李扶昆

（樂(lè)山職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)系，四川樂(lè)山 614000）

佛手（Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle）為蕓香科柑橘屬植物，干燥果實(shí)可入藥，具有和胃止痛、疏肝理氣、燥濕化痰之功效[1]。

1 儀器與材料

Bruker-600M核磁共振儀（美國(guó)布魯克公司）；Varian-500 核磁共振儀（美國(guó)瓦里安公司）；Agilent 6320 型液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；Hanon P850型旋光儀（濟(jì)南海能儀器股份有限公司）；LC-3000半制備高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；Thermo BDS-C18（10mm×250mm，5μm）色譜柱（美國(guó)賽默飛公司）；GF-254薄層色譜硅膠板（煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司）；正相硅膠（青島海洋化工廠）；反相硅膠（德國(guó)Merk公司）；葡聚糖凝膠 Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）；HPLC所用甲醇和乙腈（美國(guó)MREDA公司）；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用的乙醇、甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等試劑均為分析純（天津大茂試劑廠）。

佛手藥材于2019年10由四川樂(lè)山沙灣區(qū)蜀景苑佛手柑種植基地提供，并由秦運(yùn)潭副教授（四川省食品藥品學(xué)校）鑒定為佛手柑Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle，標(biāo)本現(xiàn)存放于樂(lè)山職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥物研究中心（編號(hào)：CS201910）。

2 提取分離

干燥佛手柑藥材5kg，切碎后用90 %乙醇（10L/次）超聲提取3次，每次0.5h，減壓濃縮3 次提取液，得浸膏180g。在浸膏中加入2L水混懸，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶劑后分別得到石油醚部位（25g），乙酸乙酯部位（40g），正丁醇部位（60g）。

乙酸乙酯萃取部位（40g）首先進(jìn)行硅膠柱（200～300目，800g）色譜分離，用二氯甲烷-甲醇（10∶1，5∶1，2∶1）梯度洗脫，得到6個(gè)粗流分 Fr.1～Fr.6。Fr.2經(jīng)硅膠柱色譜二次分離，用石油醚-丙酮（3∶1→1∶3）梯度洗脫，得到3個(gè)主要流分Fr.2-1～Fr.2-3。Fr.2-2經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱（二氯甲烷：甲醇，1∶1）色譜分離，得到3個(gè)主要流分Fr.2-2-1～Fr.2-2-3。Fr.2-2-2經(jīng)HPLC（乙腈-水，55 %）色譜分離，得到純化合物3（7mg）；Fr.4經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱（二氯甲烷：甲醇，1∶1）色譜分離，得到3個(gè)粗流分Fr.4-1～Fr.4-3。Fr.4-2經(jīng)二次HPLC（乙腈-水，30 %）色譜分離，得化合物2（4mg）和1（8mg）。Fr.4-1經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，用甲醇-水（10 %、30 %、60 %）梯度洗脫，得到3個(gè)主要流分Fr.4-1-1～Fr.4-1-3。Fr.4-1-3經(jīng)正相硅膠柱（200～300目）色譜分離，石油醚-二氯甲烷-甲醇（4∶4∶1）等度洗脫，得純化合物4（10mg）。Fr.5析出許多不溶性白色粉末固體，后經(jīng)二氯甲烷、甲醇洗去雜質(zhì)，最后得到純化合物5（15mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 為淺黃色針狀晶體（丙酮），熔點(diǎn)為267～268℃；UV254紫外燈下顯亮藍(lán)色暗斑；ESI-MSm/z179[M+H]+，結(jié)合13C數(shù)據(jù)推測(cè)出該化合物分子式為C9H6O4。1H NMR（600MHz，CD3OD）δH：7.78（1H，d，J=9.0Hz，H-4），6.94（1H，s，H-5），6.76（1H，s，H-8），6.18（1H，d，J=9.0Hz，H-3）；13C NMR（150MHz，CD3OD）δC：164.4（C-2），112.9（C-3），146.1（C-4），112.6（C-4a），113.1（C-5），144.6（C-6），152.1（C-7），103.7（C-8），150.6（C-8a）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道一致，故確定該化合物結(jié)構(gòu)為5，7-二羥基香豆素（esculetin）。

