劉春麗，劉紹雄，，李建英，尚陸娥，張俊波，毛宗洪，羅孝坤，華 蓉，孫達(dá)鋒，**

（1.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；2.云南省供銷合作社科學(xué)研究所，云南 昆明 650221）

羊肚菌（Morchella spp.），又名羊肚菜、蜂窩菌、羊肚蘑、包谷菌，隸屬于子囊菌門（Ascomycota）盤菌綱（Pezizomycetes） 盤菌目（Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae） 羊肚菌屬（Morchella） 是羊肚菌屬真菌的統(tǒng)稱[1]。羊肚菌不僅味道鮮美，而且營養(yǎng)豐富，含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、礦質(zhì)元素、不飽和脂肪酸、以及人體必需的有機(jī)鍺、硒等元素，具有極高的藥用和營養(yǎng)保健價(jià)值，深受廣大消費(fèi)者的喜愛，是世界四大名菌之一，栽培推廣前景極為廣闊[2-6]。

其中，黑色羊肚菌支系是栽培選育的研究重點(diǎn)，國內(nèi)外學(xué)者目前已識(shí)別出42個(gè)黑色羊肚菌支系的系統(tǒng)發(fā)育種[7-19]，在中國，至少分布有16個(gè)黑色羊肚菌支系的系統(tǒng)發(fā)育種，包括六妹羊肚菌M.sextelata、梯棱羊肚菌M.importuna、七妹羊肚菌M.eximia、三地羊肚菌M.eohespera、頭絲羊肚菌M.exuberans、歐氏羊肚菌 M.owneri、Mel-13、Mel-14、Mel-21、Mel-33、Mel-34等。自然界中這些豐富的羊肚菌物種多樣性為篩選優(yōu)良的羊肚菌種質(zhì)資源及人工栽培提供了有利的條件[20]。

目前，我國羊肚菌產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；耘嗟钠贩N主要是來自黑色羊肚菌支系的六妹羊肚菌、梯棱羊肚菌、七妹羊肚菌，其中六妹羊肚菌栽培規(guī)模最大。通過審定的羊肚菌新品種有川羊肚菌6號(hào)、川羊肚菌5號(hào)、川羊肚菌4號(hào)、川羊肚菌3號(hào)、川羊肚菌2號(hào)、川羊肚菌1號(hào)等，其中川羊肚菌6號(hào)為六妹羊肚菌，其他的為梯棱羊肚菌[21-23]。目前適宜栽培的羊肚菌優(yōu)良品種缺乏，嚴(yán)重制約著羊肚菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[24-26]，加大栽培新品種的選育是保障我國羊肚菌產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要舉措。

1 親本來源與選育經(jīng)過

2014年3月，選育組在四川阿壩藏族羌族自治州的若爾蓋縣巴西鎮(zhèn)采集到野生羊肚菌子實(shí)體，海拔約2 800 m，發(fā)生于草地與林地交界處混林區(qū)域。通過多孢分離，經(jīng)過純化獲得5個(gè)羊肚菌純菌株，在同一培養(yǎng)條件下比較生長速度、粗壯程度、濃密度等菌絲長勢(shì)和菌核形成能力，淘汰菌絲弱、菌核形成力差的菌株，篩選得到菌絲和菌核長勢(shì)最好的菌株301，見圖1。經(jīng)過與現(xiàn)已栽培的多個(gè)羊肚菌菌株的拮抗試驗(yàn)，見圖2。

從圖2可以看出，羊肚菌菌株301與其都有明顯的拮抗現(xiàn)象，表明菌株301與它們不是相同的菌株。通過常規(guī)選育方法選育優(yōu)良羊肚菌菌株，選育程序參照GB/T 21125-2007食用菌品種選育技術(shù)規(guī)范進(jìn)行，具體見圖3。

