李 珂，嚴(yán)紅亞，覃袖偉，常志順，王天葆，2，信愛(ài)國(guó)，趙 蓉

（1.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院養(yǎng)禽與禽病研究所，云南昆明 650224；2.廣南縣舊莫鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南廣南 663302）

禽白血病病毒（avian leucosis virus，ALV）、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病毒（avian retic uloendotheliosis virus，REV）和雞傳染性貧血病毒（chicken infectious anemia virus，CAV）是雞群中常見(jiàn)的免疫抑制性病原，可以感染多種禽類，造成免疫系統(tǒng)損傷和嚴(yán)重的免疫抑制，導(dǎo)致感染禽群生產(chǎn)性能降低或死亡[1-2]；禽腦脊髓炎病毒（avian encephalomyelitis virus，AEV）主要侵害家禽中樞神經(jīng)并引起非化膿性腦脊髓炎，導(dǎo)致感染禽群生產(chǎn)性能下降。這4 種病毒均可垂直傳播，且極易與其他病原和寄生蟲(chóng)發(fā)生混合或繼發(fā)感染，給養(yǎng)雞業(yè)特別是種雞飼養(yǎng)業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。我國(guó)寧夏、湖北、廣東、山東、吉林、重慶、浙江等多個(gè)省區(qū)市先后報(bào)道了ALV、REV、CAV 單獨(dú)或混合感染情況，其流行日趨嚴(yán)重[1-4]。云南省具有豐富的家禽遺傳資源，優(yōu)質(zhì)地方雞品種較多。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，云南省茶花雞群中存在ALV 感染[5]，昆明市地方雞群中存在REV 感染[6]。為了解云南省地方雞群這4 種病原的流行情況，2019 年對(duì)云南省5個(gè)區(qū)域的8 個(gè)品種地方雞群，采集血清樣品進(jìn)行了ALV、REV、CAV 和AEV 血清學(xué)檢測(cè)，以期為這4 種病毒病預(yù)防提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)樣品 2019 年從滇東（昭通、文山）、滇西（大理）、滇中（楚雄）、滇南（紅河綠春）和滇北（麗江、迪慶）5 個(gè)區(qū)域，選取8 個(gè)各區(qū)域主要地方品種（南澗烏骨雞、尼西雞、云龍矮腳雞、綠春黃連雞、寧蒗高原雞、武定雞、文山土雞、鹽津?yàn)豕请u）種雞場(chǎng)，翅靜脈采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。采樣雞群未進(jìn)行ALV、REV、CAV 和AEV 免疫，且未見(jiàn)這4 種病原感染的明顯發(fā)病癥狀。采樣時(shí)，參考多省區(qū)市檢測(cè)結(jié)果，采用估計(jì)流行率抽樣法，設(shè)置信水平95%、可接受誤差10%、預(yù)期流行率50%，對(duì)照統(tǒng)計(jì)學(xué)中大群體估計(jì)患病率樣品抽樣表（Cannon 和Roe 二氏，1982），確定最少抽樣樣品數(shù)為96 份。綜合考慮不同品種雞場(chǎng)存欄規(guī)模，在各品種雞場(chǎng)采取隨機(jī)抽樣方式，共無(wú)菌采集2 295 份血清樣品，其中南澗烏骨雞610 份、尼西雞300 份、云龍矮腳雞300 份、綠春黃連雞260 份、寧蒗高原雞105份、武定雞300份、文山土雞130份、鹽津?yàn)蹼u290 份。

1.1.2 診斷試劑 ALV-J 亞群抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX 公司；REV、CAV 和AEV 抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自荷蘭BioChek 公司。

1.2 方法

1.2.1 抗體檢測(cè) 無(wú)菌采血，離心分離血清，按照ALV-J 亞群、REV、CAV 和AEV 的ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行抗體檢測(cè)和結(jié)果判定。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 將檢測(cè)結(jié)果錄入Excel，按品種、區(qū)域和混合感染類別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和描述，分析不同區(qū)域、不同品種雞群ALV、REV、CAV 和AEV 的感染情況及混合感染種類。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種

