羅燕萍，王成，蔡珠妹，莫紅梅，張秀明

（深圳市羅湖醫(yī)院集團羅湖區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，廣東 深圳）

0 引言

尿沉渣有形成分檢測對泌尿系統(tǒng)疾病、腎臟疾病、感染性疾病及循環(huán)系統(tǒng)疾病的臨床診斷與鑒別診斷有重要價值[1-2]。Sysmex UF-10001 全自動尿有形成分分析儀基于流式細胞計數(shù)原理分析尿樣中的有形成分白細胞(WBC)、紅細胞（RBC)、上皮細胞（EC)、管型（CAST)、細菌（BACT)，并可定量顯示；《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》要求，尿液有形成分分析儀在常規(guī)使用前，應由實驗室對未加修改而使用的已確認的檢驗程序進行獨立驗證。本實驗室按照《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在體液學檢驗領(lǐng)域的應用說明》對尿液有形成分分析儀性能進行評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Sysmex UF-1000i 全自動尿液有形成分分析儀（儀器編號：LJ-A-04)及相關(guān)配套試劑、校準品、UF CHECK 質(zhì)控液。

1.2 標本來源

實驗標本來源于深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院住院和門診及健康體檢者的尿液標本，2h 內(nèi)完成實驗。

2 實驗方法

2.1 批內(nèi)精密度

2.1.1 實驗方案

按照CLSI EP5-A2 指南，收集高、中、低三個濃度水平的新鮮尿液分別用自動進樣模式連續(xù)測定11 次，剔除第1 次結(jié)果，取后10 次結(jié)果計算均值（χ2）、標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

2.1.2 判斷標準

所有參數(shù)批內(nèi)精密度的變異系數(shù)必須符合廠商聲明要求，RBC ≤10.0%,WBC ≤10.0%,EC ≤30.0%,CAST≤40.0%,B ACT ≤20.0%。

2.2 批間精密度

2.2.1 實驗方案

使用室內(nèi)質(zhì)控在控結(jié)果的CV%作為評價指標，至少使用兩個水平（包含正常和異常水平）的質(zhì)控品，在檢測當天至少進行一次室內(nèi)質(zhì)控，剔除失控數(shù)據(jù)（失控結(jié)果已得到糾正）后按批號或者月份計算在控數(shù)據(jù)的CV%（至少20 次數(shù)據(jù)）。

2.2.2 判定標準

應符合Sysmex UF-1000i 說明書要求批間精密度，RBC ≤10.0%,WBC ≤10.0%,EC ≤30.0%,CAST ≤40.0%,BA CT ≤20.0%。

2.3 攜帶污染率

2.3.1 實驗方案

按照CLSI EP10-A3 指南，選擇RBC、WBC、BACT 濃度分別在（1000-5000）/μl、（1000-5000）/μl 和（5000-10000）/μl 的高值尿液樣本混合均勻后連續(xù)測定3 次，測定值分別為H1、H2、H3；再用低值樣本(無菌生理鹽水)連續(xù)測定3 次，測定值分別為L1、L2、L3。按下列公式計算攜帶污染率[攜帶污染率%=（L1-L3）/（H3-L3）×100%]。

2.3.2 判斷標準

應達到Sysmex UF-1000i 儀器說明書要求的攜帶污染率，RBC 和WBC 攜帶污染率≤0.10%，BACT 攜帶污染率≤0.05%。

2.4 線性范圍

2.4.1 實驗方案

取富含紅細胞、白細胞、細菌和上皮細胞的尿液樣本（RBC：10000 個/μl、WBC：2000 個/μl、BACT：10000 個/μl）分別按1:2，1:4，1:16，1:64，1:256 的比例用鞘液進行稀釋每個稀釋度測定3 次，取均值為檢測值，將檢測值與理論值作比較，進行線性回歸相關(guān)分析，計算公式y(tǒng)=ax+b，驗證可報告范圍。

2.4.2 判斷標準

a 值（斜率）在1±0.05 范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r ≥0.975。

2.5 準確度驗證

2.5.1 實驗方案

使用Sysmex UF-1000i 全自動尿有形成分分析儀UF CHECK 高值質(zhì)控液按照說明書要求混勻后連續(xù)進行5 次測定，計算平均值（χ2），與靶值相比較，計算其偏差值。

