易愛(ài)玲，杜光，易嫚，張璞， 陳煒

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，全球人群中存在膽道系統(tǒng)結(jié)石者有5%～15%，其中1%～3%的患者每年因其而引起急性膽囊等膽道系統(tǒng)感染[1-2]。復(fù)方金沙利膽顆粒是由武漢市黃陂區(qū)人民醫(yī)院與華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院合作，以產(chǎn)學(xué)研的方式，研制開(kāi)發(fā)的用于膽石癥、膽囊炎等疾病治療的中藥復(fù)方新藥。復(fù)方金沙利膽顆粒的處方來(lái)源于黃陂區(qū)人民醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，主要由金錢草、海金沙、白芍、大黃、黃芩、柴胡等中藥材組成，具有疏肝理氣、清熱利濕、利膽排石及抗炎等功效，且療效確切[3-4]。本實(shí)驗(yàn)參考有關(guān)文獻(xiàn)[5-9]以水為提取方法考察白芍的提取工藝，綜合考慮采用水提取的方法對(duì)藥材進(jìn)行提取。本研究采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方金沙利膽顆粒的制備工藝條件，確定了科學(xué)合理的制劑提取及成型工藝,以增加藥材的利用率，從而確定合理的提取工藝，保障其安全有效。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試藥與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 美國(guó)waters高效液相色譜儀、486UV檢測(cè)儀、Dionex C18色譜柱。Adventurer電子分析天平(萬(wàn)分之一)、DHG-9071A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、DK-S26電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、SK250LHC超聲波清洗儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器)。

1.2 藥材及試劑 藥材均購(gòu)自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院住院部中藥房,經(jīng)中藥師杜光主任鑒定符合《中國(guó)藥典》2015年版要求。

試劑中輔料(乳糖、可溶性淀粉、微晶纖維素、糊精)均為藥用級(jí)、其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 芍藥苷的含量測(cè)定[10]

1.3.1.1 色譜條件：色譜柱：We Leh Utimate XB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈—水(17∶83);流速：1.0 ml/min;柱溫：20 ℃; 檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;進(jìn)樣量：20 μl。

1.3.1.2 提取工藝研究：吸水率按處方量1/10稱取藥材，加適量水使完全浸泡，每隔30 min觀察1次，直至藥材全部浸透，濾過(guò)，稱重，計(jì)算藥材吸水率為205% (RSD=1.40%n=3)，故在第1次煎煮時(shí)水量應(yīng)多2倍，以補(bǔ)足藥材吸水量。

1.3.1.3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[11-13]：采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，以芍藥苷含量和浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察的3個(gè)因素，每因素設(shè)置3個(gè)水平，以L9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，因素水平及實(shí)驗(yàn)安排見(jiàn)表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平及實(shí)驗(yàn)安排

1.3.1.4 芍藥苷含量及浸膏得率驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：按處方量稱取藥材204 g，共3份，根據(jù)優(yōu)化得到的工藝條件進(jìn)行提取，所得芍藥苷平均含量為29.18 mg，浸膏平均得率為35.28%，表明優(yōu)化得到的提取工藝穩(wěn)定可行。見(jiàn)表2。

表2 芍藥苷含量及浸膏得率驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.3.1.5 賦形劑的篩選：對(duì)于顆粒劑，目前國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的賦形劑有可溶性淀粉、乳糖、糊精、微晶纖維素等。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稠膏密度為1.15 g/ml時(shí)，稠膏體積與賦形劑質(zhì)量比為1∶2時(shí)，除乳糖外其他賦形劑均可制成符合藥典規(guī)定的顆粒劑，當(dāng)乳糖添加至1∶5時(shí)可制成符合藥典規(guī)定的顆粒劑。本實(shí)驗(yàn)以成型率、休止角、堆密度、溶化性、溶化率和吸濕性為考察指標(biāo)，對(duì)可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素4種賦形劑進(jìn)行綜合性評(píng)價(jià)。

1.3.2 測(cè)定方法：將藥材按優(yōu)化提取工藝提取，過(guò)濾除雜濃縮至密度為1.14～1.16 g/ml(常溫20 ℃)，分4份，每份10 ml，分別加入可溶性淀粉20 g、糊精20 g、乳糖50 g、微晶纖維素20 g，用85%乙醇制成軟材，以14目篩制顆粒，70 ℃干燥烘干，整粒。

1.3.2.1 成型率測(cè)定：按中國(guó)藥典2010年版一部(附錄IC)規(guī)定，采用雙篩分法測(cè)定成型率。取供試品依次過(guò)1號(hào)篩和5號(hào)篩，收集通過(guò)1號(hào)篩而不能通過(guò)5號(hào)篩的顆粒，稱重，計(jì)算成型率。成型率=過(guò)篩后顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100%。

