朱婕曼，陳麗華

子宮內(nèi)膜癌是臨床上引起女性死亡的主要惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年升高的趨勢[1-2]。子宮內(nèi)膜癌早期癥狀不明顯，而臨床診斷時患者通常處于中晚期，預后較差[3]。目前，對子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的分子作用機制尚不十分清楚，臨床上主要通過手術或化療進行治療[4]。人第10號染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)及胸苷激酶-1(thymidine kinase 1, TK1)是與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和凋亡密切相關的生物大分子，而且可能是治療惡性腫瘤的潛在靶點[5-6]。但是目前尚未見到PTEN、TK1在不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清中的表達情況及其與臨床病理分級的相關性報道。故此，本研究回顧性分析88例子宮內(nèi)膜癌患者的臨床資料，分析不同臨床分期患者血清中PTEN、TK1表達情況，并探討患者預后與PTEN、TK1表達的相關性，以期為子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷及治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2016年6月—2018年6月診治的88例子宮內(nèi)膜癌患者作為子宮內(nèi)膜癌組，所有患者均經(jīng)病理學檢查確診。排除標準：①并發(fā)其他類型惡性腫瘤者；②伴嚴重代謝系統(tǒng)疾病者；③伴嚴重認知功能障礙者；④伴嚴重心腎功能障礙者；⑤至隨訪截點時脫落病例；⑥臨床資料不完整者。納入患者年齡48～66(57.8±8.7)歲；根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會頒布的臨床分期標準進行分期[7]，其中Ⅰ期患者25例(28.41%)，Ⅱ期患者24例(27.27%)，Ⅲ期患者16例(18.18%)，Ⅳ期患者23例(26.14%)；病理類型均為子宮內(nèi)膜樣腺癌，病理分級[8]：G1級31例(35.23%)，G2級30例(34.09%)，G3即27例(30.68%)。另選取2017年2月—2019年7月在我院行健康體檢且身體健康的女性85例作為對照組，年齡48～65(57.5±8.9)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批同意進行。

1.2觀察指標 本研究分析不同臨床分期以及不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清中PTEN及TK1表達水平。采用免疫組織化學染色法檢測子宮內(nèi)膜癌患者留存的病理組織標本PTEN及TK1陽性表達情況，并通過電話、門診復查等方式進行隨訪，隨訪時間截止至2019年6月，分析子宮內(nèi)膜癌患者預后與癌組織PTEN及TK1陽性表達的關系。

1.3治療方法 88例子宮內(nèi)膜癌患者中Ⅰ期患者25例給予子宮病灶擴大切除+盆腔、腹主動脈旁淋巴結(jié)切除術；其余患者均給予子宮病灶擴大切除+盆腔、腹主動脈旁淋巴結(jié)切除術聯(lián)合術后放化療。所有患者術后均給予我院自制中藥湯劑(黃芪、黨參、人參、靈芝等)提高機體免疫力治療。

1.4檢測方法 抽取子宮內(nèi)膜癌患者清晨空腹靜脈血5 ml，2000 r/min離心15 min后，取上清液保存于4℃保藏箱中待測，同時調(diào)取對照組體檢時留取的血清標本。檢測時采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中PTEN及TK1水平。PTEN蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自Omega公司；TK1蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自R&D公司。所有檢測操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5免疫組織化學染色及判讀方法 取子宮內(nèi)膜癌患者留存的病理標本，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，于枸櫞酸鈉中行抗原熱修復，3%過氧化氫中消除內(nèi)源過氧化物酶活性，添加山羊血清封閉后，加入PTEN、TK1一抗于4℃孵育過夜。以PBS液作為陰性對照，添加兔抗鼠IgG孵育后PBS液洗滌3次，后行DAB顯色，于光鏡下觀察。根據(jù)著色細胞數(shù)及染色程度確定PTEN、TK1的表達水平：著色細胞數(shù)<10%或未染色，記為(-)；著色細胞數(shù)為10%～20%而染色弱至中等，記為(+)；著色細胞10%～20%且染色強，或著色細胞20%～50%而染色弱至中等，記為(++)；著色細胞20%～50%而染色強，或著色細胞>50%，記為(+++)。其中(-)和(+)定義為低表達，(++)和(+++)定義為高表達。