對(duì)選育的羊肚菌菌株進(jìn)行了生物學(xué)特性比較及馴化栽培研究。根據(jù)菌株菌絲體生長速度、長勢(shì)等參數(shù)，結(jié)合拮抗試驗(yàn)、DNA比對(duì)分析，完成品種的室內(nèi)初步鑒定；通過栽培馴化，品種比較試驗(yàn)，初步篩選出菌株編號(hào)為301的羊肚菌菌株。2015年～2017年進(jìn)行了初篩、復(fù)篩及中間試驗(yàn)，2017年～2019年在四川省成都市大邑縣，云南省昆明市晉寧區(qū)寶峰鎮(zhèn)、昆明市盤龍區(qū)阿子營、楚雄州武定縣進(jìn)行多年多點(diǎn)試驗(yàn)，以川羊肚6號(hào)[22]為對(duì)照。

2 選育結(jié)果

羊肚菌菌株301經(jīng)ITS序列比對(duì)分析，鑒定為六妹羊肚菌（Morchella sextelata）。通過初篩、復(fù)篩、中間試驗(yàn)及多地栽培示范試驗(yàn)。菌株301從播種到采收 50 d～70 d，鮮菇產(chǎn)量 0.308 kg·m-2。成熟子實(shí)體菌蓋縱棱極為明顯，橫棱向內(nèi)凹陷、不規(guī)則，菌蓋頂端呈圓鈍形，紅褐色至深棕色。菌柄光滑、近白色，縱切面呈梯形，菌蓋與菌柄交接處有凹陷但不明顯。子實(shí)體兼有單生和叢生方式。子實(shí)體性狀好、穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)、環(huán)境適應(yīng)性廣，適宜在全國相似范圍內(nèi)推廣。2020年4月通過云南省種子管理站非主要農(nóng)作物品種鑒定，命名為中菌羊肚菌1號(hào)。

2.1 小試初篩

小試初篩試驗(yàn)設(shè)計(jì)每組栽培面積為5 m2，3組重復(fù)，按有效播種面積500 m2菌種播種量150 kg計(jì)算，每平方米播種量為0.3 kg，每組播種量為1.5 kg，結(jié)果見表1。

表1 小試初篩出菇產(chǎn)量和性狀統(tǒng)計(jì)Tab.1 Statistics of fruiting yield and traits in small test

由表1可以看出，301小試初篩試驗(yàn)組出菇狀況良好，通過測產(chǎn)折算為畝產(chǎn)，3組平均產(chǎn)量為0.206 kg·m-2。試驗(yàn)結(jié)果較好，出菇整齊，菌蓋為紅褐色、褐色、深棕色，長65.65 mm，直徑 40.43 mm，菌柄近白色，長 40.96 mm，直徑 17.95 mm，子實(shí)體單菇平均鮮重為20.01 g，平均菌蓋長度占整個(gè)菌體長度的0.62。

2.2 小試復(fù)篩

小試復(fù)篩試驗(yàn)設(shè)計(jì)每組栽培面積為10 m2，3組重復(fù)，每組播種量為3 kg。統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量及子實(shí)體農(nóng)藝性狀，結(jié)果見由表2。

由表2可以看出，3組平均產(chǎn)量為0.236 kg·m-2。出菇狀況較初篩更好，管理更成熟，產(chǎn)量有了明顯提高，出菇整齊，菌蓋為褐色、紅褐色，長69.48 mm，直徑 46.08 mm，菌柄近白色，長 44.69 mm，直徑20.56 mm，子實(shí)體單菇平均鮮重為26.29 g，菌蓋長度占整個(gè)菌體長度0.61。

2.3 分子鑒定

菌株301序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中的序列M.sextelata JQ723038.1比對(duì)發(fā)現(xiàn)兩者相似度為99.65%，下載BCBI中的相似羊肚菌ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，親緣關(guān)系見圖4。

2.4 中間試驗(yàn)

中間試驗(yàn)設(shè)計(jì)每組栽培面積為200 m2，菌種播種量為60 kg。羊肚菌菌株301出菇整齊，菌蓋褐色，長69.78 mm，直徑45.26 mm，菌柄近白色，長43.26 mm，直徑 20.54 mm，單菇鮮重 26.12 g，菌蓋長度與菌體長度的比值為0.62。

表2 小試復(fù)篩出菇產(chǎn)量和性狀統(tǒng)計(jì)Tab.2 Small second test screening fruiting yield and characters statistics

2.5 示范栽培

示范栽培試驗(yàn)栽培面積為每個(gè)品種500 m2為1個(gè)處理，3次重復(fù)，以川羊肚菌6號(hào)為對(duì)照。采用相同的菌種量和一致的示范栽培管理技術(shù)。表3～表4為不同示范點(diǎn)示范栽培統(tǒng)計(jì)情況。

