盧紹佳，吳錫輝，楊曉燕，郭仲輝

（廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州511400）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）發(fā)病具有明顯的地域特征，是我國廣東、廣西、香港等南方地區(qū)常見惡性腫瘤,近年鼻咽癌位列廣東省腫瘤發(fā)病的前幾位[1]，尤其是男性患者需要重點(diǎn)防治的惡性腫瘤[2]。鼻咽癌病因尚不明確，且發(fā)病部位隱蔽，臨床癥狀和體征無明顯特異性，鼻咽癌的篩查、診斷一直是個(gè)難題。鼻咽癌的發(fā)生與EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）感染密切相關(guān)[3]。患者血清中產(chǎn)生的多種EB抗體是用來篩查和輔助診斷鼻咽癌患者常用的工具[4]。本研究使用病毒核抗原（EBNA1-IgA）、EB病毒衣殼抗原（VCA-IgA）、EB病毒早期抗原（VEA-IgA）商品化ELISA試劑盒篩查和輔助診斷番禺地區(qū)鼻咽癌患者，旨在探討其輔助診斷鼻咽癌的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 血清（漿）標(biāo)本 收集2016年7月至2017年7月在廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院就診并已確診的初診鼻咽癌54例。鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合：由醫(yī)生進(jìn)行臨床檢查對(duì)鼻咽部的可疑病灶取活體組織,以病理診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。其中男性37例,女性17例，患者平均年齡48.37±12.59歲。另選取100例來源于本院體檢中心的健康成人作為對(duì)照組，女性50例，男性50例，平均年齡38.15±8.78歲。血清樣本無溶血、脂血、黃疸等異常。

1.2 主要試劑及儀器 EBNA1-IgA和VCA-IgA ELISA檢測(cè)試劑盒購自中山生物工程有限公司VCA-IgA試劑批號(hào)為201312050。EBNA1-IgA試劑批號(hào)為201404011-2。VEA-IgA檢測(cè)試劑盒購自歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司,試劑批號(hào)為E140 307BD。自動(dòng)酶標(biāo)儀ELX800，型號(hào)為XMTD-8222。全自動(dòng)快速立式洗板機(jī)購自鄭州基波新科技有限公司，型號(hào)為JB-1。恒溫水浴箱購自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)為DK-600S。

1.3 檢測(cè)方法與結(jié)果判讀 抽取受試者外周靜脈血3ml，3500r/min，離心5min。分離出血清，置于-20℃冰箱待測(cè)。操作步驟按照各個(gè)試劑盒的說明書進(jìn)行操作。取包備好對(duì)應(yīng)抗原抗體的酶標(biāo)板加樣，設(shè)空白、陰、陽性對(duì)照、質(zhì)控各1孔,樣本孔內(nèi)EBN A1-IgA和VCA-IgA加樣本稀釋液100μl和待測(cè)樣本5μl，混勻置37℃溫箱溫育30min；VEA-IgA用樣本緩沖液1:101稀釋后每孔加100μl,常溫下反應(yīng)30min。溫浴完成洗板后每孔加各個(gè)試劑盒對(duì)應(yīng)酶結(jié)合物100μl，溫育30min（核抗原20分鐘）,洗板。EBNA1-IgA和VCA-IgA加底物A、B各50μl每孔，37℃避光分別10min和15min顯色,加終止液50μl。VEA-IgA加底物100μl每孔，37℃避光顯色15min,加終止液100μl。酶標(biāo)儀選擇450nm波長(zhǎng),空白孔校零，終止后30min內(nèi)測(cè)取各孔OD值。酶標(biāo)儀OD值校正判斷，陽性:標(biāo)本S/CO值＞1.0；陰性:標(biāo)本S/CO值≤1.0。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組受檢者血清中EBNA1-IgA陽性率。2組陽性率分別為81.48%、6.00%。其χ2=91.16，P＜0.05，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表1。

表1 不同人群感染EBNA1-IgA檢測(cè)陽性率

2.2 2組受檢者血清中EB病毒VCA-IgA檢測(cè)陽性率。分別為74.07%、7.00%,其χ2=74.40，P＜0.05,2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表2。

表2 不同人群感染VCA-IgA檢測(cè)陽性率

2.3 2組受檢者血清中EB病毒VEA-IgA檢測(cè)陽性率，分別為55.56%、3.00%，同時(shí)所得出的χ2=57.52，P＜0.05，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表3。

表3 不同人群感染VEA-IgA檢測(cè)陽性率

2.4 2組受檢者血清中聯(lián)合三項(xiàng)檢測(cè)，敏感度和特異度分別是90.74%和98.00%,其χ2=124.67,P＜0.05，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表4。

