白延波

（河北省邢臺市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 邢臺 054001）

金黃色葡萄球菌的大多數(shù)菌株都會產(chǎn)生血漿凝固酶，所以在其他疾病以及應(yīng)激因子的嚴(yán)重影響下，很容易引起免疫抑制，并打破宿主與病原之間的平衡狀態(tài)，降低宿主自身的抵抗能力，該菌可直接進(jìn)入血液，引發(fā)關(guān)節(jié)、滑液囊等機(jī)體組織的炎癥。

1 材料

（1）采樣隨機(jī)采取一定數(shù)量的飼料廠仔豬顆粒飼料，并將其放置在密封袋中進(jìn)行備用。（2）培養(yǎng)基以及試劑制備。準(zhǔn)備7.5%的氯化鈉肉湯、鮮血瓊脂平板、7.5%氯化鈉甘露醇瓊脂平板、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、M.R、V-P、H2S、枸櫞酸鹽、硝酸鹽、尿素、三糖鐵以及吲哚等生化類培養(yǎng)基和滅菌性生理鹽水，并以實驗室自制的方法，為過氧化氫酶以及血漿凝固酶等實驗提供充足的試劑保障。采集免疫臟血還需要采取健康兔子的心臟血漿，并通過分離處理，再將其放置于4℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行儲存。

2 方法

2.1 稀釋樣品

稱取不同的樣品各25g，并加入到225mL的滅菌生理鹽水中，并通過越夜浸泡，制成比例為1:10的樣品菌液。無菌吸取5mL的樣品菌液，接種于7.5%的氯化鈉肉湯中，再將其放置于37℃培養(yǎng)18～24h。

2.2 細(xì)菌分離純化分別提取增菌液2環(huán)，無菌接種到鮮血瓊脂平板中，于37℃培養(yǎng)24h后，再提取1/3的疑似菌落涂片，進(jìn)而通過染色鏡檢實驗，實現(xiàn)對細(xì)菌的純化處理。另外，提取相應(yīng)的純培養(yǎng)物質(zhì)，并接種到生化培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)48h。提取部分菌落并放置于載玻片中，再將3%的過氧化氫滴到載玻片上，觀察過氧化鈉酶的實驗結(jié)果。色素實驗需要將少許的菌落接種到氯化鈉甘露醇瓊脂平板上，并在37℃培養(yǎng)18～24h。

2.3 細(xì)菌培養(yǎng)將新鮮的兔血通過滅菌處理之后，用生理鹽水稀釋成1:1后，將其分別裝入0.5mL的小型試管中，并使用滅菌性生理鹽水清洗并制作菌懸液，再將其加入到上述試管中，放置在37℃環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，同時還需要觀察24h。

3 檢測的結(jié)果

3.1 涂片染色鏡檢

提取培養(yǎng)基的疑似菌落涂片，革蘭氏染色后鏡檢，可見到葡萄串狀的G+球菌物質(zhì)，呈圓形或橢圓形，沒有鞭毛，也尤芽孢和莢膜。

3.2 培養(yǎng)特性

若7.5%的氯化鈉肉湯中，出現(xiàn)均勻且渾濁的現(xiàn)象，且不存在菌膜等物質(zhì)，同時管內(nèi)有少量的白色沉淀物質(zhì)，可以判定此為金黃色葡萄球活菌的培養(yǎng)特性。在鮮血瓊脂平板上形成圓形及光滑凸起的菌落，具有邊緣整齊及濕潤等特點(diǎn)，初期呈白色態(tài)，且隨著時間的推移逐漸變成了金黃色，而菌落物質(zhì)的周圍還具有明顯的β-溶血物質(zhì)的存在。

3.3 過氧化鈉、色素以及血漿凝固酶實驗

將3%的過氧化氫與細(xì)菌物質(zhì)進(jìn)行充分融合之后，若產(chǎn)生氣泡現(xiàn)象，則可以判定過氧化氫酶實驗呈陽性。在色素實驗的過程中，分離菌可以在7.5%的氯化鈉甘露醇瓊脂平板中形成橘黃色的菌落，并呈現(xiàn)出隆起的狀態(tài)。在血漿凝固酶實驗的過程中，可以判定血漿凝固酶呈現(xiàn)陽性。

4 結(jié)語

金黃色葡萄球菌是常見的化膿菌之一，并且還可以產(chǎn)生腸毒素等物質(zhì)，該菌存在于飼料中會危害動物的生命。一般來說，金黃色葡萄球菌可以通過飼料原料加工、人員攜帶、包裝密封以及運(yùn)輸過程等途徑進(jìn)行傳播，為了杜絕并降低該菌的污染程度，飼料加工人員需要保持加工場地的衛(wèi)生情況，并加強(qiáng)對生產(chǎn)環(huán)節(jié)的管理，確保飼料產(chǎn)品符合生產(chǎn)要求。