于 明，程 波*，張子光，楊榮芳

（1．遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 營(yíng)口115009；2．大連成三集團(tuán)，遼寧 大連116308）

添加在飼料中的抗生素對(duì)動(dòng)物的抑菌、促生長(zhǎng)等方面起到顯著效果；但濫用、超量使用或不按停藥期使用抗生素，導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性、環(huán)境污染、食品安全等問(wèn)題接踵而來(lái)。畜牧工作者在積極探索各種方法以期替代抗生素，使用無(wú)抗飼料，發(fā)展健康養(yǎng)殖，提供安全畜禽產(chǎn)品，并且改善動(dòng)物腸道健康和生產(chǎn)性能。適當(dāng)劑量的益生菌可使宿主胃腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡，畜體的健康水平和生長(zhǎng)性能得到改善[1]。家禽飼喂益生菌制劑后，腸道內(nèi)有益菌數(shù)量增加，機(jī)體抗病能力提高，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用能力增強(qiáng)，達(dá)到防治腸道疾病和促進(jìn)生長(zhǎng)的雙重作用[2]。與使用抗生素不同，動(dòng)物的非特異性免疫力在使用益生菌制劑后得到增強(qiáng)，飼料的利用率提高，動(dòng)物生長(zhǎng)性能改善，減少環(huán)境污染[3]。目前，益生菌制劑在生產(chǎn)中使用效果評(píng)價(jià)不一，主要與菌群活性和添加量有關(guān)。本試驗(yàn)探討在肉仔雞飼糧中添加不同比例的復(fù)合益生菌制劑對(duì)其生長(zhǎng)性能、免疫功能和腸道菌群的影響，為肉雞生產(chǎn)中確定適宜添加比例的復(fù)合益生菌制劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)復(fù)合益生菌由發(fā)酵乳桿菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌混合而成，三者以1∶1∶1的比例混合。各菌株含量均≥1.0×109CFU/g，以上菌種由大連某畜牧業(yè)公司提供。ELISA試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)飼糧

參考我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（2004）和Cobb500肉雞的營(yíng)養(yǎng)需求[4]配制基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)，選用1日齡健康的科寶肉仔雞360只（公、母雛混養(yǎng)），對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組）飼糧在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.5%、1.0%和1.5%3個(gè)水平的復(fù)合益生菌制劑，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只雞，試驗(yàn)期42 d。

1.4 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在大連瓦房店某雞場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)肉仔雞采用小籠養(yǎng)方式進(jìn)行飼養(yǎng)，1～21日齡，每籠飼養(yǎng)15只雞，22～42日齡時(shí)每籠飼養(yǎng)10只雞。整個(gè)試驗(yàn)期自由采食，自由飲水。飼養(yǎng)管理和免疫程序參照科寶500飼養(yǎng)管理手冊(cè)進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Basic diet composition and nutritional level

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能

每日記錄雞只采食量，分別在21日齡和42日齡早6：00，以重復(fù)為單位，對(duì)每組肉仔雞進(jìn)行空腹稱重。統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期內(nèi)各組肉仔雞的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.5.2 免疫功能

分別在21日齡和42日齡時(shí)從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取3只肉仔雞翅靜脈采血2 mL，分離血清后按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組血清中的免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG）含量，由遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系動(dòng)物疫病檢測(cè)中心進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.3 腸道菌群數(shù)量

在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取3只肉仔雞處死，無(wú)菌采集盲腸內(nèi)容物，對(duì)盲腸內(nèi)大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，菌落數(shù)用每克盲腸內(nèi)容物所含細(xì)菌菌落的對(duì)數(shù)表示（lg CFU/g），由遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系動(dòng)物疫病檢測(cè)中心進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)用Excel 2017進(jìn)行初步整理，單因素方差分采用SPSS 17.0中的ANOVA進(jìn)行，組間數(shù)據(jù)用Duncan's法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響Tab.2 Effect of compound probiotic preparations on growth performance of broilers

由表2可知，1～21日齡和22～42日齡，各組肉仔雞的平均日采食量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；1～21日齡時(shí)，Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于對(duì)照組和Ⅰ組（P＜0.05），Ⅲ組肉雞料重比顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。22～42日齡時(shí)，Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于對(duì)照組和Ⅰ組（P＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組肉雞料重比顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道菌群的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知，添加復(fù)合益生菌后，肉仔雞盲腸中大腸桿菌數(shù)量顯著減少（P＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組肉仔雞盲腸中雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組和Ⅰ組（P＜0.05）。