8 個(gè)地方品種雞群的血清抗體檢測(cè)結(jié)果（表1）顯示：ALV、REV、CAV 和AEV 平均抗體陽(yáng)性率分別為27.02%、72.77%、98.47% 和76.25%。不同品種雞群中，4 種病原的陽(yáng)性率存在一定差異：ALV 陽(yáng)性率，云龍矮腳雞最高（50.00%），綠春黃連雞最低（0）；REV 陽(yáng)性率，云龍矮腳雞和寧蒗高原雞最高（均為100%），文山土雞最低（42.31%）；CAV 陽(yáng)性率，8 個(gè)品種介于96.67%～100%；AEV 陽(yáng)性率，綠春黃連雞較低（28.85%），其余介于73.33%～95.24%。

2.2 不同區(qū)域

滇東、滇西、滇中、滇南和滇北5 個(gè)區(qū)域的結(jié)果對(duì)比（表2）顯示：ALV 陽(yáng)性率，滇南最低（0），滇中最高（38.33%）；REV 陽(yáng)性率，滇北（65.43%）、滇西（65.93%）較低，而滇南（86.54%）、滇中（91.67%）較高；CAV 陽(yáng)性率，各區(qū)域均較高，介于95.00%～100%；AEV 陽(yáng)性率，滇南最低（28.85%），其他地區(qū)都在75%以上，其中滇東最高（90.48%）。

表1 云南省8 個(gè)地方品種雞雞群ALV、REV、CAV、AEV 抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 云南省不同區(qū)域ALV、REV、CAV、AEV 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 混合感染

2.3.1 不同混合感染類型 4 種病毒的混合感染檢測(cè)結(jié)果（表3～4）顯示：8 個(gè)地方品種雞群存在多種混合感染類型，其中二重感染（CAV+REV、CAV+AEV）、三重感染（CAV+REV+AEV）和四重感染（CAV+REV+AEV+ALV）的平均陽(yáng)性率分別為32.90%、36.38%、15.90%。

2.3.2 不同區(qū)域混合感染 統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5）顯示：5 個(gè)區(qū)域普遍存在不同程度的混合感染，但各區(qū)域之間存在一定差異，其中滇東和滇中以三重感染為主，伴有二重和四重感染；滇西和滇北以二重和三重感染為主，伴有四重感染；滇南以二重感染為主，伴有三重感染。

表3 血清樣品中ALV、REV、CAV、AEV 單一感染和混合感染的檢測(cè)結(jié)果（n=2 295）

表4 云南省8 個(gè)地方品種雞ALV、REV、CAV、AEV 混合感染檢測(cè)結(jié)果

表5 云南省不同區(qū)域ALV、REV、CAV、AEV 混合感染檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本研究對(duì)2019 年采自云南省5 個(gè)區(qū)域8 個(gè)品種地方雞的2 295 份血清樣品，應(yīng)用商品化ELISA 試劑盒進(jìn)行了ALV、REV、CAV、AEV 血清抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)云南省地方雞雞群中ALV、REV、CAV、AEV 的抗體檢出率均較高，平均檢出率分別為27.02%、72.77%、98.47%、76.25%，且多以不同病毒組合的混合感染形式存在，尤以REV+CAV+AEV 混合感染率最高（28.32%）。不同區(qū)域、不同品種地方雞群中，除綠春黃連雞及其所屬的滇東地區(qū)未檢出ALV 感染外，其余品種和區(qū)域內(nèi)4 種病毒均有檢出，且均表現(xiàn)不同程度的混合感染，僅滇東地區(qū)未見(jiàn)四重感染。近年來(lái)，顏赟等[7]對(duì)商品肉雞群免疫抑制性病毒檢測(cè)的多重感染率為85.96%，鮑偉華等[3]對(duì)寧波市部分雞場(chǎng)免疫抑制性疫病混合感染的檢出率為80.0%。雞群中AEV 感染情況也不容樂(lè)觀，蛋雞的AEV 感染率達(dá)到了62%，放養(yǎng)雞群更是高達(dá)78%[8-10]。但未見(jiàn)關(guān)于4 種病毒多重感染的報(bào)道。本調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省地方品種雞群中，4 種病毒的多重感染率高達(dá)99.78%，說(shuō)明4 種病毒共感染現(xiàn)象在云南省地方品種雞群中非常嚴(yán)重，需要引起高度重視。