1.3.2.2 休止角測(cè)定：采用固定漏斗法計(jì)算休止角。休止角檢測(cè)顆粒的流動(dòng)性，休止角越小，表明顆粒流動(dòng)性越好。

1.3.2.3 堆密度測(cè)定：將顆粒放入干燥的量筒中，輕輕振動(dòng)量筒，堆密度=M/V。堆密度越大，表示粉體中含有的空隙越小。

1.3.2.4 溶化性測(cè)定：在干燥至恒重的燒杯中加入精密稱取的樣品顆粒5 g，加沸水100 ml，攪拌5 min，觀察溶化性，溶液備用。

1.3.2.5 溶化率測(cè)定：取1.3.2.4項(xiàng)備用藥液，攪拌使其均勻，在干燥至恒重的10 ml離心管中加入精密稱定的備用藥液10 ml，以3 000 r/min離心15 min，棄上清液，于80 ℃溫度下將殘?jiān)娓芍梁阒兀芊Q定，計(jì)算溶化率。

1.3.2.6 吸濕性測(cè)定：精密稱取烘干樣品顆粒2 g，放入干燥至恒重的稱量瓶?jī)?nèi)，置裝有飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內(nèi)，恒重48 h后稱重，計(jì)算吸濕率。

2 結(jié) 果

2.1 賦形劑的考察結(jié)果 除乳糖外各輔料制成的顆粒均不易溶于水，溶化性不佳，但乳糖制粒粘結(jié)情況嚴(yán)重，輔料用量大導(dǎo)致顆粒劑藥品含量降低，并且價(jià)格較高。而糊精粘性較小，穩(wěn)定性好，流動(dòng)性強(qiáng)，溶化性較可溶性淀粉和微晶纖維素好，并且對(duì)于顆粒劑，糊精成型性好。因此綜合降低成本和達(dá)到制粒要求考慮，選擇糊精和乳糖組成的混合輔料作為賦形劑。不同賦形劑的各項(xiàng)指標(biāo)比較結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同賦形劑的各項(xiàng)指標(biāo)比較

2.2 成型工藝優(yōu)選

2.2.1 糊精與乳糖配比優(yōu)選：將藥材按優(yōu)化提取工藝提取，過(guò)濾除雜濃縮至密度為1.14～1.16 g/ml(常溫20 ℃)，分為3份，每份5 ml，精密稱取糊精和乳糖，按不同比例等量遞增法混勻，用85%乙醇作為稀釋劑，制成軟材，以14目篩制顆粒，70 ℃干燥烘干，整粒，按“1.3.2測(cè)定方法”測(cè)定其成型率、吸濕率和溶化性。結(jié)果示當(dāng)糊精與乳糖比例為1.5∶1時(shí)，各項(xiàng)考察指標(biāo)最好。輔料配比及測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 輔料配比及測(cè)定比較

2.2.2 正交設(shè)計(jì)成型工藝優(yōu)化方案：采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，以成型率和吸濕率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇稠膏密度、稠膏和輔料配比、乙醇濃度作為考察的3個(gè)因素，每因素3個(gè)水平，以L9(33)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。按優(yōu)化提取工藝提取，過(guò)濾、除雜、濃縮，按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表安排制成顆粒劑，測(cè)定其成型率和吸濕率，并按照[總評(píng)分=(成型率/最大成型率)×0.5+(最小吸濕率/吸濕率)×0.5]公式進(jìn)行綜合評(píng)分，通過(guò)方差分析評(píng)價(jià)出最優(yōu)成型工藝。因素水平及實(shí)驗(yàn)安排見(jiàn)表5。

表5 成型工藝優(yōu)化正交實(shí)驗(yàn)因素水平及實(shí)驗(yàn)安排

2.2.2.1 成型率與吸濕率測(cè)定：(1)成型率：取供試品依次過(guò)1號(hào)篩和4號(hào)篩，收集通過(guò)1號(hào)篩而不能通過(guò)4號(hào)篩的顆粒，稱重，計(jì)算成型率。成型率=過(guò)篩后顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100%。(2)吸濕性：精密稱取烘干樣品顆粒2 g，放入干燥至恒重的稱量瓶?jī)?nèi)，置裝有飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內(nèi)，恒重48 h后稱重，計(jì)算吸濕率。見(jiàn)表6。

表6 正交實(shí)驗(yàn)方案分析

2.2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)方差分析：各因素主次順序?yàn)锽>A>C，根據(jù)測(cè)定結(jié)果優(yōu)先出最佳成型工藝為A2B2C2，即稠膏常溫下濃縮密度為1.19～1.21 g/ml，取85%乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比為1∶2.5。見(jiàn)表7。

