孔維恒 槐 碩 邱 燁 王 翔 祝天宇 劉 鑫* 郝 欣 李盈盈

(1.中國(guó)海關(guān)科學(xué)技術(shù)研究中心, 北京 100026；2.北京林電偉業(yè)電子技術(shù)有限公司, 100097；3.北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司, 北京 100095; 4.全國(guó)海關(guān)信息中心, 北京 100026)

1 引言

人參具有較高的保健、藥用價(jià)值，具有“百草之王”的美譽(yù)，具有補(bǔ)益脾肺、生津養(yǎng)血、安神益智等多種功效[1]，在全球范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用于改善心血管循環(huán)、提高免疫力、抗腫瘤等治療[2-4]。皂苷是人參中的主要活性成分之一，目前,國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從人參屬植物中發(fā)現(xiàn)了一百多種人參皂苷類化合物[5],其含量分析測(cè)定方法有很多，其中高效液相色譜法的應(yīng)用較為普遍。

在全球主要國(guó)家藥典中收載的人參藥材質(zhì)量標(biāo)注多以Rg1、Re、Rb1的含量為指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制[6]，為了對(duì)人參制劑或藥材的質(zhì)量更精確的把控，本實(shí)驗(yàn)在參考國(guó)家藥典，應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)包含Rg1、Re、Rb1、Rd、Rc、Rf、Rb2、Rb3的8種人參皂苷實(shí)現(xiàn)了分離、建立了適用于8種人參含量測(cè)定的分析方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)中所采用的儀器與設(shè)備詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

表1 儀器與設(shè)備

2.2 實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑詳細(xì)信息見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)試劑

2.3 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：25℃；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1% 磷酸水溶液(B)；進(jìn)樣量：20μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表3。

表3 梯度洗脫程序

2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

分別準(zhǔn)確稱取Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，16.27mg、19mg、6.56mg、8.95mg、6.51mg、6.87mg、8.51mg、7.56mg于10mL容量瓶中，用色譜級(jí)甲醇定容，備用。

2.4.2標(biāo)準(zhǔn)溶液

分別準(zhǔn)確取50μL、500μL、800μL、2500μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容至5mL，制備成8種皂苷混合工作曲線的4個(gè)濃度點(diǎn)，另取5mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.4.1)為第5個(gè)濃度點(diǎn)。過(guò)0.45μm有機(jī)濾膜，裝入液相進(jìn)樣瓶中，備用。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜分離

在擬定的色譜條件下，8種人參皂苷的色譜峰可基本分離(圖1)。

圖1 8種人參皂苷的分離色譜圖

3.2 線性關(guān)系考察

按照2.4.2制備好的各濃度標(biāo)準(zhǔn)，分別進(jìn)樣20μL，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 線性考察結(jié)果

3.3 儀器精密度

取0.1mg/mL的8種人參皂苷混合標(biāo)樣，重復(fù)進(jìn)樣5次進(jìn)行HPLC測(cè)試，計(jì)算8種皂苷的峰面積RSD值均小于1%，結(jié)果見(jiàn)圖2及表5。

圖2 精密度測(cè)試

表5 精密度測(cè)試數(shù)據(jù)

3.4 空白加標(biāo)回收試驗(yàn)

本方法的準(zhǔn)確性通過(guò)空白加標(biāo)回收試驗(yàn)來(lái)考察。分別制備低、中、高3個(gè)不同濃度的8種皂苷的混合標(biāo)液，加入到甲醇溶液中，進(jìn)樣3次取平均值。同時(shí)甲醇溶液進(jìn)樣3次作為空白數(shù)據(jù)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。

表6 空白加標(biāo)回收試驗(yàn)數(shù)據(jù)

4 實(shí)驗(yàn)總結(jié)

本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)使用SY-9100液相色譜儀，在25℃柱溫條件下，采用梯度洗脫程序，實(shí)現(xiàn)了對(duì)8種人參皂苷的分離測(cè)定。為了保證實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，對(duì)儀器的精確度、8種皂苷的線性、空白加標(biāo)回收等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。0.1mg/mL的8種人參皂苷混合標(biāo)樣重復(fù)5次進(jìn)樣的測(cè)量結(jié)果，峰面積RSD<1.0%，儀器的精密度優(yōu)越?？瞻准訕?biāo)回收試驗(yàn)，分別在甲醇中加入了低、中、高個(gè)濃度進(jìn)行定量測(cè)試，回收率均在93.42%～108.58%，說(shuō)明該方法具有良好的穩(wěn)定性及準(zhǔn)確度。