王亞東 史韻華 黃雯茹

(佛山市糧食集團有限公司南海儲備分公司 528222)

稻谷中脂肪酸值含量在稻谷儲存品質(zhì)判定中占有重要地位，是衡量稻谷劣變過程的主要判定指標(biāo)，對于稻谷在儲藏過程中儲存品質(zhì)的變化情況以及儲備糧輪換決策、適時推陳儲新、減少糧食損失都有著重要意義[1,2]。稻谷在儲藏過程中，稻谷籽粒中的脂肪酸，特別是不飽和脂肪酸，受到環(huán)境因素的影響易發(fā)生氧化及水解反應(yīng)，尤其在水分含量和溫度較高的情況下，脂肪更容易水解，使游離脂肪酸含量顯著增加[3]，進而反映出稻谷品質(zhì)的變化情況，稻谷中的脂肪酸值測定的便是其游離脂肪酸的含量。

目前稻谷脂肪酸值測定的主要依據(jù)是國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 20569-2006中附錄A，采用的是手工滴定、肉眼觀察終點的方式。但是由于國標(biāo)方法的局限性，使得滴定終點顏色變化不明顯，滴定終點突變不明顯，加上操作人員的個體差異,導(dǎo)致不同操作者、不同實驗室對同一樣品的檢測結(jié)果往往也會有差異，給脂肪酸值測定帶來了很大困擾[4,5]。為了消除脂肪酸值測定與操作者操作經(jīng)驗的差異，使測定結(jié)果盡最大可能不受操作者的影響，近些年糧油檢驗相關(guān)儀器生產(chǎn)廠家也一直在致力于脂肪酸值測定儀器化、自動化，力爭采用儀器代替人工滴定進行滴定分析及終點判斷，盡量減少人為誤差，提高測定結(jié)果的公正性、準(zhǔn)確性[4]。

本文對TRI-Ⅲ-ZF型全自動脂肪酸值滴定儀進行方法驗證測試，對該儀器測定稻谷脂肪酸值方法的準(zhǔn)確度進行評價。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 原料與試劑 試驗用稻谷樣品均為早秈稻。主要試劑有95%乙醇(AR)，無水乙醇(AR)，氫氧化鉀(AR)，鄰苯二甲酸氫鉀(GR)，酚酞，百里香酚藍。

1.1.2 儀器設(shè)備 全自動脂肪酸值滴定儀(TRI-Ⅲ-ZF)，實驗礱谷機(THU35C)，錘式旋風(fēng)磨(3100)，精密鼓風(fēng)干燥箱(BPG-9240A)，0.001電子天平(ML203T/02)，谷物脂肪酸值專用振蕩器(JZDZ-Ⅰ)，超純水儀(Milli-Q)。

1.2 試驗方法

1.2.1 稻谷樣品分布 隨機測定了61份稻谷樣品的脂肪酸值，脂肪酸值涵蓋范圍(11.0～56.4)(KOH/干基)/(mg/100g)，其中(15.0～30.0)(KOH/干基)/(mg/100g)范圍的樣品31個，也是糧食儲備庫常用到的脂肪酸值范圍。研究不同脂肪酸值范圍內(nèi)檢測方法測定結(jié)果的差異，客觀評價全自動脂肪酸值滴定儀測定稻谷脂肪酸值的準(zhǔn)確度，脂肪酸值測定結(jié)果見表1。以國標(biāo)法測定結(jié)果為準(zhǔn)，稻谷樣品脂肪酸值范圍分布如圖1。

1.2.2 樣品前處理方法 同GB/T 20569-2006附錄A。

1.2.3 國標(biāo)法測定方法 同GB/T 20569-2006附錄A。

1.2.4 儀器法測定方法 儀器法采用全自動光度滴定法，原理是用無水乙醇提取試樣中的游離脂肪酸，以百里香酚藍為指示劑，用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定中和樣品溶液中的游離脂肪酸，隨著溶液顏色的變化，光學(xué)傳感器檢測到透過滴定體系溶液的光能量變化，當(dāng)達到滴定終點時滴定儀自動停止滴定，通過滴定終點消耗的標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積計算脂肪酸值。

