段進(jìn)剛 ，陳建豪，張國新，楊 帆，楊夷平，張志新，馬春江

(新疆哈密市動物疫病預(yù)防控制中心，新疆 哈密 839000)

棘球蚴病(Echinococcosis)也叫包蟲病(Hydatidosis)，是棘球絳蟲的幼蟲寄生于牛、羊、豬及人等多種哺乳動物內(nèi)臟器官的一種重要的人獸共患寄生蟲病，是世界上重要的公共衛(wèi)生問題之一[1]。棘球絳蟲的幼蟲主要寄生于肝臟，其次是肺臟，成蟲寄生于犬科動物的小腸中，綿羊?qū)?xì)粒棘球蚴較敏感，病死率較高，嚴(yán)重感染者表現(xiàn)為消瘦、被毛逆立、脫毛、咳嗽，倒地不起[2]；牛嚴(yán)重感染棘球蚴時，表現(xiàn)為消瘦，衰弱，呼吸困難或輕度咳嗽，產(chǎn)奶量下降[3]；各種動物都可因包囊破裂導(dǎo)致嚴(yán)重的過敏反應(yīng)而引起突然死亡[4]。包蟲病分布于世界各地，全世界每年有成千上萬的人因患包蟲病而喪失勞動力和生命。在我國，包蟲病主要流行于西北、華北及東北廣大的牧區(qū)，其中以新疆、青海、西藏、甘肅等地最嚴(yán)重[5]。OIE 將本病列為B 類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病[6]。

哈密市2019 年家畜年末存欄數(shù)牛9.2 萬頭，羊85.03 萬只，傳統(tǒng)養(yǎng)殖模式仍占一定比重，動物疫病防治形勢依然嚴(yán)峻，同時，隨著哈密市畜牧業(yè)生產(chǎn)不斷轉(zhuǎn)型升級，養(yǎng)殖密度不斷增加，動物疫病風(fēng)險也隨之加大。為全面掌握哈密市家畜包蟲病感染情況，科學(xué)評估包蟲病流行趨勢以及高風(fēng)險區(qū)域的發(fā)病情況，及時杜絕疫情隱患，本研究通過對牛羊進(jìn)行剖檢、采用間接ELISA 試驗(yàn)對羊進(jìn)行包蟲病抗體水平檢測和應(yīng)用抗原ELISA 檢測犬糞，對全市包蟲病的感染情況進(jìn)行綜合評估與分析，為今后包蟲病的防控工作提供最直接的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019 年全市共剖檢牛羊1 390 頭只，檢測羊血清311 份，檢測犬糞342 份。

1.1.1 樣品制備

羊血清樣品的處理 將采集的羊血液樣品在3 000 r/min 條件下離心3～5 min，取血清2 mL 放入滅菌離心管中，-20 ℃保存待檢。

犬糞便樣品的處理 取約 1 g 糞便，置于 15 mL 離心管中，加入含 0. 3% Tween-20 的PBS 5 mL，充分混勻，置于冰水混合物中超聲3～4 次，經(jīng)3 000×g(離心半徑10 cm)離心10 min，取上清，置-20 ℃保存待檢。

1.2 試劑及儀器設(shè)備

1.2.1 包蟲病檢測試劑

羊棘球蚴(包蟲)病ELISA 抗體檢測試劑盒(批號為 20190308)和細(xì)粒棘球絳蟲犬糞抗原ELISA 檢測試劑盒(批號：20190320)均購自重慶澳龍生物制品有限公司。

1.2.2 儀器設(shè)備

高速冷凍離心機(jī)購自北京六一儀器廠；移液器為德國eqqendorf 公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為318MC 型全自動酶標(biāo)分析儀，購自上海京工儀器公司。

1.3 檢測方法及結(jié)果判定

1.3.1 檢測方法

按照羊棘球蚴(包蟲)病ELISA 抗體檢測試劑盒和細(xì)粒棘球絳蟲犬糞抗原ELISA 檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3.2 結(jié)果判定

