張小靜 潘曉芳 邢立森 張潤鋒 李楊玲 吳靜標(biāo)

糖化血紅蛋白（Glycated Hemoglobin，HbA1c）作為糖尿病早期診斷和病后血糖監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)，是評(píng)估糖尿病病人長期糖化控制的主要度量［1］。2011年世界衛(wèi)生組織（World Health Organi?zation，WHO）推薦采用HbA1c 作為糖尿病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)生物標(biāo)志物［2］。《中國2 型糖尿病防治指南》建議用HbA1c 評(píng)估患者的血糖控制情況［3］。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，有新的檢驗(yàn)方法或檢驗(yàn)儀器時(shí)，為保證測(cè)量結(jié)果的一致性，需要評(píng)價(jià)新的檢驗(yàn)方法或檢驗(yàn)儀器的結(jié)果的一致性，以保證新檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)量結(jié)果與舊檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果一致。本文使用對(duì)照和考核系統(tǒng)的糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)，除常規(guī)的統(tǒng)計(jì)方法外，還使用了Bland?Altman 分析法，以期全面比對(duì)兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)方法一致性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)樣本

2019年3月至6月收集本院檢驗(yàn)科的99 名受試者靜脈全血樣本，保存在-80℃的冰箱中，收集完畢后試驗(yàn)前一次性解凍后進(jìn)行測(cè)試。

1.1.2 儀器和試劑

①對(duì)照系統(tǒng)儀器：全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀（型號(hào)：HA?8180，廠家：ARKRAY Factory，Inc.）。②考核系統(tǒng)儀器：全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀（型號(hào)：HA?120，廠家：廣東優(yōu)尼德生物科技有限公司（以下簡稱優(yōu)尼德））。③對(duì)照系統(tǒng)試劑：洗脫緩沖液ELUENT 80A 和80B（高效液相色譜法（HPLC法））（批號(hào)分別為：8H1321 和8H1331）、HbA1c 溶血?jiǎng)ㄅ?hào)：8H1361）、HbA1c 校準(zhǔn)品（批號(hào)：8H1327）、HbA1c 質(zhì)控品（批號(hào)：8H1326），以上廠家均為ARKRAY Factory，Inc.。④考核系統(tǒng)試劑：糖化血紅蛋白A1c 洗脫緩沖液A 試劑盒和B 試劑盒（高效液相色譜法）（批號(hào)分別為：2820190101 和2920190101）、HbA1c 溶血?jiǎng)ㄅ?hào)：3020190101）、HbA1c 校準(zhǔn)品（批號(hào)：HJ20190101）、HbA1c 質(zhì)控品（批號(hào)：HZ20190101），以上廠家均為優(yōu)尼德。

1.2 檢測(cè)方法

分別用考核系統(tǒng)和對(duì)照系統(tǒng)單次檢測(cè)99 例全血樣本。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 進(jìn)行基礎(chǔ)數(shù)據(jù)、分布頻數(shù)、線性相關(guān)分析和回歸分析、對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性D'Agostino 檢驗(yàn)和t 檢驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)的系統(tǒng)誤差進(jìn)行分析。并用Medcalc V19.0.4 進(jìn)行Bland?Altam 分析。參照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》、《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》、EP9?A、《醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》等法規(guī)性文件和書籍，對(duì)表檢測(cè)結(jié)果行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析［4?7］。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果

99 例全血樣本分別在對(duì)照系統(tǒng)和考核系統(tǒng)的糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑中分別進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)樣本均是單次測(cè)定。對(duì)照系統(tǒng)和考核系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果及兩者配對(duì)差值。見表1。

2.2 一致性分析

2.2.1 基礎(chǔ)計(jì)算

對(duì)照系統(tǒng)、考核系統(tǒng)及兩個(gè)系統(tǒng)的各個(gè)統(tǒng)計(jì)量計(jì)算結(jié)果。見表2。

2.2.2 數(shù)據(jù)分布頻數(shù)圖

結(jié)果表明對(duì)照系統(tǒng)、考核系統(tǒng)的測(cè)量結(jié)果主要集中在5.42 和6.42 之間。見圖1。

表1 對(duì)照系統(tǒng)和考核系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果和配對(duì)差值Graph 1 Results of control system，assessment system，and paired difference results

2.2.2.1 線性相關(guān)分析 以對(duì)照系統(tǒng)為自變量X，考核系統(tǒng)為因變量Y，作散點(diǎn)圖，R2=0.9779，兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)之間的結(jié)果具有良好的線性關(guān)系。見圖2。

2.2.2.2 線性回歸分析 回歸模型F 檢驗(yàn)和回歸系數(shù)b 的t 檢驗(yàn)：H0：b=0，H1：b≠0，α=0.05，作數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，兩種檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)量結(jié)果間存在著顯著的直線關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 基礎(chǔ)計(jì)算結(jié)果Table 2 Basic calculation results

2.2.3 Bland?Altam 分析

Bland?Altam 分析，僅有4/99（4.04%）界外點(diǎn)數(shù)，對(duì)照系統(tǒng)、考核系統(tǒng)的測(cè)量結(jié)果一致。見圖3。

2.2.4 分析系統(tǒng)誤差

2.2.4.1 D'Agostino 檢驗(yàn) 采用D（D'Agostino）檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，建立假設(shè)：H0：數(shù)據(jù)總體服從正態(tài)分布，H1：數(shù)據(jù)總體服不從正態(tài)分布，α=0.05，作數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，對(duì)照系統(tǒng)、考核系統(tǒng)的測(cè)量結(jié)果服從正態(tài)分布。見表4。

