陳學兵 歐世梅 劉建英 劉舒舒 王秀

丙型肝炎病毒(HCV)感染是慢性肝病的重要病因之一，全球感染人數(shù)超過7 000萬。HCV基因具有較強的變異性，根據(jù)變異位點的不同將HCV分為1～8個基因型?；蛐陀休^明顯的地域分布特點，大部分地區(qū)以1b型為主[1]。德陽地區(qū)位于四川省的中部，目前對于該地區(qū)的丙型肝炎病毒基因型分布情況及特點未見報道，本研究通過對HCV基因型進行分析，了解德陽地區(qū)HCV基因型分布情況，為制定相應(yīng)的防治策略提供依據(jù)。

資料與方法

一、研究對象

2013年1月到2019年7月在德陽市人民醫(yī)院門診及住院的慢性丙型肝炎且滿足HCV-RNA≥1 104 IU/mL的患者821例，其中男性390例(47.50%)，女性431例(52.50%)。年齡18～91歲，中位年齡51歲，平均年齡(51.56±11.78)歲。

二、診斷標準

診斷依據(jù)符合2015年《丙型肝炎防治指南》診斷標準：HCV感染超過6個月，或有6個月以前的流行病學史；抗-HCV及HCV RNA陽性，肝臟組織病理學檢查符合慢性肝炎；或根據(jù)癥狀、體征、實驗室及影像學檢查結(jié)果綜合分析，亦可診斷[2]。

三、研究方法

(一)標本采集 采集患者空腹靜脈血3 mL，分離血清標本，放置于滅菌處理后的EP管中，-20 ℃冰箱凍存，1周之內(nèi)完成檢測，同時檢測HCV RNA及丙型肝炎病毒基因型。

(二)檢測方法 血清HCV RNA采用RT-PCR熒光探針擴增技術(shù)進行檢測，試劑盒購自凱杰生物(深圳)有限公司，定量檢測范圍為1 103～5 107 IU/mL。HCV基因分型采用RT-PCR熒光探針擴增技術(shù)進行檢測，試劑盒購自廈門泰普生物科學(中國)有限公司，檢測包括5種基因型及其亞型，分別為1b、2a、3a、3b、6a，檢測要求患者血清HCV RNA定量≥1 104 IU/mL。兩項檢測均采用羅氏LightCycler480 II實時熒光定量PCR儀，整個檢測過程均嚴格按照說明書進行操作。

四、統(tǒng)計學分析

結(jié) 果

一、德陽地區(qū)丙型肝炎病毒基因型分布情況

821例患者中，共檢測出7種基因型，分別為1b、2a、3a、3b、6a、1b/3b和2a/3b，其中1b型最多，占到全部基因型的92.08%，兩種混合型分別各為1例。本研究中還有14例未能獲得基因分型(其HCV-RNA載量在1.581 04拷貝數(shù)/mL～>5 107拷貝數(shù)/mL)。在男性和女性患者中，基因1b型占比分別為91.28%和92.81%，兩組在各基因型之間的構(gòu)成比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表1。

二、年齡>40歲和≤40歲患者丙型肝炎病毒基因型的分布情況

年齡≤40歲的患者中，基因1b型的占比明顯小于年齡>40歲的患者(65.52% vs 95.23%)，而基因3a、3b和6a型的比例明顯高于年齡>40歲的患者，分別為3.45% vs 0.54%、13.79% vs 0.82%和12.64% vs 0.27%，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。年齡≤40歲的患者中沒有2a基因型。兩組患者中，男女構(gòu)成沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)，見表2。

三、不同年份丙型肝炎病毒基因型的分布情況

2013年至2018年間，丙型肝炎病毒基因1b型基本維持在90%左右，而到了2019年，基因1b型較以往有明顯的升高，達到了97.83%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其他各個基因型由于數(shù)量少，占比低，未進一步進行分析，見表3。

