楊 娟，黃新球，曾欽薇，雷樹明

（云南省農業(yè)科學院蠶桑蜜蜂研究所，云南 蒙自 661101）

蜂蜜是重要的蜂產品之一，蜂蜜理化指標對劃分蜂蜜等級極具意義。蜂蜜屬性取決于工蜂采集植物的種類及其在蜂巢內的加工程度。蜂蜜質量等級的劃分決定了蜂蜜本身的價格及價值，因此，為了更好的明確蜂蜜屬性，本次研究中采用孢粉學及淀粉酶值活性法劃分云南六種特色蜂蜜的理化屬性。

蜂蜜孢粉學[1]是通過檢測蜂蜜樣品中花粉的種類與比例，進行科學的統(tǒng)計與分析，能夠得出主要蜜源植物與輔助蜜源植物，以確定蜂蜜是否為表稱產品。Louveaux 等人根據蜂蜜中的每一種花粉粒個數所占的百分比（P），可分為主要花粉(dominant pollen，P≥45%)，次要花粉(secondary pollen，16%≤P＜45%)，少量花粉(important minor pollen，3%≤P＜16%)和微量花粉(minor pollen，P＜3%）[2]。史琦云等[3]采用醋酸酐分解法研究了15 種蜂蜜中的花粉粒，結果表明，根據所含主要花粉形態(tài)和數量可判定是否為單種蜜或混合蜜。用花粉檢驗法可以作為生產實踐中鑒定真?zhèn)蚊鄣目茖W有效方法。

蜂蜜中酶的含量是檢驗蜂蜜質量的一個重要指標，決定了蜂蜜的成熟度、新鮮度、營養(yǎng)價值的高低[4]。蜂蜜的淀粉酶活性通常用淀粉酶值表示，呂成軍[5]采用分光光度法測定純蜂蜜和摻假蜂蜜的淀粉酶值，認為淀粉酶值是檢測蜂蜜質量好壞的一個重要指標，且淀粉酶值越高、品質越好。此外，蜂蜜的淀粉酶值也可以作為鑒別蜂蜜是否摻雜、摻假的依據，陳宜君等[6]鑒別118 件蜂蜜樣品的真假，指出摻假蜂蜜淀粉酶活性值顯著低于真蜜，且?guī)缀鯙榱恪５矸勖钢祵﹁b別蜂蜜質量具有靈敏性，易判斷。

本次研究中，我們擬采集一周年中盛花期里蜂場內的蜂蜜，以孢粉學和淀粉酶值檢測，以期反映出蜂蜜的質量，可為蜂蜜質量優(yōu)劣評價方法提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

樣品來源：蜂蜜樣品取自國家蜂產業(yè)技術體系紅河綜合試驗站示范蜂場，當蜂場周邊的苕子花、石榴花、鬼針草花、益母草花、野藿香花、野壩子花進入大流蜜期時用樣品采集吸管吸取巢脾中的蜂蜜，樣品標為1#、2#、3#、4#、5#、6#。

主要儀器：AL204 分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海） 有限公司；XYJ-A 電動離心機，常州澳華儀器有限公司；HHS-4S 恒溫水浴鍋，上海宜昌儀器紗篩廠；BM12-C 數碼生物顯微鏡，上海光學儀器廠；722S 可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司。

供試藥劑：冰乙酸，醋酸酐，濃硫酸，碘，碘化鉀，乙酸鈉，氯化鈉，可溶性淀粉等試劑均為分析純，實驗用水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。

1.2 試驗方法

1.2.1 蜂蜜孢粉學測定方法

蜂蜜樣品前處理：蜂蜜的孢粉學分析采用改良的醋酸酐分解法[7]，精確稱量蜂蜜樣品10.00 g，用20 mL 30℃的蒸餾水溶解。離心處理，3000 r/min 離心10 min，棄上清液；加入2 mL 冰乙酸，搖勻，靜置2h；再次離心，3000 r/min 離心10 min，棄上清液。加入新配制的醋酸酐-濃硫酸(9: 1)混合液1 mL，85℃下水浴8 min。取出后冷卻待檢。

蜂蜜中花粉的種類和百分比(pollen type and percent)測定：取干凈的載玻片，于載玻片中心處滴入一滴樣液，蓋上蓋玻片，先于16×4 倍視野下查找花粉粒位置，然后在16×10 倍顯微鏡下觀測，每張玻片觀察10 個視野，對照制備好的蜜源植物花粉圖片，鑒別蜂蜜中的花粉種類，同時記錄每個視野中各種花粉的個數，得出蜂蜜中花粉的種類和每種花粉所占百分比。不同的蜂蜜樣品需要做3 次平行實驗，花粉率計算見式（1）

