陳紅艷，戴桂華，劉 婷

（中國鐵路濟(jì)南局集團(tuán)有限公司 濟(jì)南鐵路疾病預(yù)防控制中心，山東 濟(jì)南250001）

鐵路疾病預(yù)防控制單位實驗室擔(dān)負(fù)著鐵路系統(tǒng)疾病預(yù)防控制的重要使命，為鐵路食源性致病菌疾病等衛(wèi)生應(yīng)急事件處理提供技術(shù)支撐。中國國家鐵路集團(tuán)有限公司每兩年對所屬疾病預(yù)防控制單位進(jìn)行盲樣考核，通過實驗室室間質(zhì)控來提高檢測人員的檢測能力[1]。在此，對某年度考核情況進(jìn)行總結(jié)分析。

1 材料與方法

安瓿瓶凍干粉1支(編號43)。瓶裝半成品培養(yǎng)基及成品顯色培養(yǎng)基均購于廣東某公司；氧化酶及API生化鑒定試劑盒購于法國某公司；診斷血清由寧波某公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)，所有培養(yǎng)基經(jīng)過質(zhì)量控制[2]合格使用。

采用的主要儀器有生化培養(yǎng)箱、顯微鏡。按照食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)及其他微生物檢驗規(guī)程進(jìn)行檢測。

2 檢測過程及結(jié)果

2.1 樣品處理

將凍干粉安瓿瓶外部用酒精棉球擦拭消毒，待表面晾干后打開瓶蓋，用1.5 ml無菌營養(yǎng)肉湯溶解(按樣品說明要求不做增菌直接分離)。

2.2 分離培養(yǎng)

用無菌取菌環(huán)取上述樣品勻液分別劃線接種血平板、沙門氏菌顯色平板、志賀氏菌顯色平板、XLD瓊脂平板、SS瓊脂平板、O157顯色平板、EMB平板、麥康凱平板、弧菌顯色平板、TCBS瓊脂平板、李斯特菌顯色平板、金黃色葡萄球菌顯色平板、Baird-Parker平板、蠟樣芽孢桿菌顯色平板、阪岐腸桿菌顯色平板、TSC瓊脂平板、CIN-1平板、改良Y平板。將CIN-1平板、改良Y平板置26℃培養(yǎng)箱；將TSC瓊脂平板放厭氧罐中置37℃培養(yǎng)箱，將蠟樣芽孢桿菌顯色平板置30℃培養(yǎng)箱；將剩余平板置37℃培養(yǎng)箱，均培養(yǎng)24 h。

2.3 檢測結(jié)果

2.3.1 分離培養(yǎng)及生長情況

觀察各平板菌落生長情況，菌落形態(tài)描述如表1所示。

表1 盲樣菌分離生長情況及菌落特征

2.3.2 初步生化及染色鏡檢情況

從EMB平板、TCBS平板上挑取可疑菌落分別接種三糖鐵瓊脂斜面(TSI)、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板、血平板和營養(yǎng)瓊脂平板，置36℃培養(yǎng)24 h。分別挑取營養(yǎng)瓊脂平板上的單個菌落作涂片、染色，觀察初步生化試驗，結(jié)果如表2所示。

2.3.3 氧化酶試驗

取潔凈的濾紙塊置于平皿內(nèi)，用接種環(huán)分別挑取A、B、C、D純培養(yǎng)菌涂于濾紙上，加1滴氧化酶試劑，A、B、D氧化酶試驗結(jié)果均為陰性，C氧化酶試驗結(jié)果陽性。

2.3.4 生化鑒定

分別挑取A、B、C、D的純培養(yǎng)菌落，根據(jù)API20E操作要求將菌懸液接種試劑條小管內(nèi)，37℃培養(yǎng)24 h。結(jié)果如表3所示。

表3 API20E生化鑒定結(jié)果

根據(jù)API板子生化結(jié)果編碼輸入API軟件系統(tǒng)得出A為大腸埃希氏菌，B為產(chǎn)氣腸桿菌，C為創(chuàng)傷弧菌，D為產(chǎn)氣腸桿菌。實驗過程中產(chǎn)生的所有醫(yī)療廢物均經(jīng)高壓滅菌后，按照《醫(yī)療廢棄物管理條例》要求處理。

