張艷霞?杜倩怡?王繼成?杜麗?秦丹卿?姚翠澤?袁騰龍

【摘要】目的 分析廣東地區(qū)血紅蛋白H（HbH）病的血液學(xué)特征，為臨床遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷提供參考。方法 對廣東地區(qū)283例經(jīng)血紅蛋白電泳和基因診斷確診的HbH病患者進行血液學(xué)特征分析，采用血常規(guī)檢測及Hb電泳方法分別獲取各種基因型HbH病的紅細胞參數(shù)及各類型Hb含量，使用裂口PCR和PCR結(jié)合反向點雜交方法進行地中海貧血基因檢測。結(jié)果 283例HbH病患者中，缺失型HbH病202例（71.38%），包括132例--SEA/-α3.7和70例--SEA/-α4.2;非缺失型HbH病81例（28.62%），分別為7例--SEA/αQSα、 46例--SEA/αWSα和28例--SEA/αCSα。非缺失型HbH病患者（除--SEA/αWSα外）Hb為（78.69±15.65）g/L，比缺失型HbH病患者的（96.69±15.72）g/L低（P < 0.001）。非缺失型HbH病患者（除--SEA/αWSα外）HbH為（15.65±6.18）%，比缺失型HbH病患者的（7.00±4.18）%高（P < 0.001）。其中孕婦的紅細胞計數(shù)較低，為（3.37±0.71）×1012/L，Hb僅（66.75±14.27）g/L。結(jié)論 在廣東地區(qū)HbH病中，缺失型HbH病例占大多數(shù)，主要以--SEA/-α3.7為主，其次為--SEA/-α4.2。非缺失型HbH病患者貧血程度較缺失型HbH病患者重，HbH病的孕婦貧血程度更為嚴重。

【關(guān)鍵詞】血紅蛋白H病;地中海貧血;血液學(xué)特征

Analysis of hematological characteristics of hemoglobin H diseases with different genotypes in Guangdong Province Zhang Yanxia， Du Qianyi， Wang Jicheng， Du Li， Qin Danqing， Yao Cuize， Yuan Tenglong. Medical Genetics Center， Guangdong Women and Children Health Care Hospital， Guangzhou 511442， China

Corresponding author， Yuan Tenglong， E-mail： ytlgreat@ 163. com

【Abstract】ObjectiveTo analyze the hematological characteristics of hemoglobin H （HbH） diseases in Guangdong Province to provide guidance for clinical genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Hematological characteristics of 283 patients with HbH diseases in Guangdong Province were analyzed. Blood routine parameters and HbH content of various genotypes of HbH diseases in Guangdong Province were obtained by blood routine detection and hemoglobin electrophoresis， and the gene of thalassemia was detected by gap-PCR and PCR-RDB. Results Among 283 patients with HbH diseases， 202 cases （71.38%） were diagnosed with deletional HbH diseases including 132 cases of --SEA/-α3.7 and 70 cases of --SEA/-α4.2. There were 81 cases of non-deletional HbH diseases including 7 cases of --SEA/αQSα7， 46 cases of --SEA/αWSαand 28 cases of --SEA/αCSα. The average Hb level in the non-deletional HbH group （except?--SEA/αWSα） was （78.69±15.65）g/L， significantly lower than （96.69±15.72） g/L in the deletional HbH group （P < 0.001）. The average HbH in the non-deletional HbH group （except --SEA/αWSα） was （15.65±6.18）%， significantly higher than （7.00±4.18）% in the deletional HbH group （P < 0.001）. In the pregant women， the red blood cell level was （3.37±0.71）×1012/L， and the Hb level was （66.75±14.27） g/L. Conclusions Among all 283 cases of HbH disease in Guangdong Province， a majority of them are diagnosed with deletional HbH diseases， mainly -- SEA/-α3.7， followed by --SEA/-α4.2. The degree of anemia in the non-deletional HbH group is more severe than that in the deletional HbH group， especially in the pregnant women.

【Key words】HbH disease;Thalassemia;Hematological characteristics

α-地中海貧血，是地中海貧血的其中一種類型，是由α-珠蛋白基因的缺失或點突變而引發(fā)的一組溶血性貧血，是我國長江以南地區(qū)最常見的一種單基因遺傳病[1]。血紅蛋白H（HbH）病患者能存活，但該病是臨床表現(xiàn)最嚴重的一種α-地中海貧血，是由3個α-珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致α珠蛋白肽鏈合成明顯減少，過多的珠蛋白鏈形成四聚體所致的一種中間型地中海貧血[2]。根據(jù)基因類型不同HbH病可被分為缺失型與非缺失型，2種類型的HbH病患者的臨床表現(xiàn)差異很大，可表現(xiàn)為輕度至重度貧血，其中基因型為--SEA/-α3.7、

