張婷，楊桂娥 ，蘇瑞萍，張冬梅，那松巴乙拉，斯琴塔娜

（1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特）

0 引言

德倫-19 丸為內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院自制制劑，處方主要由草果仁（生）、天竺黃、瞿麥、紅花、紅石膏（熱制）、梔子、扁蕾、木棉花、訶子、水柏枝、紫草茸、波棱瓜子、蓮子、紫草、木香、豆蔻、麥冬、菥冥子、纈草十九味藥組成，具有理中健脾之功效，臨床上常用于治療脾寒，脾熱諸癥。藥方中的梔子，具有瀉火除煩，清熱利濕，涼血解毒的作用[1]。梔子化學成分復雜，包括以梔子苷為主的環(huán)烯醚萜苷類、二萜類、黃酮類及有機酸酯類等[2]。研究發(fā)現(xiàn)，梔子苷可調(diào)節(jié)炎癥疾病相關(guān)免疫細胞的功能和活化，恢復促炎/抗炎細胞因子間的動態(tài)平衡，改善異常信號通路及信號通路之間的相互干擾[3,4]。梔子苷是梔子的主要指標性成分之一[5，6]。故建立合理、有效的測定方法對其質(zhì)量進行控制，具有一定的現(xiàn)實意義。本研究中采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法 測定德倫-19 丸梔子中梔子苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器

U3000 高效液 相色譜 儀（美 國Thermo 公 司）；色譜 柱:Alltima C18：250mm×4.6mm,5μm；Apollo C18：250mm×4.6mm，5μm；Sartorius BP 211D 十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；Sartorius AL 204-IC 萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；KQ-500DE 數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥

梔子苷對照品（110749-201919），純度：97.1 %，購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇為色譜純（Fisher Scientific），水為超純水，其他試劑均為分析純。德倫-19丸為內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，批號分別為20190920、20190921、20190922，規(guī)格：2g/10 丸。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（15 ∶85）為流動相；流速1ml/min，檢測波長238nm，柱溫30℃。理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，制得供試品溶液。

2.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4 專屬性考察

分別取陰性樣品供試溶液(除不加梔子外其余藥材按原方配比)、梔子苷對照品溶液、德倫-19 丸供試溶液，按上述色譜條件進行實驗，結(jié)果顯示，陰性樣品對梔子苷的測定無干擾。

2.5 線性范圍

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成約每0.03mg/ml 的溶液（實際配制濃度為0.03mg/ml），作為對照品溶液；精密吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進樣，按上述色譜條件測定，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程：Y=0.53387X+0.06085,（R2=0.9997）。結(jié)果表明，梔子苷在進樣體積為1-20μl 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[7]。

2.6 精密度

取同一份供試品（20190920），連續(xù)進樣6 次。其RSD為0.49%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復性

取同一供試品（批號20190920）6 份，按供試品制備方法制備樣品，照高效液相色譜法（《中國藥典》2015 年版四部通則0512），在238nm 波長處測定峰面積，按外標峰面積計算。測定每份樣品的含量。RSD 為1.9%，表明該方法重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性

精密吸取供試品溶液（批號20190920）10μl，按上述色譜條件，分別于制備0h、2h、4h、6h、8h、12h 時進行色譜測定，記錄峰面積。6h 內(nèi)的RSD 為1.2%，8h 內(nèi)的RSD為1.4%，12h 的RSD 為1.3%(n=6)。說明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 準確度

加樣回收率實驗：取已知梔子苷含量的樣品（批號20190920）粉末6 份，9 份,每份約0.25g,精密稱定,分別每份加入一定量的梔子苷對照品溶液，制成供試品溶液，注入10μl，記錄色譜圖，計算回收率，平均回收率為102.7%，其RSD 為1.33 %，表明該方法準確可靠。

2.10 耐用性試驗

用不同廠家、不同型號色譜柱，取樣品（20190920），精密稱定，按供試品制備方法制備樣品，在238nm 波長處測定峰面積，按外標峰面積計算，測定含量，結(jié)果見表1。

2.11 樣品測定

依據(jù)建立的梔子苷含量測定方法，對3 批次德倫-19丸中的梔子苷含量進行考察，其梔子苷含量分別為1.20mg/g、1.19mg/g、1.17mg/g。

3 討論

3.1 提取方法

本實驗考察了提取時間對梔子苷得率的影響，分別以超聲20min、30min、40min 作為條件，結(jié)果表明，在提取時間為30min 時達到最大提取效率。因此選擇超聲30min為最優(yōu)提取條件。

3.2 轉(zhuǎn)移率及含量范圍

按處方按比例,自制樣品（20190919）中梔子苷的含量為1.20mg/g,自制樣品所用梔子藥材中梔子苷的含量為29.1912mg/g,根據(jù)本品處方量折算,理論上成品每1g 含梔子苷應為1.21mg,因此轉(zhuǎn)移率為1.20（mg/g）/1.21（mg/g）×100%=99.17%,考慮不同產(chǎn)地梔子藥材和生產(chǎn)過程的粉碎時造成損失量不同，含量下浮20%，參考《中國藥典》2015 年版一部“梔子”項下有關(guān)規(guī)定,每1g含梔子苷(C17H24O10)不得少于18mg。因此含量限度=20/484×1000×1.8%×99.17%×80%=0.59（mg/g）。擬定本品每1g 含梔子以梔子苷(C17H24O10)計，不得少于0.60mg。

綜上所述，本文建立了蒙藥德倫-19 丸梔子中梔子苷的含量測定方法，該方法科學、簡便、專屬性較強，為促進蒙藥標準化，提高蒙藥發(fā)展水平具有一定的積極意義[8]。