黨娜娜，哈西巴特，姜 媛，呼爾查,3，巴音查汗★

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 830052；2.和靜縣畜牧獸醫(yī)站 841300；3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 830052）

棘球蚴又稱包蟲，是棘球絳蟲的中絳期，寄生于牛、羊、豬、人及其他動(dòng)物的肝、肺及其他器官中，屬人畜共患寄生蟲病，該病呈世界性分布。 包蟲囊腫大，生長(zhǎng)旺盛，在人類和動(dòng)物體內(nèi)的任何部位都可能寄生， 可使周圍組織受到壓迫而引起萎縮和功能障礙，甚至感染，在蚴囊破裂的情況下還會(huì)導(dǎo)致引發(fā)過敏反應(yīng)甚至家畜死亡[1-4]，在我國(guó)主要是細(xì)粒棘球絳蟲[5]，它在植被茂密的高山草甸或草原地區(qū)， 干旱少雨的牧區(qū)以及氣候寒冷的半農(nóng)牧區(qū)尤為常見；從整體分布來(lái)看，家畜的包蟲病發(fā)病率在西部較高[5，6]。 在我國(guó)，主要分布在新疆、四川、青海、西藏、甘肅、寧夏和內(nèi)蒙的牧區(qū)和半農(nóng)半牧地區(qū)，包蟲病報(bào)告病例分析中，來(lái)自以上流行省份的病例占全國(guó)總病例數(shù)的71%[7]。 其中努斯來(lái)提等[8]有對(duì)新疆14 個(gè)地州牛、羊、犬包蟲病的感染情況進(jìn)行了調(diào)查統(tǒng)計(jì)，羊包蟲病的感染率為50.24%。 巴音布魯克羊作為新疆和靜養(yǎng)殖大縣的優(yōu)勢(shì)綿羊，養(yǎng)殖量占全縣總牲畜量的80%，也是棘球蚴病高發(fā)區(qū)。 此前，當(dāng)?shù)丶夹g(shù)人員哈西巴特[9]、席耐[10]、薛新梅[11]對(duì)和靜縣牛、羊、犬棘球蚴病也做了有關(guān)調(diào)查研究，和靜縣當(dāng)?shù)匮虬x病感染情況不容樂觀，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康，給當(dāng)?shù)卦斐删薮蟮慕?jīng)濟(jì)損失。

該病的診斷方法主要有病原學(xué)診斷[12]、血清學(xué)診斷、病理組織學(xué)診斷， 其中血清學(xué)診斷目前在巴音布魯克羊包蟲病調(diào)查研究還未有過， 對(duì)和靜縣巴音布魯克羊包蟲病的流行病學(xué)調(diào)查具有重要意義[13-15]。 新疆和靜縣位于新疆中部，巴州北部，地處天山南麓，縣境地域遼闊，其中大部分為山地高原，占92.6%，小部分為綠洲平原，占7.4%。作為擁有上百萬(wàn)巴音布魯克羊的中國(guó)西部畜牧大縣，新疆和靜縣特殊的地理環(huán)境和當(dāng)?shù)夭煌酿B(yǎng)殖方式，給寄生蟲的繁殖帶來(lái)了便利， 雖然近幾年牧民驅(qū)蟲意識(shí)有所提高，但當(dāng)?shù)匕鸵舨剪斂搜蚣?xì)粒棘球蚴病的流行仍呈上升趨勢(shì)。 對(duì)此，本研究采集涵蓋和靜縣12 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共36 個(gè)行政村（牧場(chǎng)）的巴音布魯克羊血液， 采取血清學(xué)調(diào)查分析當(dāng)前和靜縣細(xì)粒棘球蚴病的感染情況和流行特點(diǎn)， 為下一步和靜縣對(duì)包蟲病的防控工作提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

羊棘球蚴（包蟲）病間接ELISA 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自重慶澳龍生物制品有限公司，包括有血清稀釋板、抗原包被板、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、酶標(biāo)二抗、底物、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、終止液、封板膜等；采血器、離心管、移液槍、酶標(biāo)儀、槍頭、恒溫箱、吸水紙。

1.1.2 被檢血清

涵蓋和靜縣12 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共36 個(gè)行政村、 牧場(chǎng)隨機(jī)抽樣采集巴音布魯克羊血清184 份，分離血清，置-20℃冰箱備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

血清：從各地采集來(lái)的血液應(yīng)呈45 度角傾斜，室溫靜置一段時(shí)間，離心5min(3000r/min)。仔細(xì)收集上清液，將清亮無(wú)溶血的血清置-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 操作步驟（間接ELISA 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)）

