劉 迎，史萬玉

（1.河北交通職業(yè)技術學院 050091；2.河北農業(yè)大學中獸醫(yī)學院 071001）

黃芪是多年生草本植物，具有補脾氣，固表止汗，利尿消腫，脫毒生肌等功效。 淫羊藿能補腎壯陽，祛風除濕。 治陽痿不舉，小便淋瀝，筋骨攣急，半身不遂，腰膝無力，風濕痹痛，四肢不仁。

藿芪散由中藥淫羊藿和黃芪按照一定比例配伍而成，本試驗通過研究 “藿芪散” 對小鼠外周血T 淋巴細胞亞群 （CD4+/CD8+）比例的影響情況，來探討該復方對動物機體細胞免疫功能的調節(jié)作用， 同時比較分析超微粉制劑相較于中藥傳統(tǒng)制劑的優(yōu)勢， 為隨后開發(fā)藿芪散超微粉成為飼料添加劑提供了科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥“藿芪散”

試驗用淫羊藿和蒙古黃芪均購自河北安國藥材市場。 中藥“藿芪散”由淫羊藿和黃芪按一定比例組方后，用普通粉碎機粉碎，過24 目篩即得到普通粗粉；再將普通粗粉用進行超微粉碎，過300 目篩即為微粉。

藿芪散微粉與粗粉與分別用藥鍋武火熬制沸騰，再用文火水煎煮30min，經8 層紗布過濾，重復上述煎藥過程一次，合并兩次中藥煎液，濃縮至每毫升相當于原生藥1g，置4°冰箱備用。

1.1.2 試驗動物

昆明雌性小鼠49 只，體重22～25g，購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心。

1.1.3 主要試劑及藥品

小鼠CD4-FITC、CD8-PE 單克隆抗體：為Pharmingen 產品

1.1.4 主要儀器設備

BFM-6 貝利微粉機 濟南倍力粉技術有限公司

Epics-XL II 型流式細胞儀 Beckman coulter 公司

1.2 分組與給藥

49 只雌性昆明小鼠，隨機等分為7 組，即生理鹽水對照組(NS 組)、粗粉低劑量組（CL 組）、粗粉中劑量組（CM 組）、粗粉高劑量組（CH 組）、微粉低劑量組（WL 組）、微粉中劑量組（WM 組）、微粉高劑量組（WH 組）。生理鹽水對照組小鼠經胃灌服生理鹽水0.4mL 只/天，低、中、高劑量組每只小鼠每天分別經胃灌服1:1 的“藿芪散”粗粉、微粉煎液0.2mL、0.4mL 和0.6mL/只/天，共灌藥6d。

1.3 CD4+/CD8+的測定

于給藥6d 后的24h，摘除小鼠眼球采血，用肝素抗凝(50U/mL )， 每管0.1mL， 分為2 管， 分別加入小鼠CD4-FITC 單抗和CD8-PE 單抗，充分混合，室溫下避光孵育45min，用細胞洗液洗滌2 次，1 000rpm， 2min， 棄上清液， 加稀釋的熒光標記抗體0.1mL，室溫下避光孵育45min，洗1 次，棄上清液，余約0.5mL 細胞懸液，加固定液50μL.以上操作在室溫下進行，標本以臺盼藍染色，死細胞＜5%。 在EPICS-XLII 型流式細胞儀上測定，用Expo32ADC 進行免疫熒光數據分析。

1.4 數據處理

試驗數據用SPSS 20.0 軟件包進行處理， 并進行統(tǒng)計學分析。

2 結果

2.1“藿芪散”對小鼠CD4+/CD8+的影響

表1 “藿芪散”對小鼠CD4+/CD8+的影響

表1 結果表明，“藿芪散” 粗粉和微粉的各個劑量均不同程度的提高小鼠外周血T 淋巴細胞亞群CD4+/CD8+的比例， 其中超微粉低劑量組和粗粉中劑量組均顯著升高了小鼠外周血T 淋巴細胞亞群CD4+/CD8+的比例(P＜0.01，或P＜0.05 )。原因可能是中藥經超微處理后，比表面積增大，粒度更加細微均勻，藥物與胃粘膜的接觸面積增大；同時細胞破壁率高，有效成分溶出率加大，從而被小鼠更好的吸收利用，而微粉的中、高劑量可能又超過了合適劑量。 相對于超微粉中藥，粗粉中藥的粒度較大，有效成分溶出較低，所以微粉低劑量便達到了粗粉中高劑量的效果。

3 討論

機體免疫的重要途徑之一是細胞免疫，尤其是依賴T 淋巴細胞亞群的相互協(xié)作和相互制約，其中CD4+、CD8+T 細胞的免疫調節(jié)作用尤為至關重要。 正常動物體內CD4+，CD8+淋巴細胞存在一定比例，使機體免疫功能處于平衡穩(wěn)定的狀態(tài)。 從中獸醫(yī)角度理解，即為“陰平陽秘，精神乃治”。 一旦這種平衡被打亂，則導致T 淋巴細胞亞群比例失衡。 若CD4+/CD8+比例升高，說明正相免疫調節(jié)占優(yōu)勢，機體處于高的免疫狀態(tài)；CD4+/CD8+比例下降，說明負相免疫調節(jié)占優(yōu)勢，可導致機體免疫狀態(tài)失衡，產生免疫功能紊亂，可能導致免疫疾病發(fā)生[1]。

已有研究結果表明， 淫羊藿和黃芪作為飼料添加劑混入畜禽飼料中，可提高動物免疫力和生產性能，促進生長發(fā)育等方面的作用。

范領斌[2]在雛雞的飲水中連續(xù)42d 分別加入不同劑量的淫羊藿水煎液(0.5、1.0、1.5、0g/kg·d)，測雞的增重、料肉比和免疫器官指數。 結果表明，淫羊藿可使雞的體重增加，料肉比降低和免疫指數升高。 張運強[3]等在基礎日糧上按日糧重量比例添加制備的黃芪與淫羊藿多糖硫酸酯， 研究表明該中藥混合物可以在不影響小鼠體質量的同時在一定程度上調節(jié)小鼠的免疫指標和提升血清的總抗氧化水平。 王小玲[4]等研究表明，淫羊藿苷能有效促進股骨骨折大鼠骨折愈合，且藥物濃度越高作用越好。 劉國林[5]等研究表明，圍產期奶牛日糧中添加100g/(頭·d)黃芪(1∶1)時能提高奶牛的免疫力。 王憲舉[6]等研究表明，在日糧中添加黃芪粉可以提高藏羊生產性能并改善羊肉品質。 安勝英[7]等研究表明，在基礎日糧中添加0.1%黃芪提取物，能明顯提高蛋雞產蛋率，降低畸形蛋數、料蛋比。

現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，黃芪含豐富的黃芪多糖、氨基酸、甙類、氨基酸等多種有效成分，可活化機體免疫系統(tǒng)，增強機體免疫功能。 淫羊藿含黃酮類化合物、木脂素、生物堿、揮發(fā)油等成分，能促進造血功能和免疫功能，具有抗衰老、抗腫瘤等功效。

本試驗結果中藿芪散可顯著提高小鼠外周血T 淋巴細胞亞群CD4+/CD8+的比例，這可能與方劑中富含上述成分有關。

綜上所述，藿芪散能顯著提高小鼠外周血CD4+/CD8+T 淋巴細胞亞群的比例， 微粉低劑量即可達到與粗粉中高劑量相當的效果。 本試驗為藿芪散超微粉成為飼料添加劑方面提供了科學的參考依據。