趙秦會

（四川省南充市蓬安縣農業(yè)農村局 637800）

為了解南充市蓬安縣規(guī)?；u場大腸桿菌的耐藥性，從而指導獸醫(yī)在臨床上對雞大腸桿菌的防治。 本研究對蓬安縣規(guī)模化養(yǎng)雞場分離的310 株大腸桿菌采用紙片擴散法對其進行耐藥性分析。 結果顯示310 株大腸桿菌出現(xiàn)多重耐藥，對9 類27 中抗生素出現(xiàn)不同程度耐藥，嚴重者高達90.6%的耐藥，對頭孢類、氨基糖苷類、四環(huán)素類耐藥率超過了60%；對亞胺培南、氨曲南、氟苯尼考和復方新諾明的比較敏感， 分別為：18.7%、11.6%、11.3%和18.1%。

大腸桿菌病在養(yǎng)殖行業(yè)極為常見，它可以引起多種動物的發(fā)病，雞源大腸桿菌對養(yǎng)雞業(yè)來說也是極大的挑戰(zhàn)，雞大腸桿菌往往威脅雛雞，發(fā)病率和致死率都很高，給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大風險，嚴重制約了養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。 同時，抗生素被廣泛應用于預防或控制動物的大腸桿菌感染， 但抗生素的廣泛及不合理的使用造成了日趨嚴重的耐藥現(xiàn)象，在抗生素的壓力選擇下，沙門菌對于抗生素的耐藥和交叉耐藥現(xiàn)象日益加劇使得我們對于沙門菌的防控越來越難，也間接地危害著人類的身體健康。 本實驗通過27 種抗生素的監(jiān)測，了解其耐藥情況，從而指導臨床用藥，提高獸醫(yī)在臨床上養(yǎng)雞水平。

1 材料與方法

1.1 菌株

經(jīng)過分離鑒定的310 株蓬安縣規(guī)模雞場大腸桿菌

1.2 主要試劑

胰蛋白胨、酵母粉、瓊脂粉，購自于英國OXID 公司，麥康凱瓊脂粉購置于北京奧博星生物技術有限公司。 藥敏紙片、購自杭州微生物生化試劑有限公司。

1.3 菌株復蘇

1.3.1 將-80℃保存的經(jīng)過鑒定的大腸桿菌分離株取出恢復室溫時即劃線于LB 平板，37℃培養(yǎng)18h。

1.3.2 挑取LB 平板上的單菌落接種于LB 液體培養(yǎng)基，37℃搖床培養(yǎng)至對數(shù)期。

1.4 藥物敏感性試驗

1.4.1 取200 μL 對數(shù)期菌液均勻滴加于LB 平板，用玻璃棒在平板涂抹均勻。

1.4.2 待LB 平板菌液晾干后， 在平板上均勻貼4～6 個藥敏紙片，藥敏紙片間及藥敏紙片與平板邊緣距離不小于30mm。

1.4.3 貼好藥敏紙片的LB 平板37℃培養(yǎng)18h， 游標卡尺量取抑菌圈直徑。 每個抑菌圈量取3 次，取平均值。

1.4.4 根據(jù)《動物源細菌抗菌藥物敏感性試驗紙片法與稀釋法執(zhí)行標準》[39-40]和《抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標準；第二十五版資料增刊》[39-40]判定藥敏試驗結果。

2 結果

310 株大腸桿菌出現(xiàn)多重耐藥，27 中抗生素出現(xiàn)不同程度耐藥，嚴重者高達90.6%的耐藥，對頭孢類、氨基糖苷類、四環(huán)素類耐藥率超過了60%；對亞胺培南、氨曲南、氟苯尼考和復方新諾明的比較敏感，分別為：18.7%、11.6%、11.3%和18.1%，詳細見下表。

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3 討論

為初步摸清蓬安縣雞源大腸桿菌的耐藥情況， 本研究選擇不同種類的27 種抗生素進行試驗，結果讓人堪憂，隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和抗生素的不合理使用甚至濫用， 導致目前臨床用藥對預防治療雞大腸桿菌帶來了巨大挑戰(zhàn)。

高崧等人2014 年對山東和江蘇分離到的154 株致病性大腸桿菌做了藥敏分析，12 種抗生素中，氨芐青霉素、強力霉素、磺胺異惡唑、先鋒霉素VI 的耐藥率超過80%等，劉秀梵對黑龍江分離的41 株鵝大腸桿菌進行藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)僅對氧氟沙星、復達欣和復方新諾明敏感，對氨芐青霉素、阿米卡星、慶大霉素等高度耐藥，做出來的效果和我們的基本一致，原來有效的抗革蘭氏陰性的氨基糖苷類和廣譜四環(huán)素類居然在長期的使用過程中，耐藥性讓人不敢相信，幾乎沒有效果，這給我們臨床用藥敲響的警鐘。

在今后的研究中， 我們應進一步加強南充市蓬安縣雞源大腸桿菌的藥物敏感性分析， 通過大樣本量獲取本縣雞源大腸桿菌的耐藥規(guī)律， 為沒有條件進行藥物敏感性測定的養(yǎng)殖戶及農戶供用藥指導為我們縣養(yǎng)雞行業(yè)帶來福利。