1.2.2 淀粉酶活性測定方法

蜂蜜中淀粉酶值測定方法參照國家標準GB/T 18932.16-2003 蜂蜜淀粉酶值的測定方法進行測定[8]。將標定的淀粉溶液加到待測樣品液中，由于蜂蜜中所含的淀粉酶水解部分淀粉后剩余的淀粉與碘反應而產生藍紫色，并隨著反應的進行而逐漸消失。在660 nm 波長處以分光光度計測定其達到特定吸光度所需要的時間，以此換算出1 g 蜂蜜在1 h 內水解1%淀粉的毫升數，不同的蜂蜜樣品需要做3 次平行實驗。

1.3 數據處理：

數據以Excel 收集，進行簡單處理后，采用SPSS19.0 軟件，進行方差分析。

2 結果與分析

圖1 蜂蜜樣品種所含花粉的種類數量

通過鏡檢，供試蜂場蜂蜜中的花粉種類結果見圖1，6 個蜂蜜樣品中石榴蜜和野藿香蜜中所含花粉種類最少的為3 種，最多的為益母草蜜和野壩子蜜，為6 種，種類間存在差異（P＜0.01）。進一步的從上圖可以看出，石榴及野藿香盛花期間，其他輔助的蜜粉源植物較少，與之相對的野壩子、益母草、苕子等花盛開時輔助的蜜粉源植物也在同一時期開花，從而增加了蜂蜜中其他植物的花粉孢子。

2.2 蜂蜜中主要花粉的花粉率

表1 6 種蜂蜜中主要花粉的花粉率

6 種已知對應蜜源植物的蜂蜜樣品中主要花粉的花粉率含量均大于45%，見表1，根據Louveaux 認為某種蜂蜜中主要花粉率大于45%即可認定為某個品種的單花種蜂蜜，由此可鑒定苕子花蜂蜜、石榴花蜂蜜、鬼針草蜂蜜、益母草蜂蜜、野藿香蜂蜜、野壩子蜂蜜為對應蜜源期花種蜂蜜，即表稱產品。

2.3 蜂蜜中淀粉酶活性

表2 6 種蜂蜜的淀粉酶值

6 種蜂蜜中淀粉酶值結果見表2。1～>6 號蜂蜜樣品均具有淀粉酶活性，淀粉酶值差異顯著，鬼針草蜂蜜最高，為34.8 mL/(g.h)、苕子花蜂蜜、益母草蜂蜜的淀粉酶值相對較高，野壩子蜂蜜的淀粉酶值最低，為9.06 mL/(g.h)，差異顯著（P＜0.01）。吸光度達到0.235 時相對應的時間越短，說明蜂蜜中的淀粉酶水解淀粉的時間越快，同時也說明蜂蜜中的淀粉酶活性越強。因此，鬼針草蜂蜜、苕子花蜂蜜、益母草蜂蜜的淀粉酶活性最強，野壩子蜂蜜的淀粉酶活性最弱。

3 結論與討論

蜂蜜的理化屬性取決于蜜粉源的種類及地理環(huán)境的相互作用。蜂蜜孢粉學是確定蜂蜜物理屬性的重要指標，可以確定蜂蜜的品種、質量及蜜源地的植物種類、開花季節(jié)等信息，同時也在蜂蜜產品的摻假檢驗中逐漸受到重視[9]。在本次研究中，我們以蜂蜜孢粉學檢測手段確認了草壩鎮(zhèn)的六種蜂蜜中花粉孢子的種類（圖1），發(fā)現不同花期中蜂蜜所含的花粉孢子種類不一樣，明確了不同花期中顯花的植物種類。

蜂蜜孢粉學方法可以有效鑒別蜂蜜是否為表稱產品，以確定某一地區(qū)中蜜粉源植物的豐富程度。陳順安[10]（2011） 研究云南武定野壩子蜂蜜孢粉學分析，明確了當地野壩子蜂蜜純度較高。桑麗琴[11]等（2021） 以電鏡掃描中蜂蜜花粉孢子的結構，探索了秦嶺中華蜜蜂的蜜源木本植物種類。在本文研究的6 種蜂蜜樣品中，1～>6 種蜂蜜均采自不同的蜜源植物，對其進行主要花粉率檢測，其值均大于45%（表1），可以判定其為某個品種的單花種蜂蜜，與根據采集的蜜源植物名稱對其命名相符。在光鏡下各種孢粉具有比較鮮明的區(qū)分特征，所有蜂蜜中除含有本種花粉外，還含有比例不等的其他多種孢粉(雜質孢粉)，不同蜂蜜含有的雜質花粉的比例也不相同。孢粉的特征和比例可以作為判定蜂產品品質的輔助依據，但部分蜂蜜在判斷產地方面比較困難[12]。

淀粉酶是蜂蜜中較為重要的一種酶，蜂蜜中酶值的高低在鑒定蜂蜜的品質[13]、成熟與否[14]、東西方蜜蜂[15]、大蜜蜂與黑色大蜜蜂[16]、黑小蜜蜂蜜種[17]分辨中均有較好的運用。從表2 可知，鬼針草蜂蜜的淀粉酶值為34.8 mL/(g.h)，顯著高于野壩子（9.06 mL/(g.h)） 蜂蜜，可為進一步開發(fā)鬼針草類蜂蜜奠定基礎。