周建宏 張艷麗 張利斌

[摘要] 目的 探討TAZ（Transcriptional coactivator with PDZ-binding- motif）mRNA在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達及其臨床意義。方法 選擇2010年6月至2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸外科手術(shù)切除的62例經(jīng)病理確診的非小細(xì)胞肺癌組織為研究組，選擇癌旁組織（距癌組織>5 cm）和21例肺良性腫瘤組織為對照組，采用實時熒光定量PCR法檢測TAZmRNA表達量。 結(jié)果 ①實時熒光定量PCR法檢測到TAZ mRNA的表達量在非小細(xì)胞肺癌組織高于癌旁/肺良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.027/0.016<0.05）。②非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中TAZmRNA表達量在腫瘤大小、分化程度和p-TNM分期中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.007/0.000/0.024<0.05）。結(jié)論 TAZ可能參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展;可作為NSCLC預(yù)后及轉(zhuǎn)移的評價指標(biāo)、提供非小細(xì)胞肺癌治療的靶點。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌;mRNA;轉(zhuǎn)錄共激活因子;實時熒光定量PCR

[中圖分類號] R734.2? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）36-0005-04

The expression and clinical significance of TAZmRNA in non-small cell lung cancer tissues

ZHOU Jianhong1? ?ZHANG Yanli2? ?ZHANG Libin3

1.Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery，the People's Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture in Yunnan Province，Chuxiong? ?675000，China;2.The First Department of Anesthesia，the People's Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture in Yunnan Province，Chuxiong? ?675000，China; 3.Department of Thoracic Surgery， the First People's Hospital of Yunnan Province， Kunming? ?650032， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of TAZ （Transcriptional coactivator with PDZ-binding-motif） mRNA in non-small cell lung cancer （NSCLC） tissues. Methods A total of 62 pathologically confirmed non-small cell lung cancer tissues previously resected at the Department of Thoracic Surgery of the First People's Hospital of Yunnan Province from June 2010 to January 2013 were selected as the study group. The tissues adjacent to cancer （more than 5 cm from the cancer tissue） and 21 benign lung tumor tissues were selected as the control group. The expression of TAZ mRNA was detected by real-time quantitative PCR. Results ①The expression level of TAZ mRNA in the non-small cell lung cancer tissues was higher than that in paracancerous/benign lung tumors by real-time fluorescent quantitative PCR， and the difference was statistically significant （P=0.027/0.016<0.05）.②The expression of TAZ mRNA in non-small cell lung cancer tissues was significantly correlated with tumor size， differentiation， and p-TNM stage（P=0.007/0.000/0.024<0.05）. Conclusion TAZ may be involved in the occurrence and development of non-small cell lung cancer. It may be used as a prognostic and metastatic evaluation index of NSCLC and provide a therapeutic target for lung cancer.

[Key words] Lung cancer; mRNA; Transcriptional coactivator; Real-time quantitative PCR

目前肺癌是全世界發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤[1-2]，其中約85%患者為非小細(xì)胞肺癌[3]，早期肺癌的治療效果已經(jīng)突顯，而對于晚期及進展期肺癌的治療仍然是難題及研究重點。轉(zhuǎn)移是癌細(xì)胞從原發(fā)腫瘤擴散到不同器官，是癌癥相關(guān)死亡的主要原因，對轉(zhuǎn)移相關(guān)的靶向治療有望成為提高腫瘤患者生存率的有效策略;而轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，包括不同的步驟，癌細(xì)胞需要在每個步驟中獲得不同的能力，并受到多種細(xì)胞信號通路的調(diào)控[4]。TAZ/WWTR1（Transcriptional coactivator with PDZ-binding motif/WW-domain containing transcription regulator 1 WWTR1）即具有PDZ結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄共刺激因子，是一種轉(zhuǎn)錄輔激活物，參與體內(nèi)細(xì)胞增殖、凋亡調(diào)控及多種器官的發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，TAZ在多種腫瘤中表達升高，作為致癌因子參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5]。本研究選擇62例經(jīng)病理確診的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織為研究組，選擇癌旁組織（距腫瘤邊緣>5 cm）和21例肺良性腫瘤組織為對照組，采用實時熒光定量PCR法檢測TAZmRNA表達，并探討其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年6月至2013年1月在云南省第一人民醫(yī)院胸外科手術(shù)切除的NSCLC患者62例（所有標(biāo)本采集均在離體后2 min內(nèi)完成，標(biāo)本在液氮及-70℃冷藏備用），患者均資料完整且經(jīng)手術(shù)病理確診，術(shù)前未接受放、化療，其中男43例，女19例，平均年齡（58±10）歲。對照組采用同一患者的癌旁組織（距腫瘤邊緣>5 cm）和21例肺良性腫瘤組織（標(biāo)本采集同研究組）。

1.2 主要試劑

總RNA提取試劑盒（Tiangen），qRT-PCR的M-MLV第一鏈合成系統(tǒng)（invitrogen），引物管家基因β-actin及目的基因TAZ、SYBR Premix EX TaqTMⅡ（TaKaRa）。

