蔡皓 張二豪 祿亞洲 王忠斌 張露之

摘要：目的：對藏藥濕生扁蕾不同部位中木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素的含量進行測定分析。方法：采用高效液相色譜法進行含量測定，色譜柱為Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱溫30 ℃，流速0.8 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長254 nm，流動相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min內(nèi)， A：B=40：60～63：37，線性梯度洗脫;在20～50 min內(nèi)，A：B = 63：37等度洗脫。結(jié)果：在上述條件下，3種成分分離良好，木犀草素線性范圍為0.9878-2.1732 ug，回歸方程Y=4513X+0.762（r=1），當藥醇苷線性范圍為0.1062-1.6997 ug，回歸方程：Y=4887X-1.413（r=1），當藥黃素線性范圍為0.1054-1.6872 ug，回歸方程：Y=2064X+19.37（r=0.9999），三者線性關(guān)系良好。精密度、重復性和穩(wěn)定性的 RSD均<3.0 %。含量測定發(fā)現(xiàn)葉中木犀草素含量最高，種子中含量最低;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素在花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。結(jié)論：藏藥濕生扁蕾不同部位中所含有效成分木犀草素、當藥醇苷及當藥黃素含量存在差異，本文將為濕生扁蕾的深入研究提供理論依據(jù)。

【中圖分類號】R28 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

濕生扁蕾為龍膽科扁蕾屬一年生草本植物濕生扁蕾Gentianopsis paludosa （Munro） Ma.的干燥全草，夏季花盛期采收，又稱為龍膽草、沼生扁蕾，屬于傳統(tǒng)藏藥，其性寒、味苦，具有清熱利濕、解毒之功。臨床主要用于治療肝炎、膽囊炎、腎盂腎炎、感冒發(fā)熱、目赤腫痛、小兒腹瀉等病癥。濕生扁蕾主要生長在1180～4900 m 之間的河灘、林下、山坡草地及潮濕沼澤地，在我國華北、西北及西南均有分布，尤其是青海及甘肅的南部、云南、四川、西藏等地分布廣泛[1-4]。研究發(fā)現(xiàn)，濕生扁蕾中含有酮類、萜類和黃酮類等多種化合物，是其發(fā)揮生物活性的主要物質(zhì)，其中木犀草素屬于黃酮類化合物，其對番瀉葉誘導的小鼠腹瀉模型具有較好止瀉作用，當藥醇苷為酮苷類化合物，具有抑制結(jié)核菌的作用，當藥黃素是黃酮苷類化合物，對鼠傷寒桿菌具有中度抑制作用[5]。關(guān)于濕生扁蕾不同部位中此三種有效成分含量的差異性未有文獻報道，本文采用高效液相色譜法同時測定濕生扁蕾葉、花、莖、根、種子5種不同部位中木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素的含量，旨在為藏藥濕生扁蕾藥材質(zhì)量控制、產(chǎn)品開發(fā)及其它深入研究提供理論依據(jù)。

1 實驗材料

1.1實驗儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;KQ-700DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;EX2202ZH/E型電子天平（奧豪斯儀器有限公司）;FW135型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑

木犀草素對照品（批號：810D022，純度≥98%），購自北京索萊寶科技有限公司;當藥醇苷對照品（批號：DSTDDOO8301，純度≥98%），當藥黃素對照品（批號：DST200817-084，純度≥98%），均購自成都樂美天醫(yī)藥科技有限公司。甲醇為色譜純;水為超純水;其余試劑（甲醇、磷酸等）均為分析純。濕生扁蕾采自西藏自治區(qū)林芝市色季拉山，經(jīng)羅建教授鑒定為龍膽科植物Gentianopsis paludosa （Hook. f.） Ma。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件[6-7]

色譜柱為Supfex RP-C18（4.6×250 mm， 5.0 μm），柱溫30℃，流速0.8 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長254 nm，流動相甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）：在0～20 min內(nèi)， A：B=40：60～63：37，線性梯度洗脫;在20～50 min內(nèi)，A：B = 63：37等度洗脫。在上述色譜條件下，分別精密吸取混合對照品溶液及供試品溶液進樣，得到色譜圖1。

1-當藥黃素，2-當藥醇苷，3-木犀草素

1-Swertisin， 2-Swertianolin， 3-Luteolin

2.2 混合對照品的制備

分別精密稱取對照品當藥黃素5.38 mg、當藥醇苷5.42 mg、木犀草素5.04 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得到濃度分別為當藥黃素0.211 mg/mL、當藥醇苷0.212 mg/mL、木犀草素0.198 mg/mL的混合對照品溶液，備用。

