胡 玥，楊和強(qiáng)，劉文峰，張 勇

慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis, CRS)是一類較為常見(jiàn)的局部慢性炎癥，在國(guó)外其發(fā)病率為5%～12%[1]，在國(guó)內(nèi)其發(fā)病率為2%～8%[2]。根據(jù)是否伴發(fā)鼻息肉又可將CRS分為伴鼻息肉(CRSwNP)和不伴鼻息肉(CRSsNP)2種亞型，這2種亞型在臨床有各自不同的組織重塑特點(diǎn)及炎癥模式，CRSwNP由于臨床癥狀評(píng)分更高，且更容易復(fù)發(fā)，因而成為耳鼻咽喉外科的難治性疾病[3]。目前研究表明，CRSwNP常見(jiàn)的致病因素有免疫應(yīng)答缺陷、環(huán)境因素、微生物因素、遺傳因素等，其中免疫應(yīng)答缺陷在致病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[4]。Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞間的相互調(diào)控在影響人體免疫平衡維護(hù)中發(fā)揮著重要作用，CRSwNP表現(xiàn)為Th2細(xì)胞較強(qiáng)的疾病實(shí)體，但隨著Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的發(fā)現(xiàn)，對(duì)CRSwNP發(fā)病機(jī)制的研究有了新的進(jìn)展[5]。白介素-2(IL-2)是Th1細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，有研究發(fā)現(xiàn)IL-2及其受體缺失的小鼠體內(nèi)Treg細(xì)胞嚴(yán)重缺乏[6]?？梢?jiàn)IL-2能夠通過(guò)Treg細(xì)胞維持自身的免疫耐受，CRSwNP患者體內(nèi)可發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞水平顯著降低[7]。因此IL-2可能在CRSwNP發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但目前有關(guān)研究鮮有報(bào)道。IL-35則是一類新型抑制性細(xì)胞因子，已被證實(shí)與呼吸道炎癥發(fā)展有關(guān)[8]，但其具體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制仍不清楚。因此本研究通過(guò)檢測(cè)CRSwNP患者病變組織中IL-2、IL-35及Th1/Th2/Th17代表性細(xì)胞因子的表達(dá)水平，探討IL-2、IL-35在CRSwNP病變中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年6月—2019年6月我院收治的63例CRSwNP患者為CRSwNP組。①納入標(biāo)準(zhǔn)：符合EPOS 2007中診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；手術(shù)治療前1個(gè)月內(nèi)未接受糖皮質(zhì)激素或免疫抑制治療；血清特異性IgE測(cè)定呈陰性；接受纖維鼻咽鏡及鼻竇CT檢查。②排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝炎、結(jié)核等傳染性疾病者；哮喘病史；嚴(yán)重心、肺、肝、腎功能不全者。CRSwNP組中男37例，女26例；年齡23～42(29.2±4.3)歲；癥狀視覺(jué)模擬評(píng)分(5.5±1.7)分；纖維鼻咽鏡檢查的Lanza-Kennedy評(píng)分(6.3±2.1)分，Lund-Mackay評(píng)分(11.5±3.4)分；其中Lund-Mackay評(píng)分1～10分為輕度，Lund-Mackay評(píng)分11～24為重度。另選取30例同期單純鼻中隔偏曲患者為對(duì)照組，其中男18例，女12例；年齡20～46(28.3±4.2)歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集：CRSwNP患者于術(shù)中留取部分鼻息肉組織，取出后以錫箔紙包裹，液氮中速凍后保存至-80℃條件下待測(cè)；對(duì)照組在手術(shù)過(guò)程中取下鼻甲黏膜組織，保存方式同鼻息肉組織。

1.2.2ELISA法檢測(cè)IL-2、IL-35、γ干擾素(IFN-γ)、IL-4、IL-17水平：分別取100 mg的鼻息肉組織和下鼻甲黏膜組織，加入1 ml的PBS緩沖液后剪碎，于冰上用組織勻漿機(jī)制成組織勻漿，低溫條件下3000 r/min離心15 min后，吸取上清液，參考ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作，試劑盒購(gòu)自中國(guó)ColorfulGene公司。