化合物2為無(wú)色無(wú)定形粉末固體，UV254紫外燈下顯暗斑；ESI-MSm/z153[M-H]-，結(jié)合13C數(shù)據(jù)推測(cè)出該化合物分子式為C8H10O3。1H NMR（600MHz，CD3OD）δH：6.66（1H，d，J=8.4Hz，H-5），6.63（1H，d，J=2.4Hz，H-2），6.51（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6），3.66（2H，t，J=7.2Hz，H-8），2.65（2H，t，J=7.2Hz，H-7）；13C NMR（150MHz，CD3OD）δC：131.7（C-1），117.0（C-2），146.0（C-3），144.5（C-4），116.3（C-5），121.1 （C-6），39.7（C-7），64.5（C-8）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為3，4-二羥基苯乙醇（3，4-dihydroxyphenylethanol）。

化合物3 為白色片狀晶體（甲醇），熔點(diǎn)為178～179℃；UV254紫外燈下顯暗斑；[α]20 D+10.6（c0.1，CHCl3）；ESIMSm/z419[M+H]+，結(jié)合13C數(shù)據(jù)推測(cè)出其分子式為C22H26O8。1H NMR（500MHz，CDCl3）δH：6.60（4H，s，H-2，2′，6，6′），5.46（2H，s，4，4′-OH），4.75（2H，d，J=4.0Hz，H-7，7′），4.30（2H，dd，J=9.0，7.0Hz，H-9a，9a′），3.92（12H，s，4×OCH3），3.92（2H，m，H-9b，9b′），3.10（2H，m，H-8，8′）；13C NMR（125MHz，CDCl3）δC：147.4（C-3，3′，5，5′），134.5（C-4，4′），132.3（C-1，1′），102.9（C-2，2′，6，6′），86.3（C-7，7′），72.0（C-9，9′），56.6（3，3′，5，5′-OCH3），54.5（C-8，8′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的（+）-丁香脂素[（+）-syringaresinol]數(shù)據(jù)一致。

化合物4為黃色粉末固體，UV254下顯暗斑；ESI-MSm/z323[M+Na]+，結(jié)合13C數(shù)據(jù)推測(cè)出其分子式為C16H12O6。1H NMR（600MHz，DMSO）δH：12.94（1H，s，5-OH），7.53（1H，d，J=2.4Hz，H-2’），7.54（1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6’），6.94（1H，d，J=8.4Hz，H-5’），6.88（1H，s，H-3），6.47（1H，d，J=2.4Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.4Hz，H-6），3.90（3H，s，3’-OCH3）；13C NMR（150MHz，DMSO）δC：163.3（C-2），102.9（C-3），181.4（C-4），161.2（C-5），98.9（C-6），164.7（C-7），93.9（C-8），157.2（C-9），102.8（C-10），120.1（C-1’），109.9（C-2’），150.8（C-3’），147.9（C-4’），115.6（C-5’），120.2（C-6’），55.7（3’-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，故鑒定該化合物為金圣草黃素（chrysoeriol）。

化合物5為白色無(wú)定形粉末固體；熔點(diǎn) 283～284℃；5% 硫酸乙醇顯色劑顯紫紅色，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性；與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，在二氯甲烷/甲醇、二氯甲烷/丙酮、石油醚/二氯甲烷/甲醇3種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)其Rf 值均一致，與標(biāo)準(zhǔn)品混合后測(cè)定其熔點(diǎn)不下降，故可鑒定該化合物為β-胡蘿卜苷（β-daucosterol）。

4 結(jié)束語(yǔ)

報(bào)道了從栽培佛手柑90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位中分離得到的5個(gè)化合物，其成分類(lèi)型與已報(bào)道的佛手藥材中成分類(lèi)型一致。其中化合物5，7-二羥基香豆素（esculetin）、丁香脂素（syringaresinol）、金圣草黃素（chrysoeriol）為首次從該藥材中分離得到。本研究為進(jìn)一步闡明該藥材的物質(zhì)基礎(chǔ)有一定的參考價(jià)值，并能為其生物活性及質(zhì)量控制的深入研究提供化合物。但是，對(duì)其藥理活性以及質(zhì)量控制等相關(guān)工作需要進(jìn)一步開(kāi)展研究。另外，對(duì)石油醚萃取部位和正丁醇萃取部位的分離鑒定也有待進(jìn)一步開(kāi)展。