--SEA/-α4.2及--SEA/αWSα的HbH病患者貧血程度偏輕;而基因型為--SEA/αCSα和--SEA/αQSα的HbH病患者貧血程度偏重。在本研究中，筆者對廣東地區(qū)283例不同基因型的HbH病患者進行基因診斷并分析其血液學(xué)特征，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

對象與方法

一、研究對象

2015年1月至2020年1月就診于廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心、基因診斷結(jié)果為HbH病的283例成年患者被納入研究，新生兒和幼兒因生理性等因素，其血液學(xué)指標尚不太穩(wěn)定，且其正常參考值范圍跟成年人不同，故僅選取成年HbH病患者進行統(tǒng)計。283例中男96例、女188例（包括83例孕婦），年齡18 ～ 50歲，均為來源于廣東地區(qū)的漢族人（其中廣州市217例、云浮市41例、河源市11例、湛江市5例、韶關(guān)市5例、清遠市2例、肇慶市2例）。

二、研究方法

采集所有患者外周血進行血常規(guī)檢測和Hb電泳分析，提取外周血基因組DNA用于地中海貧血基因檢測，分析不同基因型的HbH病患者血液學(xué)特征。

1.血液學(xué)分析

用EDTA-K2 真空采血管采集所有患者（無需空腹）的外周靜脈血2 ml。采用Sysmex KX-21血液分析儀測定其紅細胞參數(shù)。采用全自動毛細管電泳儀（Capilar 2，Sebia，法國產(chǎn)）進行Hb分析。

2. DNA提取和地中海貧血基因檢測

采用Lab-Aid 820核酸提取儀及DNA提取試劑（廈門產(chǎn)）提取基因組DNA，根據(jù)試劑盒說明書及儀器操作規(guī)程嚴格遵守標準操作規(guī)程操作。應(yīng)用裂口PCR（gap-PCR）和PCR結(jié)合反向點雜交（PCR-RDB）方法進行常規(guī)地中海貧血基因檢測（試劑盒深圳產(chǎn)），同時利用Luminex200（Luminex Corporation，美國產(chǎn)，試劑采用達安臨床檢驗中心有限公司擴增及雜交試劑）進行基因診斷結(jié)果的相互驗證。檢測范圍包括α-地中海貧血3種常見缺失型（3.7、4.2、SEA）和3種點突變類型（CS、QS、WS）以及中國人最常見的17種β-地中海貧血的點突變。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0處理數(shù)據(jù)，計量資料用表示，兩組獨立樣本比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Bonferroni法;計數(shù)資料采用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，α= 0.05。

結(jié)果

一、缺失型與非缺失型HbH病患者性別、年齡比較

缺失型與非缺失型HbH病患者性別、年齡無差異（P均> 0.05），見表1。

二、血常規(guī)參數(shù)檢測結(jié)果

283例HbH病患者中，202例缺失型HbH病患者Hb為（96.69±15.72）g/L，紅細胞為（5.28± 0.95）×1012/L，平均紅細胞體積（MCV）為（63.21±8.68）fl，平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）為（18.48±2.05）pg;35例非缺失型HbH病患者（除--SEA/αWSα外）Hb為（78.69±15.65）g/L，紅細胞為（4.03±0.94）×1012/L，MCV為（73.96 ±8.00）fl，MCH為（19.71±1.86）pg，非缺失型HbH病患者（除--SEA/αWSα外）Hb水平比缺失型HbH病患者低（P < 0.001）;非缺失型HbH病患者（除--SEA/αWSα外）MCV、MCH均比缺失型HbH病患者高（P < 0.05），見表2。其中83例孕婦的紅細胞計數(shù)較低，為（3.37±0.71）×1012/L，Hb含量也較低，為（66.75 ±14.27）g/L。

三、Hb電泳檢測結(jié)果

非缺失型病例組（除--SEA/αWSα外）HbH含量比缺失型病例組的HbH含量高（P < 0.001）;--SEA/αCSα型HbH病HbA2含量比缺失型病例組低，--SEA/αCSα型病例組HbF含量比缺失型病例組高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05/2），見表3。孕婦HbH含量相對較高，為（11.64±3.29）%。

四、珠蛋白基因檢測結(jié)果

283例HbH病患者中，缺失型HbH病202例，占71.38%;其中--SEA/-α3.7 132例，占46.64%;--SEA/-α4.2 70例，占24.73%。非缺失型HbH病81例，占28.62%;其中--SEA/αQSα 7例，占2.47%;?--SEA/αWSα 46例，占16.25%;--SEA/αCSα 28例，占9.89%。--SEA/-α3.7與--SEA/-α4.2 2種基因型的病例組各項血液學(xué)指標的差別不明顯，均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05/10）;--SEA/αWSα和--SEA/αCSα 2種基因型的病例組與以上2種具有較明顯的差異（P < 0.05/10），見表4。