2.5.2 判斷標準

各參數(shù)偏差值要求在質(zhì)控說明書靶值范圍內(nèi)，見表3。

表3 UF CHECK 質(zhì)控液靶值

2.6 生物參考區(qū)間

2.6.1 實驗方案

Sysmex UF-1000i 國內(nèi)目前沒有參考區(qū)間，本室對Sysmex 公司提供的日本的參考區(qū)間依據(jù)WS/T 402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》中相關(guān)要求進行驗證；選擇符合生物參考區(qū)間本室納入標準的健康體檢者尿液標本40 份，男女各20 例，年齡20-60 歲，連續(xù)上機進行測定，對結(jié)果進行統(tǒng)計。參考區(qū)間范圍見表4。

表4 UF-1000i 報告參數(shù)的參考區(qū)間

2.6.2 判定標準

符合率R 值計算：R=落在參考區(qū)間例數(shù)/實驗例數(shù)，要求R ≥90%為驗證通過。

2.7 實驗室內(nèi)儀器間比對試驗

2.7.1 實驗方案

選擇10 份新鮮尿液樣本，包括正常與異常樣本，與參加SNCS（Sysmex nework communication system）全球室內(nèi)質(zhì)控比對且成績良好的UF-1000i 全自動尿液有形成分分析儀（儀器編號為MJ-A-10）進行儀器間比對實驗，每個樣本測定3次取其均值，計算兩臺儀器之間的偏差百分比。

2.7.2 判定標準

符合Sysmex UF-1000i 比對偏差要求的結(jié)果應≥80%，RBC ≤10.0%,WBC ≤10.0%,EC ≤30.0%,CAST ≤40.0%,BA CT ≤20.0%。

3 實驗結(jié)果

3.1 批內(nèi)精密度

3.1.1 批內(nèi)精密度實驗結(jié)果

見表6。

表6 批內(nèi)精密度實驗結(jié)果

3.1.2 結(jié)論

各檢測項目的CV%均小于廠商聲明要求，驗證通過。

3.2 批間精密度

3.2.1 批間精密度實驗結(jié)果

見表7、表8。

3.2.2 結(jié)論

各檢測項目低值和高值的批間精密度均符合Sysmex UF-1000i 說明書要求，驗證通過。

3.3 攜帶污染率

3.3.1 攜帶污染率實驗結(jié)果

見表9。

3.3.2 結(jié)論

RBC、WBC、BACT 攜帶污染率均小于Sysmex UF-1000i儀器說明書要求標準，驗證通過。

表7 高值批間精密度實驗結(jié)果

表8 低值批間精密度實驗結(jié)果

表9 RBC、BACT 攜帶污染率數(shù)據(jù)統(tǒng)計

表10 線性范圍實驗結(jié)果

表11 準確度驗證實驗數(shù)據(jù)

