田偉，高愛紅

(陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院 a.病理科，b.內(nèi)科，陜西 咸陽 712000)

胃癌是具有較強異型性的消化道惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展過程復(fù)雜，是由多基因、多階段、多因素共同介導(dǎo)的病理過程，疾病初期診出率低，常得不到及時治療，即使在進(jìn)展期實施放、化療，治療結(jié)果也難達(dá)到預(yù)期[1-2]。隨著生物學(xué)研究的不斷深入，研究發(fā)現(xiàn)多種癌基因激活、凋亡抑制基因失活在胃癌的發(fā)生、進(jìn)展過程中扮演重要角色，因此探尋并揭露胃癌病理過程中基因蛋白的表達(dá)情況，對指導(dǎo)臨床靶基因治療具有重要意義[3-4]。S100鈣結(jié)合蛋白A2(S100 calcium binding protein A2，S100A2)是Lee等[5]于1991年發(fā)現(xiàn)的一種新型蛋白，屬于抑癌基因，參與了腫瘤細(xì)胞的抑制。正常情況下，S100A2在機體正常細(xì)胞內(nèi)低表達(dá)，是保障細(xì)胞正常增殖、分化的關(guān)鍵因素，但在機體某組織細(xì)胞發(fā)生癌變后，S100A2在組織內(nèi)的表達(dá)顯著減少[6]。研究顯示，S100家族蛋白的表達(dá)在諸多癌變組織中呈減少甚至缺失狀態(tài)[7]。故考慮S100A2在胃癌組織中可能也存在異常表達(dá)，但S100A2相對表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征是否具有直接聯(lián)系尚不清楚，且臨床相關(guān)研究也較少。本研究旨在分析胃癌組織中S100A2的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，以期為胃癌的診療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2010年1月至2014年12月陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院收治的105例胃癌患者的病歷資料，其中男75例、女30例；年齡42～73歲，平均(57±3)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期85例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；病灶直徑<5 cm 36例，≥5 cm 69例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床病理組織確診為胃癌；②患者均接受手術(shù)治療，且手術(shù)均順利進(jìn)行；③預(yù)計生存時間≥6個月；④胃癌患者病歷資料無缺失，且均有組織切片封存。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡病質(zhì)的患者；②術(shù)前接受放、化療的患者。本研究經(jīng)陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署了知情同意書。

1.2標(biāo)本采集 所有組織標(biāo)本均來源于術(shù)中切除組織，其中胃癌標(biāo)本均采自胃癌原發(fā)病灶處，癌旁組織來源于距離胃癌原發(fā)病灶5 cm的胃壁組織，正常胃組織來源于距離胃癌原發(fā)病灶5 cm外的胃壁組織，且經(jīng)病理學(xué)檢查為正常胃黏膜組織。所有組織來源均確保在術(shù)中離體30 min內(nèi)完成取材，在此過程中應(yīng)用的醫(yī)療器械、標(biāo)本管均經(jīng)去RNA酶水浸泡后使用。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本處理 所有標(biāo)本均使用10%甲醛溶液固定、常規(guī)脫水、包埋(石蠟)、切片(厚度均為4 μm)、染色(蘇木精-伊紅、免疫組織化學(xué)染色液)，利用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法對S100A2進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。

1.3.2儀器及試劑 鼠抗人S100A2抗體(批號：20091225/20111223/20131218)由英國Lab Vision & NEOMARKERS公司生產(chǎn)，兔抗人reprimo抗體(批號：20091221/20111214/20131220)由武漢博士德生物技術(shù)公司生產(chǎn)，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶試劑盒(批號：20091205/20111211/20131123)由福州邁新生物技術(shù)公司生產(chǎn)。包埋機(型號：HistoCore Arcadia H)、脫水機(型號：LP13-RZ6)、染色機(型號：HRS-18C)均由日本Olympus公司生產(chǎn)，光學(xué)顯微鏡(型號：SH11/YF-9)由日本Olympus公司生產(chǎn)。所有操作均嚴(yán)格遵循說明書進(jìn)行，且在嚴(yán)格質(zhì)量控制下完成。

1.3.3判定標(biāo)準(zhǔn) 參照Matsubara等[8]的免疫組織化學(xué)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，選取陽性對照：已知的陽性玻片，陰性對照：磷酸鹽緩沖液代替一抗。具體判定方法為：細(xì)胞核或細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間有棕黃色顆粒視為S100A2陽性表達(dá)。每個玻片隨機選取10個高倍(×200)視野，可根據(jù)陽性表達(dá)的細(xì)胞占比分級，-：視野內(nèi)未見著色細(xì)胞或胞質(zhì)著色但視野中細(xì)胞核著色數(shù)量≤1；+：著色淺或陽性著色細(xì)胞占比<1/4；++：可見著色細(xì)胞深度適宜或陽性著色細(xì)胞占比1/4～1/2；+++：視野內(nèi)著色深或著色細(xì)胞占比>1/2。本研究將+～+++均視為陽性，-為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組織中S100A2的表達(dá)情況 正常胃黏膜組織S100A2的陽性表達(dá)率為100%(105/105)，癌旁組織為92.38%(97/105)，癌組織為75.24%(79/105)，各組S100A2的陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=79.887，P<0.001)，其中癌組織S100A2的陽性表達(dá)率低于癌旁組織、正常胃黏膜組織(χ2=11.370，P<0.001；χ2=29.674，P<0.001)，癌旁組織S100A2的陽性表達(dá)率低于正常胃黏膜組織(χ2=6.368，P<0.001)。各組織中S100A2的表達(dá)分級比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=63.009，P<0.001)，其中癌組織與癌旁組織、正常胃黏膜組織的S100A2表達(dá)分級比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=6.380，P<0.001；Z=5.434，P<0.001)，癌旁組織與正常胃黏膜組織的S100A2表達(dá)分級比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.877，P=0.004)。見表1、圖1。