ALV、REV、CAV、AEV 多以隱性感染形式存在于臨床健康雞群中。當(dāng)雞群因各種應(yīng)激因素導(dǎo)致抵抗力降低時(shí)，這些病毒就會(huì)大量復(fù)制，從而引起雞群發(fā)病和死亡，并可垂直傳播給下一代，導(dǎo)致上述病原難以根除。外來(lái)品種帶入、自然感染和部分禽用疫苗制品質(zhì)量不達(dá)標(biāo)，可能是導(dǎo)致這些病原在雞群中廣泛存在的重要原因。云南省地處我國(guó)西南邊陲，動(dòng)植物資源豐富，擁有數(shù)量龐大的家禽品種資源，但由于交通相對(duì)不便、飼養(yǎng)管理水平相對(duì)落后等原因，多數(shù)家禽品種未能得到很好的開(kāi)發(fā)利用，仍然處于原代狀態(tài)。種雞場(chǎng)的種雞多從農(nóng)戶收購(gòu)，而農(nóng)戶以放養(yǎng)和散養(yǎng)為主，其飼養(yǎng)的雞與野生感染禽類或外來(lái)品種病禽接觸的概率較高，背景相對(duì)復(fù)雜。由于上述病毒多呈隱形感染狀態(tài)，容易被忽視或難以發(fā)現(xiàn)，因而增加了病原傳播的可能。

目前國(guó)家對(duì)生產(chǎn)疫苗的SPF 雞群檢測(cè)管理仍不完善，雞群衛(wèi)生狀況令人擔(dān)憂。雞群注射了被病毒污染的疫苗，也可導(dǎo)致病毒抗體陽(yáng)性[3]。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道[11-12]，我國(guó)在部分批次的禽用疫苗中檢出了一種或多種免疫抑制性病毒陽(yáng)性。本調(diào)查目的是了解云南省地方雞群中ALV、REV、CAV、AEV的感染情況，采集的血清樣品分別來(lái)源于8 個(gè)地方品種的種雞場(chǎng)，未進(jìn)行4 種病毒的免疫接種，因此檢測(cè)出病毒抗體陽(yáng)性即表明存在病毒感染，至于是自然感染，還是疫苗污染感染，仍需通過(guò)病原學(xué)方法進(jìn)行深入探究。

4 種病毒中，ALV、REV、CAV 均可引起免疫抑制。國(guó)內(nèi)一些專家學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，多種免疫抑制性疾病病原的混合感染，具有協(xié)同或促進(jìn)作用，增強(qiáng)了病毒對(duì)雞體免疫系統(tǒng)的破壞作用，可造成嚴(yán)重的免疫抑制，使機(jī)體內(nèi)免疫應(yīng)答降低，進(jìn)而影響其他疫苗免疫抗體的產(chǎn)生，且混合感染抗體陽(yáng)性率越高，其疫苗免疫抗體水平越低，導(dǎo)致免疫失敗的概率越高[13-15]。即使采取強(qiáng)化免疫，仍有部分個(gè)體處于不完全免疫狀態(tài)[16]，這極大增加了禽病發(fā)生概率和治療難度，特別是給禽流感、新城疫等重大動(dòng)物疫病的免疫防控帶來(lái)了巨大壓力，存在因免疫失敗而引起疫病流行的風(fēng)險(xiǎn)。故開(kāi)展地方品種種雞場(chǎng)特別是祖代種雞場(chǎng)的免疫抑制性疫病及AEV 的檢測(cè)，及時(shí)淘汰陽(yáng)性雞群，建立無(wú)病毒的核心群，阻斷垂直傳播，定期對(duì)使用疫苗進(jìn)行病毒檢測(cè)，避免使用病毒污染疫苗，同時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高雞群免疫力和雞場(chǎng)生物安全管理能力，是控制上述病毒流行的有效措施，并可降低疫病特別是重大疫病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié)論

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，云南省地方品種雞群的ALV、REV、CAV、AEV 感染較嚴(yán)重，感染十分普遍，且多以不同組合的混合感染形式存在，雖有一定的地區(qū)和品種分布差異，但無(wú)明顯規(guī)律性。建議加強(qiáng)地方品種雞群中4 種垂直傳播病毒的檢測(cè)，及時(shí)淘汰陽(yáng)性雞群，逐漸凈化種群，同時(shí)定期進(jìn)行疫苗污染監(jiān)測(cè)，提升飼養(yǎng)管理水平，保障云南地方雞種質(zhì)資源的安全健康發(fā)展。