2 結(jié)果

2.1IL-2、IL-35、IFN-γ、IL-4、IL-17水平比較 CRSwNP組鼻息肉組織中IL-2、IL-35、IFN-γ水平低于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，IL-4、IL-17水平高于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 2組患者組織中IL-2、IL-35、IFN-γ、IL-4、IL-17水平比較

2.2不同嚴(yán)重程度CRSwNP患者鼻息肉組織中IL-2、IL-35、IFN-γ、IL-4、IL-17水平比較 63例CRSwNP患者中輕度25例，重度38例。輕度患者鼻息肉組織中IL-2、IL-35、IFN-γ水平高于重度患者，IL-4、IL-17水平低于重度患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

2.3鼻息肉組織中IL-2、IL-35水平與IFN-γ、IL-4、IL-17的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IL-2與IFN-γ呈顯著正相關(guān)(r=0.482，P<0.01)，與IL-4、IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.457、-0.542，P均<0.01)。IL-35與IFN-γ呈顯著正相關(guān)(r=0.508，P<0.01)，與IL-4、IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.471、-0.615，P均<0.01)。

表2 不同嚴(yán)重程度CRSwNP患者鼻息肉組織中IL-2、IL-35、IFN-γ、IL-4、IL-17水平比較

3 討論

CRSwNP作為一類慢性炎癥性疾病，其組織病理學(xué)特征表現(xiàn)為嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞外基質(zhì)沉積、杯狀細(xì)胞增生、基膜增厚水腫或纖維化，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了極大的影響[10]。雖然鼻內(nèi)鏡手術(shù)能夠改善大部分患者的臨床癥狀視覺(jué)模擬評(píng)分，但部分患者術(shù)后會(huì)出現(xiàn)息肉復(fù)發(fā)情況，且復(fù)發(fā)率會(huì)隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)而增加[11]。由于鼻息肉組織是由鼻腔和鼻竇黏膜過(guò)度水腫突出而形成的炎性組織，因此大部分CRSwNP的發(fā)病機(jī)制研究集中在鼻腔解剖結(jié)構(gòu)、炎癥持續(xù)性刺激以及鼻黏膜的應(yīng)激反應(yīng)等。但隨著免疫學(xué)的快速發(fā)展，細(xì)胞因子在CRSwNP發(fā)病過(guò)程中的相關(guān)作用成為研究的熱點(diǎn)方向。目前，研究證實(shí)鼻息肉組織中的IL-33、IL-9、IL-13等均呈高表達(dá)，而IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β等呈低表達(dá)[12-13]，可見(jiàn)細(xì)胞與細(xì)胞因子之間的相互作用及平衡發(fā)揮著重要的作用。