討 論

HCV有8個基因型和數(shù)十種亞型，基因1型病毒株流行最廣，其次為3型、2型、4型及其他。我國的丙型肝炎病毒基因型分布有一定的區(qū)域性差異，就最常見的基因1b型來說，西南、西北、東北、華東、華南、華北和華中地區(qū)分別為33%、58%、44%、64%、50%、71%和56%，華北地區(qū)最高，而西南地區(qū)最低，且西南地區(qū)的基因型呈多樣化分布趨勢，2a型、3a型、3b型和6a型分別為10%、13%、23%和13%[3]。Chen等[1]研究顯示，西南地區(qū)雖以1b型居多，但云南和重慶兩地卻以基因3型為主；而貴州和四川HCV基因1b型分別為44.38%和65.49%，分布也有明顯差異。肖桂榮等[4]對四川大學華西醫(yī)院1 998例丙型病毒性肝炎患者進行的研究顯示，基因1b型為最主要的基因型，占全部基因型的68.47%，其次為3a型和3b型，分別為14.56%和7.71%。本研究中，HCV 基因1b型為92.08%，遠遠高于國內(nèi)現(xiàn)有報道的基因1b型的比例，而3a型和3b型分別僅為0.85%和2.19%，遠遠低于全國平均4.8%和5.9%的比例[3]。男女性之間各基因型的感染率無確切的差異性。

表1 丙性肝炎病毒基因型分布及男女性患者基因型分布情況

表2 年齡≤40歲和>40歲患者丙型肝炎病毒基因型分布情況

表3 不同年份丙型肝炎病毒基因型的分布情況(n，%)

HCV基因型也是影響抗病毒療效的主要因素[5-6]。在直接抗病毒藥物上市以前，干擾素聯(lián)合利巴韋林作為慢性丙型肝炎治療的標準方案，不同的基因型其療效亦有差異[7-10]。直接抗病毒藥物上市以后，因其療效好,安全性佳，逐漸成為治療HCV感染的一線藥物，但HCV基因型仍是影響療效的因素之一。目前上市的藥物中，除了泛基因型的藥物以外，其他絕大多數(shù)藥物都能覆蓋基因1b型，而對于基因2型、3型和6型的療效相對較差[11]。盡管泛基因型的藥物在逐漸普及，但對于不同的基因型，8～12周的治療療程也得到了更多的研究證實[12]。HCV基因型仍然是可靠且重要的臨床治療參考指標，對制定患者的療程、預(yù)測療效及判斷預(yù)后均具有重要的臨床意義。本研究顯示，基因1b型是四川德陽地區(qū)最主要的類型，這對于本地區(qū)制定抗病毒防治方案及醫(yī)保管理具有重要的參考價值。

HCV不同的基因型及其亞型，其主要的傳播途徑亦有差異。HCV 1 型主要經(jīng)輸血傳播，而 3型和6型主要經(jīng)靜脈注射毒品(靜脈藥癮)傳播[13]。本研究顯示，在≤40歲人群中，基因3型和6型的比例明顯高于年齡>40歲的人群。上述研究結(jié)果提示可能經(jīng)靜脈注射毒品的人群在年輕人中更多一些，在疾病防控的方面值得重視。

2011年以前，HCV基因型從主要3種亞型(1b、2a及兩者混合型)向多型(3a、3b、6a)發(fā)展[3]。聶濱等研究發(fā)現(xiàn)，HCV亞型仍以1b為主，6a亞型已成為第二大亞型，3b和3a亞型的構(gòu)成比呈增加趨勢，其他亞型也有明顯增加趨勢[14]。而本研究中，隨著時間的推移，基因1b型在2013到2018年間無明顯的變化，而到了2019年，1b型明顯增加，其他基因型較前幾年有所降低，與上述研究有一定的差異。本研究提示，本地區(qū)通過積極的疾病防控知識的宣傳及規(guī)范的管理，可能經(jīng)靜脈注射毒品的人群有逐漸減少的趨勢。

本地區(qū)HCV基因型以1b型占絕對優(yōu)勢，明顯高于目前國內(nèi)現(xiàn)有報道的文獻的水平，而其他基因型明顯低于國內(nèi)現(xiàn)有報道水平，這為制定本地區(qū)HCV疾病的防控策略及醫(yī)保政策提供了參考。