2.3供試品溶液的制備

稱取濕生扁蕾不同部位藥材細粉（過4號篩）約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHZ）45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液，按“2.1”項下色譜方法測定。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.2”項下混合對照品溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 μL依次注入高效液相色譜儀，測定各對照品的峰面積。以對照品溶液濃度的（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程，見表2。

2.5 精密度考察

精密吸取“2.2”項下同一混合對照品溶液，分別重復進樣5次，測得各成分的峰面積，計算得各對照品峰面積的RSD分別為1.45% 、1.89%、1.92%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

取“2.3”項下同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h時進樣，測定計各色譜峰峰面積計算當藥黃素、當藥醇苷和木犀草素含量，計算得各成分含量RSD 分別2.28%、1.86%、1.77%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性考察

取濕生扁蕾根藥材細粉（過四號篩），按照“2.3”項下樣品處理方法平行制備供試品溶液5份。分別測定當藥黃素、當藥醇苷和木犀草素的含量，計算得RSD分別為 2.58%、2.16%、2.23%，表明此方法重復性良好。

2.8 濕生扁蕾藥材不同部位有效成分的含量測定

將濕生扁蕾藥材不同藥用部位粉碎過篩，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定各成分的峰面積，并分別計算各成分的含量，結(jié)果見表3。由表中可以發(fā)現(xiàn)，濕生扁蕾藥材不同藥用部位中所含有效成分木犀草素、當藥醇苷及當藥黃素含量存在差異，其中葉中木犀草素的含量最高，種子中含量最低，順序依次為：葉>花>莖>根>種子;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。

3 結(jié)論與討論

濕生扁蕾為傳統(tǒng)的臨床常用藏藥，使用歷史悠久，現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)其還具有抗炎鎮(zhèn)痛，保肝利膽，抑菌，抗結(jié)腸纖維化，抗腫瘤等多方面的生物活性。木犀草素、當藥醇苷和當藥黃素是其發(fā)揮生物活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，本文對其不同部位中該3種有效成分進行了測定分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)濕生扁蕾不同藥用部位中所含3種成分含量存在差異性，主要呈現(xiàn)出以下特點，葉中木犀草素的含量最高，種子中最低，不同部位含量順序為：葉>花>莖>根>種子;當藥醇苷含量最高的是莖，其次是根，葉、花及種子中未檢測出;當藥黃素在其花中含量最高，其次是根和莖，葉及種子中未檢測出。因此，推斷濕生扁蕾發(fā)揮生物活性是其各不同部位綜合作用的結(jié)果。此外，含量測定所使用的檢測方法操作簡便，結(jié)果準確且重復性好。本研究為藏藥濕生扁蕾質(zhì)量控制及其它深入研究提供了參考依據(jù)。

參考文獻：

[1] 寇亮， 劉越敏， 柳娜， 等. 濕生扁蕾乙醇提取物中總酮含量測定的不確定度評定[J]. 中藥新藥與臨床藥理， 2021， 32（03）： 400-405.

[2] 李玥. 濕生扁蕾的利膽有效成分研究[J]. 西北藥學雜志， 2013， 28（04）： 346-349.

[3] 劉越敏， 寇亮， 柳娜， 等. 藏藥濕生扁蕾藥理作用研究進展[J]. 甘肅中醫(yī)藥大學學報， 2020， 37（04）： 84-86.

[4] 景明， 景威棟， 張尚智， 等. 藏藥濕生扁蕾研究[M]. 甘肅： 甘肅科學技術(shù)出版社， 2017： 1-2.

[5] 盧年華， 趙慧巧， 景明， 等. HPLC與HPCE結(jié)合測定復方濕生扁蕾膠囊中6種化學成分含量[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志， 2016， 23（12）： 86-90.

[6] 王煥弟， 譚成玉， 趙靜玫， 等. HPLC法測定藏藥濕生扁蕾中2種有效成分的含量[J]. 藥物分析雜志， 2007， 27（3）：421-423.

[7] 趙慧巧， 陳暉， 景明， 等. RP-HPLC法同時測定濕生扁蕾中木犀草素，當藥黃素和當藥醇苷的含量[J]. 中華中醫(yī)藥學刊， 2016， 34（3）：603-605.

基金項目：西藏自治區(qū)自然科學基金項目-2020廳校聯(lián)合基金項目-青年項目（766660038）

作者簡介：蔡皓199003，男，漢，單位，西藏農(nóng)牧學院，郵編860000，學歷，碩士。

通訊作者：王忠斌，E-mail： 251392216@qq.com，男，1983年，漢族，寧夏彭陽人，副教授，博士研究生，西藏農(nóng)牧學院，野生動物與自然保護地、區(qū)域旅游發(fā)展。