討論

根據(jù)基因突變類型HbH病主要被分為缺失型和非缺失型2種類型。缺失型HbH病是由于缺失3個α-基因（-/α-）或（-/-α）導(dǎo)致α-珠蛋白鏈合成不足所致，非缺失型HbH病是由2個α-基因缺失與一個α-基因突變相互作用所致（-/αTα或-/ααT），其臨床表現(xiàn)往往比前者更為嚴重[3]。

HbH病的基因類型與特變頻率在不同國家、不同地區(qū)、不同種族間有一定的差異。國外曾有HbH病的基因類型與特變頻率的相關(guān)報道，如Farashi等[4]報道，伊朗HbH病以缺失型為主，基因型主要為--MED/-α3.7（31.8%），其次為--20.5/α-5ntα和αTSaudiα/αTSaudiα。在國內(nèi)也有對HbH病的基因類型與特變頻率的相關(guān)報道，黃雅莉等[5]報道，廣東湛江地區(qū)HbH病基因型以缺失型為主（88%），其中基因型--SEA/-α3.7與基因型--SEA/-α4.2的構(gòu)成比分別為61.45%和26.50%。本研究中廣東地區(qū)283例HbH病患者的基因型分析顯示，其基因型主要以缺失型為主（71.38%），以--SEA/-α3.7占大多數(shù)，這與周冰焱等[6]報道的廣東省育齡人群241例HbH病基因型構(gòu)成比相似，而與龐艷敏等[7]報道的廣西地區(qū)1110例HbH病患者的基因型、血液學(xué)表型和鐵過載的臨床研究的基因構(gòu)成比有一定差異，提示不同的地區(qū)HbH病基因型構(gòu)成比不同。

另外，在本研究中，孕婦的Hb含量相對更低，臨床上出現(xiàn)中度至重度貧血。這與孕婦生理性貧血可能相關(guān)。女性懷孕期間的生理變化，如血容量的擴大，會加重貧血的嚴重程度，而且慢性母體貧血不但會使自身處于缺氧狀態(tài)，還會導(dǎo)致胎兒生長受限以及增加低體質(zhì)量兒出生、早產(chǎn)及圍產(chǎn)期死亡率的風(fēng)險[8]。本研究組雖無對未成年人HbH病進行研究，但相關(guān)報道表明，HbH病患兒仍然以缺失型為主，其臨床表現(xiàn)有比較大的異質(zhì)性;而非缺失型HbH病患兒的貧血程度比較嚴重，且初診平均年齡較缺失型早，嬰幼兒后期逐漸出現(xiàn)貧血癥狀，隨著年齡增大貧血程度加重[9]。

綜上所述，認識各基因型HbH病的血液學(xué)表現(xiàn)，有助于在產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢過程中向臨床醫(yī)師提供更好的依據(jù)，也有利于給予患者更好更全面的意見建議。今后，我們將積累和分析更多的包括其他罕見缺失型突變類型HbH病病例的數(shù)據(jù)，以求獲得更精確的分析結(jié)果。

參 考 文 獻

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[3] 陳素琴，蔣瑋瑩，陳路明，田秋紅，曾瑞萍.中國南方地區(qū)血紅蛋白 H 病的基因型與表型的相關(guān)性研究.新醫(yī)學(xué)，2015，46（5）：294-298.

[4] Farashi S， Bayat N， Vakili S， Faramarzi Garous N， Ashki M， Imanian H， Najmabadi H， Azarkeivan A. Point mutations which should not be overlooked in Hb H disease. Expert Rev Hematol，2016，9（1）：107-113.

[5] 黃雅莉，陳萍，梁成鴻，丘玉鈴，包杰，劉飏，吳兆勇，莫笑歡，黃志敏.廣東湛江地區(qū)血紅蛋白H病基因突變研究.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2018，35（6）：799-803.

[6] 周冰燚，趙文忠，李銘臻，徐珊珊，顧恒，鄭立新，葉小磊.廣東地區(qū)16 336例地中海貧血初篩陽性樣本基因型分析.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2016，13（32）：73-77.

[7] 龐艷敏，王小超，潘紅飛，尹曉林.廣西地區(qū)1110例血紅蛋白H病患者的基因型、血液學(xué)表型和鐵過載的臨床研究.右江醫(yī)學(xué)，2019，47（5）：336-342.

[8] Rabiee M， Shams JA， Zafargandie N. The adverse effects of pregnancies complicated by hemoglobin H （HBH） disease. Iran J Pathol，2015，10（4）：318-321.

[9] 劉春明. 298例血紅蛋白H病患兒基因分析.廣西醫(yī)學(xué)，2013，35（9）：1179-1180.

（收稿日期：2020-06-28）

（本文編輯：洪悅民）