滴定時，需要先做空白實驗，然后把稱量好的樣品放置于儀器攪拌裝置內(nèi)，空的石英滴定杯放置于滴定架上，點擊開始，儀器即可自動轉(zhuǎn)移25.0 mL濾液于100 mL滴定杯中，自動加入25.0 mL 百里香酚藍指示劑，并自動完成攪拌滴定過程，到達終點滴定儀自動停止，并記錄耗用的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液體積，自動扣除空白消耗，完成脂肪酸值結(jié)果的計算。

1.2.5 試劑配制方法 百里香酚藍指示液：0.02 g/L，稱取0.02 g百里香酚藍(精確至0.0001 g)，先用少量95%乙醇溶解，再定容至1000 mL，混勻，貯于試劑瓶中密閉放置24 h后備用。

酚酞指示劑：1.0 g/100 mL，稱取1.0 g酚酞溶于100 mL 95%乙醇中。

氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：0.01 mol/L，用0.5 mol/L的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備及稀釋方法同GB/T 20569-2006[6-8]。

2 結(jié)果與分析

采用全自動脂肪酸值測定儀和GB 20569-2006附錄A同時測定稻谷樣品脂肪酸值，共測定了61份樣品，判定全自動脂肪酸值測定儀的測定結(jié)果與國家標(biāo)準(zhǔn)方法測定結(jié)果之間是否存在顯著性差異。

2.1 脂肪酸值測定結(jié)果

儀器法與國標(biāo)法測定結(jié)果相比，方法差從0～2.0(KOH/干基)/(mg/100g)，其中，方法差小于1.0(KOH/干基)/(mg/100g)的樣品40份，占比65.6%，符合GB20569-2006中同一分析者對同一試樣同時進行兩次測定，脂肪酸值結(jié)果的差值應(yīng)不超過2(KOH/干基)/(mg/100g)的重復(fù)性要求。

2.2 F檢驗

采用F檢驗，考察現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)方法與待驗證設(shè)備方法所取得的兩組數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差是否一致，即方差齊性檢驗，若一致，按2.3執(zhí)行；若不一致，待驗證方法不予通過。

統(tǒng)計數(shù)據(jù)如下：

F=s12/s22=0.9531；

顯著性水平α=0.05情況下，查GB/T4889-2008表A.5.3得到：

F1-α/2(v1,v2)=F0.975(60,60)=1.67；

Fα/2(v1,v2)=1/F1-α/2(v1,v2)=1/F0.975(60,60)=0.5988；

判斷由于0.5988

表2 方差分析

2.3 配對T檢驗

在現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)方法與待驗證設(shè)備方法所取得的兩組數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差一致的情況下，采用配對T檢驗，考察現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)方法與待驗證設(shè)備方法所取得的兩組數(shù)據(jù)的平均值是否存在顯著性差異，若不存在顯著性差異，則待驗證設(shè)備方法予以通過；若存在顯著性差異，則待驗證設(shè)備方法不予通過。

3 結(jié)論

通過本次實驗數(shù)據(jù)分析，可以看出：

3.1 該全自動脂肪酸值滴定儀測定稻谷脂肪酸值與現(xiàn)行國標(biāo)檢測方法測定結(jié)果不存在顯著性差異，差值符合重復(fù)性要求，準(zhǔn)確度符合國家標(biāo)準(zhǔn)方法要求，能夠滿足稻谷脂肪酸值測定要求。

3.2 該儀器法實現(xiàn)了稻谷脂肪酸值檢測過程的自動化，可以同時多樣品自動振蕩、自動提取、自動轉(zhuǎn)移、自動過濾、自動收集、自動分液、自動添加指示劑、自動滴定、自動清洗，從前處理到滴定分析一鍵執(zhí)行，中間無需人工參與，降低了人為因素的干擾，減少了檢驗人員的工作量和勞動強度，顯著提高了檢測的效率。