1.3 方法

Tiangen總RNA提取試劑盒提取組織總RNA。Gene quactⅡ比色儀測定總RNA濃度，制備1.2%的瓊脂糖凝膠（0.5 μg/mL溴化乙錠染色），取l μL總RNA，加入8 μL DEPC H2O及1 μL 10倍上樣緩沖液，上樣60 V電泳40 min，檢測總RNA完整性。qRT-PCR的M-MLV第一鏈合成系統(tǒng)試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈體系。實時熒光定量PCR引物為TAZ序列F5′ CTTGGATGTAGCCATGACCTT3′R5′TCAATCAAAACCAG-GCAATG3′，β-actin序列F5′ CGGGAAATCGTGCGT-GAC3′R5′CAGGAAGGAAGGCTGGAAG3′;2×qPCR Mix 5 μL，2 pmolTAZ/β-actinF 1 μL，2 pmolTAZ/β-actin R 1 μL，模板cDNA 2 μL，dH2O1 μL共10 μL體系;95℃變性10 s，62℃退火延伸40 s，擴增共40個循環(huán)。2%的瓊脂糖凝膠電泳及擴增溶解曲線鑒定實時熒光定量PCR產(chǎn)物、并用△CT進行定量分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗及單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實時熒光定量PCR結(jié)果

總RNA的A260/A280檢測值均在1.74～1.98之間，提示總RNA純度好;瓊脂糖凝膠電泳可見28 S和18 S條帶明亮、邊緣清晰且亮度比值接近2∶1，提示總RNA質(zhì)量高（圖1）。PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳顯示，β-actin及TAZ擴增產(chǎn)物片段大小與設(shè)計相符并且為特異性擴增（圖2）。溶解曲線顯示單高峰特異性擴增（封三圖1～2）。

2.2 NSCLC患者癌組織、癌旁組織中TAZmRNA表達結(jié)果

NSCLC患者癌組織、癌旁組織中TAZ mRNA平均ΔCT值分別為（4.84±2.60）和（5.82±2.25），癌組織TAZ mRNA表達量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 NSCLC患者癌組織、肺良性腫瘤組織中TAZmRNA表達結(jié)果

NSCLC患者癌組織、肺良性腫瘤組織TAZ平均ΔCT值分別為（4.84±2.60）和（6.35±1.87），癌組織TAZ mRNA表達量高于肺良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4 NSCLC患者癌組織TAZmRNA表達與臨床因素的關(guān)系

NSCLC組織中TAZmRNA表達量在腫瘤組織大小、分化程度及p-TNM分期比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;而患者的性別、年齡、吸煙史、病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

腫瘤的發(fā)生和癌癥的發(fā)展是由于個體對組織器官中細(xì)胞的限定失效導(dǎo)致的，是包括細(xì)胞增殖能力增強、細(xì)胞凋亡被抑制等多種過程聯(lián)合作用的結(jié)果。正常生理狀態(tài)下，TAZmRNA在幾乎（除胸腺和外周血細(xì)胞）所有組織和器官中均有表達，其中腎臟、心臟、胎盤和肺臟中表達量較高[5]。研究發(fā)現(xiàn)，YAP/TAZ參與肺再生[6]。TAZ作為一種轉(zhuǎn)錄輔激活物，參與體內(nèi)細(xì)胞增殖、凋亡調(diào)控和多種器官的發(fā)育，其包含一個保守的WW結(jié)構(gòu)域、14-3-3結(jié)合位點及C-末端的PDZ結(jié)合基序，通過第89位絲氨酸殘基磷酸化與細(xì)胞質(zhì)中的14-3-3蛋白結(jié)合，去磷酸化后具有轉(zhuǎn)錄共激活因子的活性易位于細(xì)胞核中[7]，腫瘤的發(fā)生、演變過程是多因素、多通路、多階段的復(fù)雜過程，其發(fā)生是細(xì)胞的增殖與分化失常所導(dǎo)致的惡性生長現(xiàn)象[8]。盡管存在這些復(fù)雜性，有些腫瘤的形成和存活還是傾向于被某一特定的癌基因所驅(qū)動[9]。TAZ和YAP在正常組織發(fā)育和穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著獨特的重要作用[10]。然而大量研究表明，YAP/TAZ在大多數(shù)實體腫瘤中是致癌轉(zhuǎn)錄因子，在肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌、膀胱癌和卵巢癌等多種癌癥中，YAP/TAZ在癌細(xì)胞中的高表達和（或）細(xì)胞核定位與不良臨床預(yù)后相關(guān)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，TAZmRNA在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中的表達量高于癌旁及肺良性腫瘤組織，與文獻報道相符合。研究也發(fā)現(xiàn)，YAP/TAZ調(diào)控基因表達的特征與肺癌和乳腺癌的不良預(yù)后相關(guān)[12]。研究還發(fā)現(xiàn)，TAZ/YAP在小鼠肺癌模型中異位表達促進腫瘤的形成和進展[13]。在細(xì)胞水平上YAP/TAZ參與腫瘤進展所需的多種功能，YAP/TAZ通過上調(diào)大量參與細(xì)胞周期控制的基因如CCND1、CDK1、CDC25和MCMs，促進細(xì)胞增殖[14]。YAP/TAZ還能促進各種癌細(xì)胞的錨定非依賴生長并參與調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、侵襲、存活和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[15]。

基于以上的TAZ研究背景，本研究通過RT-qPCR法檢測非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織TAZmRNA的表達量，結(jié)果顯示癌組織中的表達量遠(yuǎn)高于癌旁組織及肺良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。非小細(xì)胞肺癌患者癌組織中TAZmRNA的表達量在其腫瘤大小、分化程度和p-TNM分期中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與文獻描述的TAZ參與腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良是相互吻合的。但本研究發(fā)現(xiàn)其表達量在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能因腫瘤發(fā)生、演變過程是多因素、多通路、多階段的復(fù)雜過程，或者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的樣本量少等相關(guān)，可為今后繼續(xù)研究提供一些思路。

綜上所述，TAZ可能參與非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的發(fā)生、發(fā)展;可作為NSCLC預(yù)后評價指標(biāo);并可能成為預(yù)測轉(zhuǎn)移的指標(biāo)、提供肺癌治療靶點。

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（收稿日期：2021-08-18）