表7 總評(píng)分的方差分析

2.2.3 不同烘干溫度對(duì)顆粒劑的影響：顆粒劑烘干溫度為60～80 ℃，按上述最佳成型工藝制備顆粒劑，分別在60 ℃、70 ℃、80 ℃烘干，考察顆粒劑成型率及溶化性。結(jié)果顯示最佳烘干溫度為80 ℃。見(jiàn)表8。

表8 不同烘干溫度對(duì)顆粒劑的影響

2.2.4 矯味劑：本制劑味微苦，為改善口感，更易于患者服用，選擇在制劑中加入一定量的矯味劑掩蓋其苦感。阿斯巴甜甜度為蔗糖的180倍，安全性明確，甜味純正，廣泛用于各類飲料、食品及中藥制劑中。本制劑選用阿斯巴甜作為矯味劑，當(dāng)阿斯巴甜用量為0.6%(稠膏∶糊精∶乳糖∶阿斯巴甜=1 ml ∶1.5 g ∶1 g ∶0.006 g)時(shí)口感最佳 ，故確定矯味劑阿斯巴甜用量為0.6%。

2.3 成型工藝驗(yàn)證

2.3.1 最優(yōu)成型工藝：總結(jié)上述測(cè)定結(jié)果可知，最優(yōu)成型工藝為：提取工藝下得到的藥液濃縮為常溫下(25 ℃)密度為1.19～1.21 g/ml的稠膏，加入0.6%阿斯巴甜，備用。取糊精與乳糖比例為1.5∶1，等量遞增法混合均勻，制成混合輔料。以85%的乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比1∶2.5制軟材，過(guò)篩，80 ℃烘干，整粒。

2.3.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：按上述最優(yōu)成型工藝制3批顆粒劑，分別測(cè)定成型率、休止角、堆密度、溶化率、吸濕率。結(jié)果顯示優(yōu)化得到的成型工藝穩(wěn)定可行。見(jiàn)表9。

表9 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.4 臨界相對(duì)濕度 為考察在生產(chǎn)時(shí)是否會(huì)受到環(huán)境濕度的影響，以及對(duì)顆粒劑的包裝材料和貯藏條件提出相應(yīng)的要求，對(duì)顆粒劑的相對(duì)臨界濕度進(jìn)行考察。

2.4.1 實(shí)驗(yàn)方法：將按照優(yōu)化后的成型工藝制成的顆粒劑干燥至恒重，精密稱取約2 g放置于干燥至恒重的稱量瓶中，稱量瓶瓶口打開(kāi)放置于裝有6種不同的飽和鹽溶液的玻璃干燥器內(nèi)，在20 ℃恒溫環(huán)境下放置96 h，取出稱量瓶，計(jì)算吸濕率。見(jiàn)表10。

表10 顆粒劑吸濕率(20 ℃)

2.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：以相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)(X)，以吸濕率為縱坐標(biāo)(Y)，繪制吸濕平衡曲線，顯示在不同相對(duì)濕度環(huán)境下，顆粒的吸濕率不同，曲線拐點(diǎn)的橫坐標(biāo)為臨界相對(duì)濕度(CRH)。復(fù)方金沙利膽顆粒的臨界相對(duì)濕度為58%，即在生產(chǎn)本制劑時(shí)，環(huán)境濕度需要控制在58%以內(nèi)，貯藏應(yīng)密閉、防潮，減少水分對(duì)于藥物性質(zhì)和穩(wěn)定性的影響，從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量。見(jiàn)圖1。

圖1 吸濕平衡曲線

3 討 論

復(fù)方金沙利膽顆粒中最佳提取工藝除大黃外等處方藥材加水煎煮，第1次煎煮時(shí)水量應(yīng)多加2倍量水，以補(bǔ)足藥材吸水量，浸泡30 min，提取2次，每次煎煮1 h。大黃在第2次提取50 min時(shí)放入。合并提取液，濾過(guò)，濃縮為常溫下(25 ℃)密度為1.19～1.21 g/ml的稠膏，加入0.6%阿斯巴甜，備用。取糊精與乳糖比例為1.5∶1，等量遞增法混合均勻，制成混合輔料。故從節(jié)約時(shí)間，操作方便的角度考慮[14-15]選擇以85%的乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比為1∶2.5混合，濕法制粒，80 ℃烘干，整粒即得。本研究以復(fù)方金沙利膽顆粒中有效成分芍藥苷含量為研究對(duì)象，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)的方法優(yōu)選最佳提取制備工藝，經(jīng)驗(yàn)證表明該制備工藝提取率高，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單，容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。制備的顆粒成型率高、吸濕率低、有效成分保留率基本穩(wěn)定、溶化性符合規(guī)定，為其制劑的生產(chǎn)提供了可靠的依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。