；平均（52.52±5.36）歲。聲帶白斑伴上皮單純增生組（n=22）中：男12例，女10例，年齡23～82歲；平均（51.89±5.21）歲。聲帶白斑伴上皮異型增生組（n=33）中：男17例，女16例，年齡23～82歲；平均（52.23±5.45）歲。且上述資料中的組間數(shù)據(jù)對比差異均保持均衡性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)喉顯微手術(shù)明確病理性質(zhì)；聲帶白斑病變表現(xiàn)為聲帶單側(cè)或雙側(cè)白色點(diǎn)狀、片狀或外生性白色物。排除標(biāo)準(zhǔn)：有有喉部外傷、插管史、喉部活檢史、頭頸部放化療和手術(shù)史者；合并多種聲帶病變者；合并其他全身惡性腫瘤者；病變組織過小，不能制備足夠病理切片者。

1.2 方法

結(jié)合世界衛(wèi)生組織（WHO）修訂的頭頸部腫瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)（2005年）將所有聲帶白斑患者進(jìn)行病理分型，主要包括：重度異型增生、鱗狀上皮單純增生、輕度異型增生、原位癌及中度異型增生。選用VEGF，Survivin兔抗人多克隆抗體試劑；p53、Ki-67鼠抗人單克隆抗體；福州邁新公司生產(chǎn)的免疫組化試劑盒，對病例石蠟標(biāo)本二步法免疫組織化學(xué)染色檢測蛋白表達(dá)。Ki-67、p53陽性物質(zhì)分布在細(xì)胞核內(nèi)，VEGF在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜均可陽性染色。

1.3 判定方法

（1）細(xì)胞核陽性：根據(jù)占病變上皮細(xì)胞總數(shù)的比例，也就是陽性范圍進(jìn)行判定，①強(qiáng)陽性（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)＞50%；②陽性（++）：陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；③弱陽性（+）：陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%；④陰性（-）：陽性細(xì)胞數(shù)＜5%。

（2）細(xì)胞膜陽性和細(xì)胞質(zhì)陽性：①陽性細(xì)胞數(shù)所占比例：3分：陽性細(xì)胞＞50%；2分：陽性細(xì)胞26%～50%；1分：陽性細(xì)胞1%～25%；0分：未見陽性細(xì)胞著色。②根據(jù)免疫組化檢查結(jié)果中的染色范圍和染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷，3分：深棕黃色染色；2分：中等強(qiáng)度棕黃色染色；1分：淺棕黃色染色；0分：上皮細(xì)胞陰性染色。綜合評分為兩項(xiàng)積分的乘積：陰性（-）：0分；（+++）：7～9分；（++）：4～6分；（+）：1～3分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用x2檢驗(yàn)，將統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為：α=0.05，P小于0.05象征數(shù)據(jù)有差異。

2 結(jié) 果

聲帶白斑伴上皮單純增生和聲帶良性病變中的Ki-67、p53及VEGF表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。聲帶白斑伴上皮異型增生中的Ki-67、p53陽性表達(dá)比聲帶白斑伴上皮單純增生、聲帶良性病變的級別明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

聲帶白斑的的病因復(fù)雜，病理類型較多，臨床治療和隨訪的標(biāo)準(zhǔn)缺乏統(tǒng)一性。有相關(guān)研究表明，如何有效預(yù)測聲帶白斑中癌前病變的病理學(xué)特點(diǎn)、基因血特點(diǎn)及生物標(biāo)志物陽性表達(dá)情況等是未來臨床研究的重點(diǎn)方向[2]。相關(guān)研究證實(shí)，導(dǎo)致多種腫瘤發(fā)生的原因之一為抑癌基因p53的突變或缺失[3]。也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67是用判斷細(xì)胞增殖活性的參考指標(biāo)，能夠預(yù)測腫瘤的分化、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷。吳昆曼的研究指出，VEGF作為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，在腫瘤血管形成中發(fā)揮著重要的作用。上述因子與腫瘤的發(fā)證和發(fā)展之間存在著較為復(fù)雜的關(guān)系

本組研究發(fā)現(xiàn)Ki-67、p53及VEGF表達(dá)在聲帶白斑伴上皮單純增生和聲帶良性病變中的級別之間相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），并且Ki-67、p53及VEGF蛋白在聲帶白斑伴上皮異型增生中的陽性表達(dá)比聲帶白斑伴上皮單純增生、聲帶良性病變中的級別明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這提示異型增生程度會隨著陽性級別程度的增高而越嚴(yán)重。VEGF在不同病變組織中的陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這對病變嚴(yán)重程度并無明顯的提示性作用。而臨床需要對Ki-67、p53中等級別以上陽性表達(dá)的聲帶白斑伴上皮異型增生者加強(qiáng)觀察和隨訪。Ki-67、p53可以從分子生物學(xué)水平來反應(yīng)生物學(xué)特性和細(xì)胞異常增殖情況，且對異型增生向惡性轉(zhuǎn)變的早期診斷及預(yù)后預(yù)測有重要的指導(dǎo)意義。

綜上所述，Ki-67、p53陽性級別在聲帶白斑伴上皮異型增生中比聲帶良性病變明顯增高，能夠從分子生物學(xué)水平反應(yīng)細(xì)胞異常增殖情況和生物學(xué)特性，且同時(shí)對可能對診斷異型增生、癌前病變和判斷預(yù)后有重要的提示作用，臨床建議對于即使聲帶白斑伴輕．中度異型增生及Ki-67、p53中等級別以上陽性表達(dá)者需要加強(qiáng)密切隨訪。