3.4 線性范圍

3.4.1 線性范圍實驗結(jié)果

見表10。

3.4.2 結(jié)論

RBC、WBC、BACT、EC 和CAST 的a 值（斜率）均在1±0.05范圍內(nèi)，R2均≥0.975，驗證通過。

3.5 準確度驗證

3.5.1 準確度驗證實驗結(jié)果

見表11。

3.5.2 結(jié)論

各參數(shù)偏差值要求均在質(zhì)控說明書靶值偏差范圍內(nèi)，準確度驗證通過。

3.6 生物參考區(qū)間驗證

3.6.1 生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

見表12、表13。

3.6.2 結(jié)論

男性、女性各項目參考區(qū)間符合率R 值計算均≥90%，驗證通過。

3.7 實驗室內(nèi)儀器間比對

3.7.1 實驗室內(nèi)儀器間比對結(jié)果

見表13。

3.7.2 結(jié)論

各項目比對偏差均符合要求，儀器間比對驗證通過。

表12 男性生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

表13 女性生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

表13 儀器間比對偏差（%）結(jié)果

4 討論

隨著科技的不斷進步，人們健康意識日趨增強，尿液檢測量大幅提升，尿有形成分人工顯微鏡檢查凸顯不足，自動化尿有形成分分析儀應運而生。目前，國內(nèi)、外已較普遍使用能對尿有形成分進行自動化分析的儀器，迄今為止，這些設(shè)備主要原理為流式細胞術(shù)和顯微鏡數(shù)據(jù)成像技術(shù)，均可直接檢測不離心新鮮尿液標本，快速定量計算尿中各種有形成分，其結(jié)果重復性與人工鏡檢結(jié)果比較有顯著提高，同時能與實驗室信息系統(tǒng)接口，便于檢索和結(jié)果報告；大大提升了尿液檢測效率。Sysmex UF-1000i 全自動尿液有形成分分析儀的核心技術(shù)是以半導體激光作為激發(fā)光源，用核酸熒光染料對尿中各有形成分進行染色，以流式細胞術(shù)作為有形成分計數(shù)和分類手段，并以強大計算機軟件系統(tǒng)作為有形成分分析平臺，創(chuàng)立尿有形成分分析自動化的新方法[3]。

精密度是指在一定的測試條件下進行多次測定時，所得測定結(jié)果之間的符合程度，表示測量結(jié)果中隨機誤差的大小，是儀器性能評價的重要指標[4]。本實驗結(jié)果的批內(nèi)精密度和批間精密度均符合廠家聲明要求，說明儀器的重復性好，這是進行其他性能評價的前提。攜帶污染率是評價儀器測定兩個樣本間干擾的程度[5]，本實驗的RBC、WBC 和BACT 的攜帶污染率結(jié)果為0.01%、0.02%、0.01%，由于儀器說明書對EC和CAST 攜帶污染率未作明確要求，但結(jié)果顯示其攜帶污染率結(jié)果均為0，說明前一高值樣本并未對后一低值樣本的檢測結(jié)果造成影響。本研究對RBC、WBC、EC、CAST、BACT 的線性范圍進行評價，結(jié)果顯示a 值（斜率）均在1±0.05 范圍內(nèi)，r2均≥0.975，表明其有良好的線性范圍。因高濃度樣本較難收集，WBC、EC、BACT 的上限標本比廠家聲明要求低，故證實的線性范圍比儀器廠商聲稱的低。對于超過線性的標本，可按要求用鞘液稀釋后進行測定，將測定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)得出最終測定值。但張崇唯等[6]研究表明，在臨床診治過程中稀釋后的高值標本其檢測意義不大，因此無需進行稀釋，可直接報告。由于衛(wèi)生部臨檢中心至今仍沒有有尿有形成分室間質(zhì)評質(zhì)控品，目前對于準確度的評價仍未有統(tǒng)一標準[7]，本實驗用UF CHECK 高值質(zhì)控液按照說明書要求混勻后連續(xù)進行5 次測定，均值與靶值相比較，計算其偏差值；結(jié)果顯示各參數(shù)偏差值要求均在質(zhì)控說明書靶值偏差范圍內(nèi)，說明其準確度高[8]。另外，還對儀器廠家提供的生物參考區(qū)間進行驗證，結(jié)果表明其生物參考區(qū)間適用于本實驗室。同一型號不同儀器間檢測結(jié)果會存在一定的差異，其可比性對檢驗質(zhì)量和臨床診斷治療至關(guān)重要,《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和CNAS-CL02-A002《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在體液學檢驗領(lǐng)域的應用說明》[9-12]對檢驗結(jié)果的可比性有明確的要求，本室對兩臺UF-1000i 檢測結(jié)果進行比對，結(jié)果顯示符合率均≥80%，表明檢測結(jié)果一致性好，可比性強，其結(jié)果可互認。

綜上所述，Sysmex UF-1000i 全自動尿液有形成分分析儀的主要定量參數(shù)白細胞(WBC)、紅細胞（RBC)、上皮細胞（EC)、管型（CAST)、細菌（BACT)的批內(nèi)精密度、批間精密度、攜帶污染率、線性范圍、準確度、生物參考區(qū)間、實驗室內(nèi)儀器間比對等指標均符合廠商聲明要求，可應用于臨床。