董惠敏，許如玲，何丹丹，范君婷，鞠建明*

董惠敏1, 2，許如玲2，何丹丹1, 2，范君婷3*，鞠建明1, 2*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028 2. 江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210028 3. 南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 211166

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Alliance高效液相色譜系統(tǒng)：配有2695溶劑管理系統(tǒng)、2996二極管陣列檢測(cè)器和Empower色譜工作站；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q型純水器（美國(guó)Millipore公司）；AT2011/10萬電子天平（瑞士Mettler公司）。

1.2 試藥

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-0.4%甲酸水溶液（B）；梯度洗脫，0～20 min，20%～40% A；20～32 min，40%～44% A；32～36 min，44%～50% A；36～44 min，50%～60% A；44～62 min，60%～70% A；62～72 min，70%～90% A；72～73 min，90%～20% A；73～83 min，20% A；體積流量1.0 mL/min，柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，進(jìn)樣量10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.2 供試品溶液制備 取印度獐牙菜粉末（過60目篩）約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲提?。üβ?00 W，溫度25 ℃）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3 QAMS法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 在“2.1”項(xiàng)的色譜條件下，供試品中8個(gè)待測(cè)成分色譜峰峰形良好，與相鄰峰的分離度大于1.5。混合對(duì)照品及供試品的色譜圖見圖1。

1-芒果苷 2-1,3,5,8-四羥基酮 3-swerpunilactone A 4-雛菊葉龍膽酮 5-1-羥基-3,7,8-三甲氧基酮 6-1-羥基-3,5-二甲氧基酮 7-1,8-二羥基-3,7-二甲氧基酮 8-1,8-二羥基-3,5-二甲氧基酮

表2 8種酮類成分的線性回歸方程

2.4 相對(duì)校正因子（fs/i）的計(jì)算

表3 7個(gè)待測(cè)成分與芒果苷的fs/i

2.5 fs/i的重復(fù)性考察

2.5.1 不同儀器和不同色譜柱考察 實(shí)驗(yàn)分別考察了Waters 2695 I和Waters 2695II 2種高效液相色譜及Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Alltima C18TM（250 mm×4.6 mm，5 μm）3種色譜柱對(duì)s/i的影響，并計(jì)算RSD，結(jié)果均小于5%，表明s/i在不同的儀器和色譜柱適用性良好。結(jié)果見表4。

2.5.2 不同體積流量對(duì)s/i的影響 采用Waters 2695色譜儀和Agilent C18色譜柱考察了體積流量為0.8、1.0、1.2 mL/min時(shí)的s/i，并計(jì)算RSD，結(jié)果均小于5%，表明體積流量的波動(dòng)對(duì)各成分s/i無顯著影響。結(jié)果見表5。

2.5.3 不同柱溫對(duì)s/i的影響 采用Waters 2695色譜儀和Agilent C18色譜柱考察了柱溫為25、30、35 ℃時(shí)的s/i，并計(jì)算RSD，結(jié)果均小于3%，表明柱溫的波動(dòng)對(duì)各成分f無顯著影響。結(jié)果見表6。

2.6 待測(cè)組分色譜峰定位

根據(jù)“2.5.1”項(xiàng)中得到的保留時(shí)間計(jì)算待測(cè)成分與芒果苷的相對(duì)保留值（r/s，r/s=Ri/Rs），對(duì)待測(cè)組分進(jìn)行定位，并計(jì)算RSD，結(jié)果各待測(cè)成分相對(duì)保留值的RSD均小于5%，表明采用相對(duì)保留值法對(duì)待測(cè)成分定位是合理的。結(jié)果見表7。

表4 不同儀器和色譜柱對(duì)fs/i的影響

表5 不同體積流量對(duì)fs/i的影響

表6 不同柱溫對(duì)fs/i的影響

表7 不同儀器和色譜柱對(duì)ri/s的影響

2.7 QAMS法與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較

3 討論

3.1 供試品溶液制備方式選擇

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

3.3 內(nèi)參物的選擇

參照QAMS法建立的技術(shù)指南[10]，內(nèi)參物應(yīng)選擇含量較高，性質(zhì)穩(wěn)定，較易獲得的物質(zhì)。芒果苷在供試品溶液中具有以上優(yōu)點(diǎn)，因此本實(shí)驗(yàn)選擇芒果苷為內(nèi)參物，建立與其他待測(cè)成分的s/i，在考察不同儀器、體積流量、柱溫等對(duì)校正因子的影響時(shí)，結(jié)果顯示RSD均小于5%，說明選擇芒果苷作為內(nèi)參物，建立印度獐牙菜的QAMS法可行。

表8 QAMS法與ESM法測(cè)定12批印度獐牙菜中8種酮的含量

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Kumar V, Van Staden J. A Review of(Gentianaceae) as a traditional medicinal plant [J]., 2015, 6: 308.

[2] 靳有才, 魏立新, 林蓉香.等. 印度獐牙菜化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)生化藥物雜志, 2010, 31(06): 431-434.

[3] Fan G, Luo W Z, Luo S H,. Metabolic discrimination of Sandknown as "Zangyinchen" in traditional Tibetan medicine by (1)H NMR-based metabolomics [J]., 2014, 98: 364-370.

[5] 陽勇, 羅維早, 劉翔, 等. 藏藥“甲蒂(印度獐牙菜)”中龍膽苦苷和獐牙菜苷等10種成分的含量測(cè)定與質(zhì)量評(píng)價(jià) [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2012, 37(20): 3141-3146.