2 結(jié)果

2.1子宮內(nèi)膜癌組和對照組血清PTEN及TK1水平比較 與對照組比較，子宮內(nèi)膜癌組血清PTEN及TK1水平明顯升高(P<0.05)。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌組和對照組血清PTEN及TK1水平比較

2.2不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較 不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者總體血清PTEN及TK1水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且隨著臨床分期的進展子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平亦逐步升高(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1表達水平比較 不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者總體血清PTEN及TK1水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；且隨著病理分級的加重子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平亦逐步升高(P<0.05)。見表3。

表2 不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較

表3 不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較

2.4子宮內(nèi)膜癌患者癌組織PTEN及TK1表達與預后的關系 子宮內(nèi)膜癌組PTEN高表達52例，低表達36例；TK1高表達55例，低表達33例。截止至2019年6月，子宮內(nèi)膜癌PTEN高表達者存活率為63.46%(33/52)明顯低于低表達者的存活率88.89%(32/36)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.124，P=0.008)；子宮內(nèi)膜癌TK1高表達者存活率為63.64%(35/55)明顯低于低表達者的存活率90.91%(30/33)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.946，P=0.005)。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，多發(fā)于絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，嚴重影響患者的生活質(zhì)量和生存狀態(tài)。子宮內(nèi)膜癌早期無明顯癥狀，患者通常是在行婦科檢查或普查時發(fā)現(xiàn)。子宮內(nèi)膜癌患者一旦出現(xiàn)癥狀，多表現(xiàn)為出血、陰道排液、疼痛和腹部包塊等。但目前關于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制尚不完全明確。

新近有研究指出，PTEN參與調(diào)控了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程，且可能與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程相關[9-10]。在分析子宮內(nèi)膜樣癌及其前驅(qū)病變PTEN的表達及意義時發(fā)現(xiàn)從單純性增生、復雜性增生、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變到子宮內(nèi)膜樣癌，PTEN的缺失率逐漸升高[11]。在對新輔助化療前后子宮內(nèi)膜癌患者PTEN的變化及預后分析時也發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者實施新輔助化療效果顯著，能夠有效降低患者血清PTEN水平，降低術后復發(fā)率，延長患者生存期，且不良反應少，其表達水平與子宮內(nèi)膜癌患者預后密切相關[12]。既往研究也從細胞水平證明了PTEN與腫瘤細胞凋亡的關系，金雀異黃素可能通過上調(diào)Egr1/PTEN信號通路的表達抑制PI3K/Akt信號通路的激活誘導SKOV3細胞凋亡，進一步影響了凋亡相關基因Bcl-2、Bax及Caspase-3的表達[13]。本研究也發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN水平明顯升高，且隨著患者臨床分期及病理分級的升高，血清PTEN水平也逐步升高；隨著癌組織PTEN陽性表達的增強患者生存率降低。提示血清PTEN水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期及病理分級密切相關，且癌組織陽性表達越強患者的預后越差。

既往研究也證實，TK1可作為臨床診斷惡性腫瘤的重要參考指標，且與患者的臨床分期及預后有密切的相關性[14-15]。葉偉等[16]研究發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌患者TK1水平較健康者升高，并與患者臨床分期呈正相關。張鴻艷[17]也證實，血清TK1表達與宮頸癌的發(fā)生密切相關，是患者預后不良的風險因素。且鄒振武等[18]研究也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測血清TK1、癌抗原19-9對鑒別診斷胰腺癌、胰腺炎具有較高的臨床價值。本研究結(jié)果也證實，與對照組比較，子宮內(nèi)膜癌組血清TK1水平明顯升高，且隨著患者臨床分期及病理分級的升高，血清TK1水平逐步升高；隨著癌組織TK1陽性表達的增強患者生存率降低。提示血清TK1水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期及病理分級密切相關，且癌組織陽性表達越強患者預后越差。

綜上所述，血清PTEN及TK1水平與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床分期及病理分級密切相關，且癌組織PTEN及TK1陽性表達越強患者預后越差。在以后的研究中將進一步探索血清PTEN及TK1水平聯(lián)合其他相關因子在子宮內(nèi)膜癌診斷中的效果，為增強臨床無創(chuàng)診斷水平、早期發(fā)現(xiàn)腫瘤并采取積極的治療措施提供可靠依據(jù)。