表1 各組織中S100A2的表達(dá)情況 (例,n=105)

2.2S100A2表達(dá)情況與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 不同性別、年齡、病灶直徑、浸潤深度胃癌患者的S100A2表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期，病灶組織中高分化與低分化、未分化，侵犯脈管與未侵犯脈管，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的S100A2表達(dá)分級比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3S100A2表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性分析 Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，S100A2表達(dá)與胃癌患者的TNM分期、侵犯脈管及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.246，P=0.011；r=-0.424,P<0.001;r=-0.210，P=0.032)，與分化程度呈正相關(guān)(r=0.518，P<0.001)。

表2 S100A2表達(dá)情況與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 (例)

3 討 論

胃癌的發(fā)生與進(jìn)展是由多基因、多因素共同作用造成的細(xì)胞增殖失控與分化受阻等異常積累的過程[9]。在胃黏膜上皮發(fā)生癌變的通路中，抑癌基因與癌基因占主要地位，同時也是介導(dǎo)細(xì)胞生長、分化過程的關(guān)鍵[10]。其中，抑癌基因在介導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化過程中主要發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，能抑制組織內(nèi)癌變細(xì)胞的生長；當(dāng)抑癌基因發(fā)生突變、缺失、失活時，正常組織細(xì)胞不斷向惡性轉(zhuǎn)變，抑癌基因活性的丟失現(xiàn)已被證實是誘發(fā)惡性腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展的重要原因之一[11-12]。推測這種抑癌基因的失活也可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，因此及時探尋胃癌抑癌相關(guān)基因的表達(dá)情況，明確胃癌抑癌基因與臨床特征之間的關(guān)系，對開發(fā)胃癌特異性診斷技術(shù)、開辟胃癌新療法具有重要意義。

S100A2屬于S100家族，S100家族中各成員蛋白均屬于鈣結(jié)合蛋白，各蛋白均由兩個EF-手型結(jié)構(gòu)構(gòu)成，EF-手型結(jié)構(gòu)是由氨基酸組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，與鈣離子的親和力相對較好[13]。而鈣離子已被證實可調(diào)控機體肌肉收縮、細(xì)胞增殖、分化與轉(zhuǎn)錄等細(xì)胞生物學(xué)過程，同時還與某些惡病質(zhì)的發(fā)生、進(jìn)展密不可分，這也是鈣離子作為抑制劑的重要體現(xiàn)，鈣離子抑制劑在癌變組織細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移中具有顯著的抑制作用[14-15]。本研究結(jié)果顯示，癌組織S100A2的陽性表達(dá)率低于癌旁組織、正常胃黏膜組織，胃癌組織中的S100A2低表達(dá)可能提示S100A2的抑癌作用顯著，蛋白的失活有可能參與腫瘤細(xì)胞的生長、運動、凋亡。其原因可能為：①S100A2陽性表達(dá)率較高時，S100A2與鈣離子結(jié)合率高，血清中游離的鈣離子濃度隨之降低，游離的鈣離子顯著抑制了癌變細(xì)胞的增殖、分化，最終延緩或抑制組織癌變過程[16-17]。②S100A2陽性表達(dá)率降低時，抑制細(xì)胞增殖的作用削弱，促凋亡作用也隨之削弱，為腫瘤細(xì)胞大量增殖、分化創(chuàng)造條件，加速胃癌進(jìn)展，導(dǎo)致胃癌患者預(yù)后難達(dá)理想效果[18-19]。

已知S100A2的表達(dá)情況與胃癌疾病進(jìn)展過程密不可分，但其表達(dá)是否與胃癌的臨床特征也存在某種必然聯(lián)系尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，S100A2表達(dá)情況與胃癌患者的TNM分期、侵犯脈管及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈負(fù)相關(guān)，與分化程度呈正相關(guān)，進(jìn)一步證實了S100A2在胃癌中的檢測價值。分析原因可能為：①癌變細(xì)胞運動能力增強是促進(jìn)癌變組織發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要因素，也是必要前提。S100A2與非骨骼肌球蛋白相互作用，增強肌動蛋白細(xì)絲流動能力，改變癌變細(xì)胞結(jié)構(gòu)，促進(jìn)其運動，繼而增強腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力[17]。②癌變細(xì)胞在分化、轉(zhuǎn)移過程中會造成諸多蛋白酶的改變，基質(zhì)金屬蛋白酶在癌變細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲過程中發(fā)揮重要作用，能夠有效降解癌變細(xì)胞外基質(zhì)，并幫助其重塑；而S100A2通過介導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶合成、分泌，間接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲[20]。③S100A2具有顯著的抑癌作用，當(dāng)S100A2陽性表達(dá)下調(diào)時，抑癌作用也隨之減弱。因此，臨床可考慮將S100A2表達(dá)情況作為評估臨床胃癌患者病情進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)。但本研究納入樣本數(shù)量較少，缺乏臨床論據(jù)，仍需更多試驗加以驗證。

綜上所述，胃癌組織中S100A2呈低表達(dá)可能提示胃癌TNM分期高、分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不良臨床特征，由此考慮早期檢測胃癌患者的S100A2表達(dá)來作為患者病理特征評估的輔助手段，并指導(dǎo)臨床相關(guān)治療方案的制訂。