張 晉， 姜 英， 李文娟， 白 楓

(1.遼寧省人民醫(yī)院婦科， 遼寧 沈陽 110000 2.遼寧省腫瘤醫(yī)院婦科， 遼寧 沈陽 110000)

子宮內(nèi)膜癌是婦科腫瘤當(dāng)中死亡率和發(fā)生率較高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，并且子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后較差，對(duì)子宮內(nèi)膜癌分子病理的了解有助于降低子宮內(nèi)膜癌死亡率[1]。L1-細(xì)胞黏附分子(L1 cell adhesion molecule,L1CAM)屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白，主要分布于細(xì)胞膜上，參與細(xì)胞黏附調(diào)節(jié)，在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)上調(diào)，與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移聯(lián)系密切[2]。黑色素瘤核蛋白-18(Melanoma nuclear protein 18,Mel-18)屬于多梳族蛋白家族成員，在胚胎細(xì)胞發(fā)育成熟、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞分化等過程中起到重要作用，參與腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移等過程[3]。原癌基因(c-myc)屬于轉(zhuǎn)錄因子家族，在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)陽性率增高，在腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等過程中起到一定促進(jìn)作用[4]。有研究發(fā)現(xiàn)[5]，c-myc蛋白可以與L1CAM和Mel-18結(jié)合共同參與癌癥進(jìn)展。本研究檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌中L1CAM、Mel-18、c-myc的表達(dá)，旨在分析3指標(biāo)與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:選擇2015年2月至2019年12月收治的80例子宮內(nèi)膜癌患者，患者在入院后均行手術(shù)治療，收集手術(shù)過程中患者的腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織(距離癌組織邊緣2cm以上)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①在入院之前未接受過放化療治療；②經(jīng)病理學(xué)診斷確診為子宮內(nèi)膜癌；③臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在嚴(yán)重肝腎功能障礙；②不適宜進(jìn)行手術(shù)治療；③合并有其它類型腫瘤；④合并自身免疫性疾病或感染性疾病?；颊吣挲g38～76歲，平均(59.98±5.02)歲。參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)[6]分為Ⅰ～Ⅱ期49例，Ⅲ期31例。腫瘤直徑：≤3cm者23例，>3cm者57例；未絕經(jīng)22例，已絕經(jīng)58例；糖尿病史25例，無糖尿病史55例；子宮內(nèi)膜樣腺癌52例，黏液/漿液性腺癌28例；高中分化56例，低分化24例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例；肌層浸潤(rùn)<1/2者46例，肌層浸潤(rùn)>1/2者34例。

1.2L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表達(dá)檢測(cè):手術(shù)過程中切除樣本后立即進(jìn)行常規(guī)10%中性甲醛固定24h，酒精梯度脫水(依次在70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和無水乙醇中浸泡1h)，二甲苯浸泡2h，酒精梯度脫水后通過生物組織包埋機(jī)進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制備成組織芯片。組織芯片脫蠟水化，使用3%過氧化氫在37℃濕盒中孵育20min，隨后在高壓鍋中進(jìn)行抗原修復(fù)，高壓鍋中加入檸檬酸緩沖液(pH為6.0)，沸騰后將切片置于高壓鍋中，沸騰后及時(shí)5min，取出切片。封閉液37℃孵育30min。孵育結(jié)束后滴加Anti-L1CAM抗體或Anti-MEL-18抗體或Anti-c-myc抗體過夜，抗體均購(gòu)自Acam生物科技有限公司。次日先PBS緩沖液沖洗3遍，每次5min。滴加二抗37℃孵育30min，最后滴加二氨基聯(lián)苯胺顯色劑顯色5min，蘇木精復(fù)染3min、脫水、透明和固定，倒置生物顯微鏡下觀察染色結(jié)果。細(xì)胞陽性數(shù)分為五個(gè)等級(jí)，分別為0、1、2、3和4分，陽性細(xì)胞比例≤5%為0分，5%<陽性比例<25%為1分，25%≤陽性比例<50%為2分，50%≤陽性比例<75%為3分，陽性比例≥75%為4分。染色強(qiáng)度分為無色(0分)，淡黃色(1分)，棕黃色(2分)和棕褐色(3分)，最終評(píng)分為陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分乘積，最終評(píng)分按等級(jí)分為陰性(0～4分)和陽性(5～12分)[7]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以%來表示，通過χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Pearson法進(jìn)行表達(dá)相關(guān)性分析，P<0.05則表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表達(dá)情況:免疫組化結(jié)果顯示L1CAM和MEL-18主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，而c-myc主要分布于細(xì)胞核中，染色結(jié)果呈棕色。80例子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM陽性58例(72.50%)，癌旁組織中L1CAM陽性20例(25.00%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.123，P=0.000)(圖1A和B)。癌組織中MEL-18陽性61例(76.25%)，癌旁組織中MEL-18陽性21例(26.25%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=40.025，P=0.000)(圖1C和D)。癌組織中c-myc陽性55例(68.75%)，癌旁組織中c-myc陽性22例(27.50%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.263，P=0.000)(圖1E和F)。