2.3.5 結(jié)果報告

43號質(zhì)控樣品為腸桿菌科埃希氏菌屬大腸埃希氏菌、弧菌科弧菌屬創(chuàng)傷弧菌和腸桿菌科腸桿菌屬產(chǎn)氣腸桿菌的混合菌。

3 討論及分析

3.1 問題及原因分析

（1）發(fā)生漏檢情況。以前盲樣考核均為分裝的多支單株菌，本次考核為單支裝混合菌。分離培養(yǎng)前，只采用腦心浸液肉湯(BHI)復(fù)蘇菌株，而嗜鹽性弧菌在無氯化鈉的環(huán)境下不生長或微弱生長[3]；又因混合菌種中強(qiáng)勢菌生長優(yōu)于弱勢菌，可能導(dǎo)致弱勢菌無法生長或生長少而被忽略。本次考核中創(chuàng)傷弧菌少量生長，通過菌落形態(tài)辨認(rèn)，多次生化鑒定后才未被漏檢。由此可見，在實驗室進(jìn)行盲樣檢測時，應(yīng)盡可能采用多種檢測方法或輔助設(shè)備以防漏檢[4]。此外，近年來實驗室人員更替，新檢驗人員經(jīng)驗不足，觀察培養(yǎng)菌落不仔細(xì)也可能發(fā)生漏檢情況。

表2 三糖鐵瓊脂斜面及染色鏡檢結(jié)果

（2）原始記錄及報告書寫的規(guī)范化有待提高。本次考核樣品檢測結(jié)果為3株混合菌：產(chǎn)氣腸桿菌、大腸埃希氏菌和創(chuàng)傷弧菌，符合考核內(nèi)容，但考核結(jié)果要求報告食源性致病菌。以往的考核菌株均為食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中的食源性致病菌，直接報告即可。本次考核中，對于大腸埃希氏菌的檢測，根據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》(GB 4789.6—2016)[5]的要求，應(yīng)進(jìn)行PCR確認(rèn)實驗，因?qū)嶒炇椅磁鋫銹CR儀器，無法按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步分型，因而無法將其判為致病菌。檢出的創(chuàng)傷弧菌雖然有報道稱是人類和水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的重要病原菌[6]，但創(chuàng)傷弧菌沒有國家標(biāo)準(zhǔn)，并且不在《食源性疾病監(jiān)測報告工作規(guī)范(試行)》[7]名錄中，因此結(jié)果報告應(yīng)為未檢出食源性致病菌。針對上述2種菌的報告，在原始記錄中并沒寫明原因及判斷依據(jù)，提醒檢驗人員在日常工作中應(yīng)注意根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，規(guī)范報告程序。

（3）針對商品化試劑，尤其更換廠家時應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序。

3.2 建議

（1）加強(qiáng)人員培訓(xùn)，提升檢測能力。近些年，隨著人員新老交替及檢驗人員調(diào)崗轉(zhuǎn)崗等，實驗室整體檢測能力有所下降。針對這種情況，除了以老帶新、日常練兵之外，建議定期舉辦專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，培訓(xùn)技術(shù)的同時促進(jìn)疾病預(yù)防控制部門檢測人員之間的交流，對考核中發(fā)現(xiàn)的問題及時總結(jié)經(jīng)驗、分析原因，從而提升檢測能力。

（2）加強(qiáng)質(zhì)量控制是提升檢測能力的重要手段。建議以儀器設(shè)備的檢定校準(zhǔn)、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制、試劑是否在有效期等為關(guān)鍵點，選擇性能穩(wěn)定的儀器、優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基及對新購買的培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制等，在日常工作中真正做到遵循質(zhì)量體系要求，以保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

（3）增加考核頻次。鐵路疾病預(yù)防控制部門參加地方盲樣考核較少，鐵路系統(tǒng)2年1次考核頻次不足，建議增加考核頻次，通過實驗室間比對和盲樣考核，及時發(fā)現(xiàn)問題并總結(jié)經(jīng)驗，進(jìn)一步提高疾病預(yù)防部門實驗室檢測能力。

4 結(jié)束語

通過定期的盲樣考核可以促進(jìn)實驗室及時發(fā)現(xiàn)檢驗過程、結(jié)果報告中存在的細(xì)節(jié)問題，以便在工作中進(jìn)一步完善，可以提高實驗室人員在檢測過程中對儀器設(shè)備的檢定/校準(zhǔn)、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制、試劑是否在有效期等關(guān)鍵點的認(rèn)知，今后在日常工作中應(yīng)加強(qiáng)人員、儀器設(shè)備、質(zhì)量控制等，以保證檢測結(jié)果的可靠性，提升實驗室檢測能力。