間接ELISA 試驗(yàn)步驟包括，待檢血清樣本的編號(hào)：將待檢血清樣品按序編號(hào)，每板設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2 孔；試驗(yàn)用試劑的配制：使用前將試劑盒內(nèi)的試劑（酶標(biāo)二抗除外）恢復(fù)至室溫。25 倍濃縮的稀釋液略微加熱至鹽完全溶解，然后用蒸餾水作25倍稀釋。 酶標(biāo)二抗在使用前用樣品稀釋液按照1∶100 倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用；待檢樣品、對(duì)照樣品的稀釋：陰、陽(yáng)性對(duì)照樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按照1∶50 倍稀釋（本試驗(yàn)147μL 樣品稀釋液中加3μL 待檢血清樣品）； 將稀釋后的血清移至抗原包被板中： 分別將稀釋好的待檢樣品和對(duì)照樣品各取100μL 移到抗原包被版中，陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2 孔，置37℃溫育30min；第一次洗板：甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1min 棄液，再在吸水紙上拍干，重復(fù)洗板3 次；加酶反應(yīng)：每孔加入稀釋好的酶標(biāo)二抗100μL，置37℃溫育30min；第二次洗板：甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1min 棄液，再在吸水紙上拍干，重復(fù)洗板3 次；顯色反應(yīng)：每孔加入等體積混合好的底物溶液A 和底物溶液B100μL， 避光顯色10min；最后終止反應(yīng)：每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)。

測(cè)定：在終止反應(yīng)10min 內(nèi)用酶標(biāo)儀于450nm 波長(zhǎng)依次讀取每孔的吸光度（OD 值）。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，即有效實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)同時(shí)滿足：標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD450nm≧0.6；標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照孔平均OD450nm≦0.3。

細(xì)粒棘球蚴 （包蟲） 病血清學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)： 樣品OD450nm≦0.3，判為陰性，樣品暫未患有細(xì)粒棘球蚴（包蟲）??；樣品0.6≧OD450nm≧0.3，判為弱陽(yáng)性，對(duì)應(yīng)樣品處于細(xì)粒棘球蚴感染初期，尚未形成包囊或包囊不明顯；樣品OD450nm≧0.6，判為陽(yáng)性，對(duì)應(yīng)樣品應(yīng)處于細(xì)粒棘球蚴感染后期，并形成較明顯的包囊。

2 結(jié)果

巴音布魯克羊包蟲病血清間接ELISA 檢測(cè)184 份血清，血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示巴音布魯克羊包蟲病感染率為20%。 統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1、2。

表1 血清陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表2 年齡陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討論

棘球蚴在生長(zhǎng)發(fā)育過程中必須要通過犬科動(dòng)物和食草動(dòng)物共同完成，例如牛、馬、羊等。 其終末宿主為犬、狐貍、狼等犬科動(dòng)物[16]；細(xì)粒棘球絳蟲的中間宿主感染率最高的是綿羊，除其本身最易感外，還與牧羊犬經(jīng)常密切接觸，在草地上吃到蟲卵的機(jī)會(huì)多，而牧羊犬又?？沙缘骄d羊的內(nèi)臟，因而形成循環(huán)感染。 在冬季和春季動(dòng)物多出現(xiàn)死亡[17，18]。 在巴音布魯克大草原及地勢(shì)險(xiǎn)要的山區(qū)（巴倫臺(tái)、克爾古提鄉(xiāng)、阿拉溝鄉(xiāng)）的自然放牧環(huán)境里，土爾扈特牧羊犬幾乎家家都有，當(dāng)?shù)匾矔r(shí)常有狐貍、狼等野生動(dòng)物出沒，這給包蟲病的流行提供了條件[9]。

在生產(chǎn)過程中，一般情況下可使用細(xì)胞免疫（Casoni 皮內(nèi)試驗(yàn)）、 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（indirect haemagglutin ationtest，IHA）、沉淀反應(yīng)、抗體定量和蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)（Western Blotting，WB）、間接免疫熒光試驗(yàn)（indirect fluorescent antibody，IFA）等多種免疫學(xué)診斷方法[19，20]進(jìn)行確診。本試驗(yàn)采用的間接ELISA 試驗(yàn)方法是Farag 在1975 年最早將ELISA 用于包蟲病的診斷， 該方法的敏感性為88.2%，特異性為88.5%[21]。 該試驗(yàn)為高靈敏度檢測(cè)技術(shù)，結(jié)果可定性也可定量表示，可檢測(cè)抗體、抗原或特異性復(fù)合物，比IHA 操作較復(fù)雜。 動(dòng)物棘球蚴病診斷技術(shù)（NY/T1466-2007） 中將IHA 和ELISA 的診斷作為我國(guó)綿羊和牛棘球蚴病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[22]。