羊棘球蚴(包蟲)病 ELISA 抗體檢測結(jié)果判定：標(biāo)準(zhǔn)陽性對照孔平均OD450 nm 值≥0. 60，標(biāo)準(zhǔn)陰性對照孔OD450 nm 值≤0. 30 試驗(yàn)成立; 檢測樣品OD450 nm 值＞0. 60 為抗體陽性， 檢測樣品OD450 nm值介于0. 30 與0. 60 之間為抗體弱陽性，檢測樣品OD450 nm 值≤0. 30 為抗體陰性。

細(xì)粒棘球絳蟲犬糞抗原ELISA 檢測結(jié)果判定： 樣品OD450 nm 值＞陰性對照OD450 nm 平均值×2.1的判定為陽性；樣品OD450 nm 值≤陰性對照OD450 nm 平均值×2.1 的判定為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛羊包蟲病感染情況

采用眼觀、觸摸、剖檢三種方式檢驗(yàn)家畜肝臟、肺臟包囊感染情況。全市共剖檢檢查屠宰場牛470 頭，陽性17 頭，陽性率3.62%，同比升高2.31%(1.31%)；剖檢羊920 只，陽性48 只，陽性率5.22%，同比升高2.48%(2.74%)。 伊州區(qū)剖檢 618 頭只，其中牛 232 頭，陽性 7 頭，陽性率 3.02%，同比升高 2.37%(0.65%)；羊386 只，陽性23 只，陽性率5.96%，同比升高3.72%(2.24%)。巴里坤縣剖檢468 頭只，其中牛138 頭，陽性9 頭，陽性率6.52%，同比升高2.14%(4.04%)；羊330 只，陽性19 只，陽性率5.76%，同比升高2.14%(3.62%)。 伊吾縣剖檢304 頭只，其中牛100 頭，陽性1 頭，陽性率1.00%，同比升高1%(0%)；羊204 只，陽性6 只，陽性率2.94%，同比降低0.45%(3.39%)(詳見表1)。

表1 牛羊包蟲病感染情況

2.2 羊血清抗體檢測情況

采用羊棘球蚴(包蟲)病 ELISA 方法檢測羊血清311 份。其中，伊州區(qū)涉及2 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、2 個行政村，共采集羊血清93 份，感染抗體陽性率為2.15%；巴里坤縣涉及5 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、5 個行政村，共采集羊血清170 份，感染抗體陽性率為4.71%； 伊吾縣涉及3 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、3 個行政村， 共采集羊血清48 份， 感染抗體陽性率為4.17%(見表 2)。

表2 羊血清抗體檢測情況

2.3 犬糞抗原ELISA 檢測情況

采用細(xì)粒棘球絳蟲犬糞抗原ELISA 檢測方法檢測犬糞342 份。 其中， 檢測伊州區(qū)涉及3 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、10個行政村，共采集犬糞樣品203 份，陽性率為0.99%；巴里坤縣涉及5 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、7 個行政村，共采集犬糞樣品94 份，陽性率為2.13%；伊吾縣涉及3 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、3 個行政村，共采集犬糞樣品45 份，陽性率為2.22%(見表3)。

表3 犬糞抗原ELISA 檢測情況

2.4 牛羊包蟲病調(diào)查結(jié)果分析

結(jié)果顯示(圖1)，與2018 年相比，2019 年全市牛羊包蟲病感染率整體呈上升趨勢，牛包蟲病感染率升高2.31 個百分點(diǎn)，羊包蟲病感染率升高2.48 個百分點(diǎn)，牛羊包蟲病的防控形勢依然很嚴(yán)峻，需進(jìn)一步加大防控力度。

剖檢調(diào)查結(jié)果顯示(圖2)，伊州區(qū)、巴里坤縣、伊吾縣家畜均存在包蟲病病例，羊感染率明顯高于牛，可能與羊舍飼程度低、放牧比例大有關(guān)。 伊州區(qū)和巴里坤縣羊包蟲病感染率高于伊吾縣，可能與伊州區(qū)、巴里坤縣羊放牧比例大、放牧周期長、牧羊犬使用廣泛有關(guān)。