IL-2是Th1細(xì)胞分泌合成的細(xì)胞因子，能夠刺激T細(xì)胞增殖、分化，并誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生，同時(shí)還能夠促進(jìn)多種細(xì)胞因子的分泌來(lái)維持T細(xì)胞生長(zhǎng)，并且還能通過(guò)作用Treg細(xì)胞來(lái)維持穩(wěn)態(tài)平衡[14]。目前有研究指出，CRSwNP的主要特征為Th2細(xì)胞的反應(yīng)誘導(dǎo)以及嗜酸性粒細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)浸潤(rùn)，這一過(guò)程可能與Treg細(xì)胞缺陷有關(guān)[15]。CRSwNP患者體內(nèi)Treg細(xì)胞活性減弱的標(biāo)志性指標(biāo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β表達(dá)顯著降低，可能會(huì)抑制成纖維細(xì)胞的活性，減少細(xì)胞外基質(zhì)含量，導(dǎo)致組織中白蛋白積聚及水腫的發(fā)生，繼而形成息肉[16]。同時(shí)還有研究表明，IL-6也能通過(guò)抑制Treg細(xì)胞功能及招募炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而參與CRSwNP的發(fā)病進(jìn)程[17]。本次研究結(jié)果顯示，CRSwNP患者鼻息肉組織中IL-2的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，表明Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答較弱，符合CRSwNP的Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答較強(qiáng)的特點(diǎn)。IFN-γ是Th1細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，IL-4則是Th2細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，IFN-γ和IL-4水平與Th1/Th2平衡維持關(guān)系密切，并且Th1/Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)也與新型細(xì)胞亞群Th17有關(guān)，IL-17是由Th17細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類具有較強(qiáng)促炎作用的細(xì)胞因子[18]。本次研究結(jié)果顯示，CRSwNP患者鼻息肉組織中IFN-γ水平低于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，IL-4、IL-17水平高于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，與Shen等[7]研究一致，可見(jiàn)Th2/Th17細(xì)胞的活化誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞在息肉組織中的浸潤(rùn)，并誘導(dǎo)大量炎癥相關(guān)細(xì)胞因子分泌，加速了鼻竇黏膜局部炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致局部組織損傷和黏膜重塑，這一過(guò)程與Terg細(xì)胞活性減弱、免疫抑制反應(yīng)失調(diào)關(guān)系密切。鼻息肉組織中IL-2水平與IFN-γ呈正相關(guān)，與IL-4、IL-17呈負(fù)相關(guān)的結(jié)果也證實(shí)了IL-2的降低與Th1細(xì)胞活性降低、Th2/Th17細(xì)胞的活化有關(guān)。

IL-35是一類既可由Treg細(xì)胞誘導(dǎo)合成，又能夠被活化的B細(xì)胞、部分活化的內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞分泌合成的抑制性細(xì)胞因子，主要通過(guò)介導(dǎo)Treg細(xì)胞激活Jak-STAT信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的功能[19]。在慢性炎癥反應(yīng)階段，IL-35不但能通過(guò)激活Treg細(xì)胞來(lái)抑制Th1細(xì)胞的增殖分化，抑制自身組織炎癥損傷，還能夠通過(guò)抑制Th17細(xì)胞的分化及主要細(xì)胞因子的合成，從而抑制炎癥反應(yīng)繼續(xù)發(fā)展[20]。本次研究結(jié)果顯示，CRSwNP患者鼻息肉組織中IL-35的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組下鼻甲黏膜組織，與李軍等[21]研究結(jié)果一致。IL-2水平降低表明Treg細(xì)胞活性抑制，其分泌的IL-35水平也隨之降低，而較低水平的IL-35又通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)影響Treg細(xì)胞的功能，使得CRSwNP患者體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)功能受限，無(wú)法抑制和調(diào)節(jié)亢進(jìn)Th2/Th17細(xì)胞的促炎作用，從而引起Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞比率嚴(yán)重失衡，大量炎癥相關(guān)細(xì)胞因子分泌，加速了鼻竇黏膜局部炎癥反應(yīng)，促進(jìn)了鼻息肉組織的形成。對(duì)CRSwNP患者鼻息肉組織中IFN-γ、IL-4、IL-17的表達(dá)結(jié)果及與IL-35的相關(guān)性分析也驗(yàn)證了本次研究推測(cè)的正確性，可見(jiàn)Treg細(xì)胞活性抑制，Th17細(xì)胞活化是Th1/Th2細(xì)胞失衡理論的重要補(bǔ)充，也是CRSwNP發(fā)生與形成的重要機(jī)制。

綜上所述，CRSwNP的發(fā)病過(guò)程與各種細(xì)胞、細(xì)胞因子的相互作用有關(guān)，盡管目前研究證實(shí)CRSwNP以明顯的Th2細(xì)胞免疫亢進(jìn)伴嗜酸性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn)為病理特點(diǎn)，但不同種族、地域及環(huán)境下的病理特點(diǎn)又有一定的差異，因此IL-2、IL-35的表達(dá)水平及其與Th1/Th2/Th17細(xì)胞因子水平的關(guān)系還需擴(kuò)大樣本、豐富檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)一步證實(shí)。