經(jīng)過多年的區(qū)域試驗(yàn)及生產(chǎn)試驗(yàn)，結(jié)果表明，羊肚菌菌株301在不同地區(qū)的適應(yīng)性強(qiáng)，大面積栽培性狀及產(chǎn)量穩(wěn)定，適合昆明、麗江、大理、成都及其他與之氣候相類似的地區(qū)栽培生產(chǎn)。

表3 不同示范點(diǎn)供試菌株產(chǎn)量Tab.3 Yield of tested strains at different demonstration sites

表4 菌株301多點(diǎn)示范主要農(nóng)藝性狀表現(xiàn)Tab.4 The performance of main agronomic traits of strain 301 in multi-site demonstration

3 品種特征特性

3.1 菌絲體特性

菌絲生長初期為灰白色，生長速度快，20℃培養(yǎng)4 d布滿試管（18 mm×180 mm）斜面，繼續(xù)培養(yǎng)3 d后，菌落上布滿黃白色顆粒狀菌核，后期菌絲和菌核顏色逐漸變深至黃褐色。

3.2 子實(shí)體特性

成熟子實(shí)體菌蓋縱棱極為明顯，橫棱向內(nèi)凹陷、不規(guī)則，菌蓋頂端呈圓鈍形、下部較寬，顏色為紅褐色、褐色至深棕色，與各地的土壤、氣候及子實(shí)體成熟度有關(guān)，菌蓋長 65.10 mm～78.28 mm，寬43.00 mm～55.02 mm。菌柄光滑、近白色，縱切面呈梯形，長 40.30 mm～52.34 mm，寬 23.00 mm～37.10 mm。菌蓋與菌柄交接處凹陷不明顯。子實(shí)體兼有單生和叢生方式。形態(tài)特征具體見圖5。

4 栽培技術(shù)要點(diǎn)

4.1 栽培季節(jié)

云南省內(nèi)昆明、麗江、大理及相似氣候地區(qū)一般選在10月～12月播種羊肚菌。

4.2 地塊選擇

地勢(shì)平坦，土質(zhì)疏松，透氣性好，持水性好的地塊。

4.3 整地

整地時(shí)每平方米撒石灰150 g調(diào)節(jié)pH及殺蟲、殺菌。

4.4 開廂作畦

栽培畦面寬 0.6 m～1.0 m，高 15 cm，過道寬 0.3 m～0.4 m。

4.5 栽培大棚

可搭建簡易遮陽網(wǎng)大棚或設(shè)施大棚，遮光率達(dá)80%左右。

4.6 播種

播種前對(duì)地塊進(jìn)行預(yù)濕處理，有利于菌種萌發(fā)，但不易過濕，不便于操作。菌種播種前要用1‰～2‰的磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀溶液或水拌種，使菌種含水量達(dá)70%。播種方式有撒播和溝播。一般每平方米菌種使用量為225 g～370 g。撒播：菌種撒在畦面，播種要均勻。溝播：在畦面上開溝，溝寬15 cm～20 cm，溝間距 15 cm～20 cm，深約 5 cm～8 cm為宜，菌種撒在溝內(nèi)。

4.7 覆土

播種后應(yīng)及時(shí)覆土，覆土2 cm～4 cm為宜，需保證將菌種全部覆蓋。

4.8 營養(yǎng)袋放置

播種后7 d～15 d，待菌絲布滿廂面，出現(xiàn)白色分生孢子時(shí)放置營養(yǎng)袋。營養(yǎng)袋通常每平方米1.2 kg～1.5 kg。

4.9 菌絲期管理

保持土壤濕潤，土壤含水量約20%。

4.10 催菇

播種后50 d～70 d，待分生孢子開始消退時(shí)噴淋重水1次，使土壤含水量20%～25%，刺激原基形成。

4.11 出菇管理

溫度控制在10℃～20℃，空氣相對(duì)濕度85%～90%，土壤含水量達(dá)20%～23%，保持通風(fēng)良好，空氣新鮮，栽培技術(shù)可參考羅孝坤等的方法[27]。