[6] 肖遠(yuǎn)燦, 魏立新, 楊紅霞, 等. 藏藥材印度獐牙菜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2010, 45(4):21-24.

[7] 劉麗娜, 孫磊, 喬菲, 等. 雙標(biāo)線性校正結(jié)合PDA輔助色譜峰定性用于印度獐牙菜指紋圖譜分析[A] // 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥分析學(xué)術(shù)交流會(huì)會(huì)議論文集[C]. 北京: 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥分析學(xué)術(shù)交流會(huì), 2014.

[8] 徐康平, 申健, 李福雙, 等. 多波長(zhǎng)HPLC同時(shí)測(cè)定3種獐牙菜屬植物中6種活性成分[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2009, 34(11): 1384-1392.

[10] 王智民, 錢忠直, 張啟偉, 等.一測(cè)多評(píng)法建立的技術(shù)指南 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2011, 36(6): 657-658.

[11] 毛艷, 蔡曉翠, 古麗白熱木·玉素因, 等. 一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定新疆軟紫草中6種萘醌類成分 [J]. 中草藥, 2019, 50(17): 4170-4175.

[12] 班永生,于江泳, 張亞中, 等. 一測(cè)多評(píng)法測(cè)定蓄中3個(gè)黃酮類成分的含量 [J]. 藥物分析雜志, 2019, 39(6): 1093-1101.

[13] 蔡雪萍, 李振華, 華俊磊, 等. 一測(cè)多評(píng)法測(cè)定枇杷葉有效部位中6種三萜酸成分的量[J]. 中草藥, 2013, 44(21): 3057-3062.

[14] 孫玲, 王寧, 劉金權(quán), 等. 一測(cè)多評(píng)法測(cè)定知母中皂苷類成分的含量[J]. 中藥材, 2015, 38(5): 997-1000.

[15] 劉移蘭, 蔡衛(wèi)華, 竇志華, 等. 一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定五味子中12個(gè)木脂素類成分的含量 [J]. 藥物分析雜志,019, 39(7): 1207-1216.

[16] 趙文文, 吳智敏, 吳霞, 等. 一測(cè)多評(píng)法測(cè)定新疆紫草中主要萘醌類成分的含量[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2016, 41(20): 3792-3797.

[17] 楊曉泉, 夏從龍. 一測(cè)多評(píng)法測(cè)定獐牙菜屬植物中4種環(huán)烯醚萜類成分[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2003, 15: 56-59.

[18] 陳雪晴, 尤蓉蓉, 何丹丹, 等. 藏藥印度獐牙菜化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 2017, 48(24): 5112-5116.

[19] 王萍萍, 陳現(xiàn)民, 肖遠(yuǎn)燦, 等. 藏藥印度獐芽菜石油醚部位化學(xué)成分及體外活性研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2017, 42(19): 2265-2275.

[20] 劉移蘭, 蔡衛(wèi)華, 竇志華, 等. 一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定五味子中12個(gè)木脂素類成分的含量 [J]. 藥物分析雜志, 2019,39(7): 1207-1216.

Determination of eight xanthones components inwith quantitative analysis of multi-components by single marker

DONG Hui-min1, 2, XU Ru-ling2, HE Dan-dan1, 2, FAN Jun-ting3, JU Jian-ming1, 2

1. Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210028, China 2. Jiangsu Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210028, China 3. School of pharmacy, Nanjing Medical University, Nanjing 211166, China

To establish a quantitative analysis of multi-components by single marker method for the determination of eight xanthones in．The relative correction factors (/i) of seven xanthones (1,3,5,8-tetrahydroxyxanthone, swerpunilactone A, 1-hydroxy-3,5-dimethoxyxanthone, 1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone, bellidifolin, 1,8-dihydroxy-3,5- dimethoxyxanthone and 1,8-dihydroxy-3,7-dimethoxyxanthone) were determined by HPLC method with the mangiferin as the internal standard, which were used to calculate the content of each component in. At the same time, the external standard method was used to determine the content of the eight components, and the differences between the two methods were compared to verify the feasibility and accuracy of quantitative analysis of multi-components by single marker.The reproducibility of each correction factor was good, and there were no significant differences in the contents of the ingredients obtained by using the quantitative analysis of multi-components by single marker and the external standard method in the 12 batches of(RSD < 3%).The established quantitative analysis of multi-components by single marker has high accuracy and can be applied to the content determination and quality evaluation of.

(Roxb. ex Flemi) Karsten; multi-components by single marker; external standard method; relative correction factor; mangiferin; 1,3,5,8-tetrahydroxyxanthone; swerpunilactone A; 1-hydroxy-3,5-dimethoxyxanthone; 1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone; bellidifolin; 1,8-dihydroxy-3,5-dimethoxyxanthone; 1,8-dihydroxy-3,7-dimethoxyxanthone

R286.12

A

0253 - 2670(2021)01 - 0241 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.01.029

2020-06-03

江蘇省“六大人才高峰”高層次人才培養(yǎng)對(duì)象科研資助項(xiàng)目（2015-YY-011）；江蘇省藥學(xué)會(huì)奧賽康臨床藥學(xué)基金項(xiàng)目（210303）

董惠敏（1996—），女，碩士研究生，從事中藥制劑研究。Tel: (025)85639640；E-mail: 1473787637@qq.com

鞠建明（1975—），男，研究員，從事中藥新劑型新工藝及質(zhì)量控制研究。Tel: (025)85639640 E-mail: jjm405@sina.com

范君婷（1983—），女，講師，從事天然藥物活性成分及其作用機(jī)制研究。Tel: (025)86868480 E-mail: juntingfan@njmu.edu.cn

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]