從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，巴音布魯克羊包蟲病感染情況較普遍，海拔較低牧區(qū)感染率最高達(dá)到33%，牧區(qū)感染率（感染率21%）高于農(nóng)區(qū)（感染率11%）。 造成感染率不同的原因可能是A 犬的管理方式不同：農(nóng)區(qū)養(yǎng)殖戶的犬基本都圈養(yǎng)，很少有隨意走動(dòng)的犬出現(xiàn)；牧區(qū)養(yǎng)殖戶的犬基本都放養(yǎng)，很少有圈養(yǎng)起來(lái)的。 牧民對(duì)野生動(dòng)物保護(hù)的意識(shí)加強(qiáng)，狐貍、狼的繁殖增加，糞便分布在草原上增多，這些無(wú)形間加大細(xì)粒棘球蚴的感染風(fēng)險(xiǎn)，利于包蟲病的流行。 薛新梅,等（2020）在她對(duì)和靜縣綿羊棘球蚴的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)牧區(qū)感染率明顯高于農(nóng)區(qū)[11]，此次試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果得出了與其相似的結(jié)果。

成年羊（感染率22%）高于當(dāng)年出欄羊羔（感染率13%）。 此結(jié)果有可能是不同年齡羊與牧羊犬活動(dòng)范圍接觸時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)。 有報(bào)道顯示宿主自身抵抗力與細(xì)粒棘球蚴的感染情況可能有關(guān)[22]。

本次實(shí)驗(yàn)得出農(nóng)區(qū)與牧區(qū)包蟲病感染率不同的原因可能為：農(nóng)區(qū)羊、犬基本都屬圈養(yǎng)，羊、犬的接觸較少，阻斷傳播途徑。防控難度有大有?。恨r(nóng)區(qū)住戶集中，利于驅(qū)蟲預(yù)防宣傳；牧區(qū)巴音布魯克高山草原地勢(shì)相對(duì)平緩且羊群數(shù)量集中， 利于集中防治；但巴倫臺(tái)、阿拉溝、克爾古提山勢(shì)陡峭，其特殊的自然氣候環(huán)境更適宜包蟲病的生長(zhǎng)，住戶分散，不利于當(dāng)?shù)鼗鶎荧F醫(yī)技術(shù)人員驅(qū)蟲防治工作開展， 這也是導(dǎo)致本區(qū)域感染率最高的原因之一。 巴音布魯克地區(qū)牧區(qū)高海拔晝夜溫差大， 冬季最低氣溫可達(dá)-45℃[23]， 很多牧民選擇在入冬時(shí)將羊群轉(zhuǎn)場(chǎng)至農(nóng)區(qū)或低海拔地帶過冬，來(lái)年開春后再轉(zhuǎn)回牧場(chǎng)，這又間接減少使羊群感染的幾率，而巴倫臺(tái)等山區(qū)由于氣溫相對(duì)較高，牲畜可以抵御冬天嚴(yán)寒氣候，所以大部分不轉(zhuǎn)場(chǎng)，增加羊群感染幾率。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果的分析，筆者認(rèn)為，巴音布魯克地區(qū)的細(xì)粒棘蚴的防控要點(diǎn)主要集中在對(duì)犬的管理，要求廣大群眾做到“犬犬投藥，月月驅(qū)蟲”，并栓養(yǎng)犬，管理好犬糞便；注意病死羊的處理，要求嚴(yán)格按照無(wú)害化處理，堅(jiān)決不能把病變臟器直接喂犬。 加強(qiáng)基層獸醫(yī)人員的專業(yè)知識(shí)水平，人與犬等動(dòng)物接觸時(shí)，應(yīng)注意個(gè)人衛(wèi)生。 加大包蟲病的宣傳力度，讓廣大牧民都參與進(jìn)來(lái)，共同防控。 由于和靜縣地理環(huán)境跨度大，應(yīng)分類合理制定適合當(dāng)?shù)馗鬣l(xiāng)鎮(zhèn)區(qū)域的包蟲病防控措施。

最后， 本次調(diào)查試驗(yàn)不足之處在于因牧民放牧基本是輪牧狀態(tài)，采樣有一定難度，采樣基數(shù)相對(duì)較少。 但由于是隨機(jī)取樣，并且專門針對(duì)采集巴音布魯克羊，采樣覆蓋很均勻。 總體來(lái)說(shuō)，雖然基數(shù)相對(duì)較小，但有一定科學(xué)研究?jī)r(jià)值。 此次對(duì)巴音布魯克羊包蟲病的隨機(jī)覆蓋采樣通過血清學(xué)診斷調(diào)查為首次， 為以后巴音布魯克羊包蟲病的防控工作提供參考依據(jù)。

4 結(jié)論

本次間接ELISA 檢測(cè)檢出和靜縣地區(qū)的巴音布魯克羊棘球蚴陽(yáng)性率為20%；不同養(yǎng)殖方式下羊棘球蚴陽(yáng)性率存在差異，牧區(qū)高于農(nóng)區(qū)。 地處巴音布魯克山區(qū)的羊群感染率高于草原地區(qū)的羊群；成年羊感染率高于羔羊。