圖1 子宮內(nèi)膜癌及其癌旁組織中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表達(dá)情況(免疫組化400×)

2.2子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系:子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和FIGO分期相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、月經(jīng)、糖尿病史、病理類型、腫瘤大小、組織學(xué)分化和肌層浸潤(rùn)無關(guān)(P>0.05)，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM Mel-18 c-myc蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系n(%)

2.3子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc表達(dá)相關(guān)性分析:子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM與Mel-18、c-myc表達(dá)均呈正相關(guān)性(r=0.796、0.653，P<0.05)，Mel-18與c-myc表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.637，P<0.05)。

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素作用的結(jié)果，其中腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用[8]，尋找與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的標(biāo)志物對(duì)于降低子宮內(nèi)膜癌患者的死亡率具有重要意義。L1CAM是細(xì)胞內(nèi)微管和微絲組裝的重要調(diào)節(jié)蛋白，參與細(xì)胞有絲分裂和絲狀偽足形成等過程[9]。本研究發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中L1CAM表達(dá)陽性率升高，并且L1CAM表達(dá)與FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明在子宮內(nèi)膜癌中L1CAM可能起到促癌基因的作用，并且與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度密切相關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn)L1CAM能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移及惡性程度增高[10]。MEL-18是多梳基因家族的核心成員，在細(xì)胞增殖、胚胎形成以及干細(xì)胞自我更新等過程中均起到重要作用[11]。本研究發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中MEL-18表達(dá)陽性率升高，并且MEL-18表達(dá)也與FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在子宮內(nèi)膜癌中MEL-18也起到促癌作用，并且與子宮內(nèi)膜癌的惡性進(jìn)展相關(guān)。分析其原因可能是由于MEL-18參與腫瘤炎癥反應(yīng)的形成。已有研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤當(dāng)中MEL-18蛋白與B細(xì)胞特異的莫洛尼白血病毒插入位點(diǎn)1蛋白存在正協(xié)同作用，二者形成蛋白復(fù)合體參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[12]。c-myc是一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白，參與細(xì)胞惡性增殖、凋亡以及免疫逃逸等病理生理過程[13]。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明c-myc也能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展，并且與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度相關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn)c-myc能夠上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管新生，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[14]。

本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc表達(dá)彼此間呈正相關(guān)性。分析其原因可能是由于c-myc屬于轉(zhuǎn)錄因子家族成員，參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)[15]。在子宮內(nèi)膜癌當(dāng)中，L1CAM和Mel-18可能是c-myc的靶基因，L1CAM和Mel-18的表達(dá)受到c-myc調(diào)節(jié)。目前對(duì)于子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc之間的調(diào)控分子機(jī)制仍然缺乏了解，需要后續(xù)研究進(jìn)一步深入探究。

綜上所述，在子宮內(nèi)膜癌組織中L1CAM、Mel-18、c-myc陽性比例升高，并且均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和FIGO分期密切相關(guān)，在子宮內(nèi)膜癌的治療和診斷中具有一定的輔助價(jià)值。