圖1 牛羊包蟲病感染率

圖2 2019 年哈密市牛羊包蟲病感染情況

2.5 羊血清感染抗體檢測結(jié)果分析

羊棘球蚴間接ELISA 檢測結(jié)果顯示(圖3)，巴里坤縣、伊吾縣羊包蟲病感染抗體陽性率均高于伊州區(qū)，說明牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)感染包蟲病的風(fēng)險更大，這與牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)養(yǎng)殖方式、飼養(yǎng)犬類和野生動物狼、狐貍的活動相關(guān)。

2.6 犬糞抗原ELISA 檢測結(jié)果分析

犬糞抗原ELISA 檢測結(jié)果顯示(圖3)，犬糞抗原陽性率與羊包蟲病感染抗體陽性率呈正相關(guān)，巴里坤縣、伊吾縣犬糞抗原陽性率均高于伊州區(qū)，說明牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)感染包蟲病的風(fēng)險更大，提示與飼養(yǎng)犬類和野生動物狼、狐貍的活動相關(guān)。

3 討 論

圖3 包蟲病感染情況

此次調(diào)查共剖檢牛470 頭，陽性率3.62%，羊920 只，陽性率5.22%；檢測羊血清311 份，陽性率為3.11%；檢測犬糞342 份，陽性率為1.46%，與2018 年相比，2019 年全市牛羊包蟲病感染率整體呈上升趨勢，分析原因一是2019 年開始，哈密市對當(dāng)年新生羔羊包蟲病疫苗免疫和補(bǔ)免工作不到位，飼養(yǎng)管理工作不科學(xué)；二是牧區(qū)對于“犬犬投藥，月月驅(qū)蟲”的包蟲病防控原則貫徹不徹底，對偏遠(yuǎn)山區(qū)可能疏于防治；三是區(qū)縣部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)存在對包蟲病防控工作不夠重視、宣傳力度不足、對犬管理不嚴(yán)及防控經(jīng)費(fèi)不足等問題；四是近年來國家對野生動物的保護(hù)，導(dǎo)致狼、狐貍和旱獺等終末宿主大量繁殖出沒，排泄物污染的草場被牛羊啃食而感染。

本試驗(yàn)結(jié)果提示，哈密地區(qū)2019 年牛羊包蟲病的感染率相比2018 年都有所升高，牛羊包蟲病的防控形勢依然很嚴(yán)峻，必須盡快采取相應(yīng)的措施。

對犬定期進(jìn)行驅(qū)蟲，加強(qiáng)犬的管理，不讓犬吃生的家畜內(nèi)臟，做到“月月驅(qū)蟲，犬犬投藥”是有效控制包蟲病的措施[8]；切斷傳播途徑，減少養(yǎng)犬?dāng)?shù)量，牧區(qū)要少養(yǎng)犬，對犬糞進(jìn)行收集并深埋處理，防止棘球蚴絳蟲卵污染環(huán)境[9]；規(guī)范屠宰檢疫，禁止屠宰場買賣病變臟器，限制屠宰場養(yǎng)犬，做好監(jiān)督管理工作[10]；加大宣傳教育力度，在公共場所和農(nóng)牧區(qū)張貼防治包蟲病宣傳畫，使農(nóng)牧民及廣大居民知道包蟲病的生活史和傳播途徑及防治方法，防止感染；抓好培訓(xùn)工作，全面加強(qiáng)檢疫監(jiān)管，重點(diǎn)加強(qiáng)對牛、羊、犬養(yǎng)殖場(戶)開展包蟲病防控知識、防控技術(shù)等知識培訓(xùn)，有效提高哈密市包蟲病防治能力；預(yù)防包蟲病最有效的措施是接種疫苗，疫苗可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體抵抗包蟲的感染，可以有效切斷包蟲的傳播，從而達(dá)到防控包蟲病的目的[11]；應(yīng)用靈敏度高、特異性強(qiáng)的檢測方法對進(jìn)行包蟲病動態(tài)監(jiān)測，從而為包蟲病的預(yù)防和控制提供更加科學(xué)的依據(jù)。