表3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道菌群的影響Tab.3 Effect of compound probiotic preparations on the intestinal flora of broilers 單位：lg CFU/g

2.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞免疫性能的影響（見(jiàn)表4）

由表4可知，飼料中添加復(fù)合益生菌能顯著提高21日齡肉仔雞血清中IgA水平（P＜0.05），Ⅱ組和Ⅲ組肉仔雞血清IgG水平顯著高于對(duì)照組和Ⅰ組（P＜0.05）；42日齡時(shí)，添加復(fù)合益生菌組肉仔雞血清中IgA水平和IgG水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表4 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞免疫性能的影響Tab.4 Effectof compound probiotic preparations on theimmune performance of broilers 單位：g/L

3 討論

3.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

將益生菌制劑添加到肉雞飼料中可以促進(jìn)肉雞成長(zhǎng)。張曼[5]研究表明，3種不同配比的混合益生菌制劑（包括乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌）均能顯著提高肉雞的生長(zhǎng)性能。謝文慧等[6]將由枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、釀酒酵母以及乳雙歧桿菌混合而成的益生菌制劑添加到肉仔雞飼糧中，顯著增加雞的平均日采食量和平均日增重，降低料重比。秦康樂(lè)[7]在肉雞飼糧中添加合適劑量的益生菌可顯著促進(jìn)雛雞的生長(zhǎng)，日增重提高，料重比降低。郭王勇等[8]發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼料中添加復(fù)合益生菌，可降低肉雞料肉比。張雷等[9]研究復(fù)合益生菌和低聚果糖對(duì)雛雞的影響，結(jié)果表明，復(fù)合微生態(tài)制劑能夠提高雛雞的平均體重。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加復(fù)合益生菌制劑可促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)，本試驗(yàn)條件下，1.0%添加量的復(fù)合益生菌制劑效果優(yōu)于其他試驗(yàn)組。

3.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道菌群的影響

動(dòng)物機(jī)體的健康、預(yù)防疾病離不開(kāi)穩(wěn)定的腸道微生態(tài)環(huán)境，腸道微生態(tài)環(huán)境是動(dòng)物體抵御外來(lái)致病因素的屏障，在機(jī)體的消化吸收、免疫等方面發(fā)揮著重要作用。李可等[10]研究表明，地衣芽孢桿菌、屎腸球菌和丁酸梭菌不同程度改變?nèi)怆u腸道的菌群結(jié)構(gòu)。劉鳳美等[11]研究表明，日糧中添加乳酸菌、枯草芽孢桿菌和復(fù)合菌可以改善腸道微生物區(qū)系，促進(jìn)有益菌增殖，抑制有害菌生長(zhǎng)，與單菌種相比，復(fù)合菌的使用效果更佳。張雷等[9]研究表明，復(fù)合微生態(tài)制劑能夠促進(jìn)白羽烏骨雛雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌增殖。本試驗(yàn)中，使用復(fù)合益生菌增加肉仔雞盲腸有益菌群的數(shù)量。

3.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞免疫功能的影響

IgA可以中和家禽體內(nèi)的感染因子；IgG可以激活補(bǔ)體、中和毒素[12]。益生菌或益生片在M細(xì)胞協(xié)助下穿越腸道黏膜淋巴結(jié)上皮細(xì)胞后，激活巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等產(chǎn)生細(xì)胞因子（IL-4、IL-6、IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β等），誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞表面抗原IgM轉(zhuǎn)變?yōu)镮gA，增加腸道黏膜IgA分泌細(xì)胞的數(shù)量，誘導(dǎo)IgA循環(huán)[13]。Zhang等[14]在肉仔雞飼糧中添加復(fù)合益生菌（由嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌組成）使肉仔雞血清中IgA和IgM的含量顯著提高。郭欣怡等[15]在肉雞飼糧中添加乳酸菌，丁酸菌和復(fù)合菌均可增強(qiáng)肉仔雞的免疫功能，而且復(fù)合菌優(yōu)于乳酸菌。劉淑嬌等[16]在肉雞飼糧中添加復(fù)合益生菌制劑（包括乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌）使肉雞的免疫性能顯著增強(qiáng)。本試驗(yàn)也取得類(lèi)似結(jié)果。

4 結(jié)論

飼糧中添加復(fù)合益生菌制劑可提高肉仔雞的生長(zhǎng)性能，增加盲腸有益菌群數(shù)量，改善免疫功能，其中復(fù)合益生菌的添加比例在1.0%時(shí)效果較好。