圖1 對(duì)照系統(tǒng)、考核系統(tǒng)及配對(duì)差值分布頻數(shù)圖Figure 1 Distribution frequency graph of control system，assessment system results and paired difference results

圖2 對(duì)照系統(tǒng)與考核系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果散點(diǎn)圖Figure 2 Scatter plot of control system and assessment system results

2.2.4.2 t 檢驗(yàn)數(shù)據(jù)分析 Spearman 進(jìn)行分析，95%CI：0.901 0～0.954 3。兩種檢測(cè)系統(tǒng)直線相關(guān)關(guān)系成立（r=0.932 5，t=25.436，P=0.000)。

3 討論

糖尿病是臨床上發(fā)病率最高的慢性病之一，長期處于高血糖的患者，會(huì)引發(fā)糖尿病并發(fā)癥，并引起糖尿病患者殘疾或死亡，因此做到早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防、早治療是降低糖尿病發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵［8］。HbA1c 可以規(guī)避服用藥物和胰島素、短時(shí)間血糖波動(dòng)、飲食和運(yùn)動(dòng)情況等影響，使糖尿病的診斷更穩(wěn)定，結(jié)果更可靠，是評(píng)價(jià)長期血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)［9?10］。

表3 數(shù)據(jù)直線回歸分析結(jié)果Table 3 Linear regression analysis results

Bland?Altman 法作為新的圖形分析法，可以從集中趨勢(shì)、離散趨勢(shì)、同步變化程度多角度評(píng)價(jià)新舊檢驗(yàn)方法或檢驗(yàn)系統(tǒng)的一致性，彌補(bǔ)了t檢驗(yàn)、相關(guān)分析和回歸分析的不足，是評(píng)價(jià)兩種檢驗(yàn)方法一致性的標(biāo)準(zhǔn)方法之一［11］。

圖3 對(duì)照系統(tǒng)和考核系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的Bland?Altam 圖Figure 3 Bland?Altam diagram of control system and assessment system

臨床上檢測(cè)血清糖化血紅蛋白的方法主要有離子交換高效液相色譜分析法、微柱法、電泳法、親和層析法、免疫法5 種［12?13］。美國臨床化學(xué)協(xié)會(huì)（American Association for Clinical Chemistry，AACC）糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化分會(huì)和國際臨床化學(xué)和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）HbA1C 標(biāo)準(zhǔn)化工作組建議，以糖尿病控制與并發(fā)癥研 究（Diabetes Control and Complications Trial，DCCT）中所“指定的方法”—高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作為檢測(cè)糖化血紅蛋白的金標(biāo)準(zhǔn)，希望以此使大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法能夠參照“指定的方法”實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化［14］。2002年美國糖尿病協(xié)會(huì)（American Dia?betes Association，ADA）將HPLC 法作為監(jiān)測(cè)糖尿病控制的金標(biāo)準(zhǔn)，并規(guī)定所有糖尿病患者均應(yīng)測(cè)定HbA1c［15］。

表4 數(shù)據(jù)差值正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)果Table 4 Normality of difference between control system and assessment system

ARKRAY Factory，Inc.公司的高效液相色譜系統(tǒng)被中國三甲等大型醫(yī)院廣泛應(yīng)用，在中國市場占有率高，檢測(cè)糖化血紅蛋白口碑好［16?18］。美國HbA1c 標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃使用離子交換HPLC 為“參考方法”，是目前為HbA1c 測(cè)定的指定比對(duì)方法［19］。本文選用優(yōu)尼德的糖化血紅蛋白A1c 洗脫緩沖液A 試劑盒（高效液相色譜法），原理實(shí)際上就是HPLC 法，該方法具有檢測(cè)結(jié)果變異系數(shù)小、可以通量檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)。利用Bland?Altman 法作為圖形分析法，可以從集中趨勢(shì)、離散趨勢(shì)、同步變化程度多角度評(píng)價(jià)兩種檢驗(yàn)方法的一致性，彌補(bǔ)t檢驗(yàn)、相關(guān)分析和回歸分析的不足。結(jié)果表明優(yōu)尼德和ARKRAY Factory，Inc。公司兩種檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)糖化血紅蛋白測(cè)量結(jié)果一致性良好，優(yōu)尼德的檢測(cè)系統(tǒng)適用于糖化血紅蛋白檢測(cè)。Bland?Al?tam 分析顯示界外點(diǎn)數(shù)/總分析樣本數(shù)為4/99，只有4.04%不在［?1.96Sd，+1.96Sd］內(nèi)，對(duì)照系統(tǒng)與考核系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果測(cè)量結(jié)果一致性良好。D'Agostino 檢驗(yàn)結(jié)果表明99 例樣本不服從正態(tài)分布，t檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析和回歸分析都表明考核系統(tǒng)與對(duì)照系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果之間具有良好線性關(guān)系。

但是此次實(shí)驗(yàn)尚有不足，首先是分析樣本數(shù)量不大；其次是未引入國際標(biāo)準(zhǔn)品或者國家標(biāo)準(zhǔn)品。未來將通過比對(duì)或參加原衛(wèi)生部林建中心室間質(zhì)評(píng)等方式進(jìn)一步進(jìn)行試劑考核來確證該體系的臨床符合率，并對(duì)試劑的穩(wěn)定性、可重復(fù)性、批間差等相關(guān)性能驗(yàn)證進(jìn)一步開展。