2.5 2組受檢者血清中單項(xiàng)抗體檢測(cè)與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)比較 從表5可見，單獨(dú)應(yīng)用一項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)鼻咽癌患者時(shí)，以NA1-IgA的敏感度最高，VEA-IgA的特異度最高。EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯(lián)合檢測(cè)在敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值和陽性預(yù)測(cè)值比這三項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)時(shí)有明顯提高。

表4 不同人群感染抗體3項(xiàng)檢測(cè)陽性率

表5 抗體三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)和單一抗體檢測(cè)的比較（%）

3 討論

鼻咽癌是發(fā)生于鼻咽粘膜的上皮性惡性腫瘤，目前的研究認(rèn)為，環(huán)境與飲食、遺傳因素、EB病毒感染都與鼻咽癌的發(fā)生密切相關(guān)。鼻咽癌具有明顯的區(qū)域性和人種傾向性,中國南部發(fā)病率高[5]。鼻咽癌早期基本無癥狀，出現(xiàn)癥狀就醫(yī)時(shí)基本已到晚期。因此，高發(fā)區(qū)人群中的例行臨床篩查意義重大。EB病毒在鼻咽癌中是以潛伏期感染為主，恒定地表達(dá)潛伏期抗原。EBNA1是EB病毒的潛伏期的抗原，是病毒潛伏感染狀態(tài)必需的蛋白，在細(xì)胞轉(zhuǎn)化和維持狀態(tài)中起重要作用。目前在國內(nèi)外逐漸推廣應(yīng)用檢測(cè)EB-NAl抗原抗體作為鼻咽癌的血清學(xué)指標(biāo)[6]。VCA為晚期合成的結(jié)構(gòu)蛋白，存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，可在宿主體內(nèi)終生存在，有助于早期診斷鼻咽癌，并提示凡抗體陽性者均應(yīng)定期隨訪觀察VCA，具有很高靈敏度和較好的特異性[7]。VEA提示EBV增殖活躍，是細(xì)胞進(jìn)入溶解周期的信號(hào)，出現(xiàn)于EB感染的早期。VEAIgA由于靈敏度稍遜，限制了EA-IgA在鼻咽癌初篩中的應(yīng)用，但是由于其具有極高的疾病特異性，仍然是VCA-IgA的很好的補(bǔ)充[8]。

與以往研究比較，程偉民[9]等測(cè)EBNA1在診斷NPC的敏感度和特異度均可達(dá)95%,而近5年內(nèi)有研究顯示NA1的靈敏度和特異度都有波動(dòng)，如王春陽等[10]研究結(jié)果提示靈敏度和特異度分別為78.56%、77.98%，杜滿興[11]等研究結(jié)果顯示為靈敏度88.34%、特異度96.37%。VCA-IgA和EA-IgA與NA1相似,靈敏度和特異度亦有波動(dòng)，楊雪娟[12]等測(cè)其在診斷NPC的靈敏度和特異性度90.0%、89.5%。近5年有研究提示VCA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度分別為35.8%～81.67%、59.5%～86.67%[13,14]；羅耀凌等[15]檢測(cè)EA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度達(dá)75.0%、94.7%，進(jìn)5年內(nèi)研究提示EA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度分別為48.33%～68.40%、47.6%～91.67%[13,14]。本研究中EBNAl診斷NPC的靈敏度和特異度分別為81.48%、94%。VCA-IgA為74.07%、93%,EA-IgA為55.56%、97%，與以往研究比較大致相符。此3項(xiàng)中EBNAl靈敏度最高，而EA-IgA最低，3項(xiàng)特異度都達(dá)到了90%以上，說明EB病毒VCA-IgA、NAI-IgA、VEA-IgA作為鼻咽癌的血清學(xué)指標(biāo)，在診斷鼻咽癌方面有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。上訴結(jié)果中3個(gè)項(xiàng)目敏感度和特異度的差異,尤其是敏感度的差異可能是由于不同廠家商品化的試劑盒制作不同、受檢人群限制或是檢測(cè)人員之間的差異等多因素導(dǎo)致。如何提高此3項(xiàng)檢測(cè)質(zhì)量，因具體分析本實(shí)驗(yàn)室影響檢測(cè)的各個(gè)因素和環(huán)節(jié)。

鑒于上訴3項(xiàng)單一的抗體檢測(cè)對(duì)NPC靈敏度和特異度波動(dòng)、偏低，抗體的聯(lián)合檢測(cè)是目前研究NPC診斷的主要發(fā)展方向。目前國內(nèi)外有多種EB抗體聯(lián)合檢測(cè)研究多項(xiàng)抗體對(duì)NPC的診斷價(jià)值，而此3項(xiàng)在診斷鼻咽癌方面有比較廣泛的應(yīng)用，均提示聯(lián)合檢測(cè)可提高其診斷的靈敏度和特異度。以往研究少有研究VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯(lián)合檢測(cè)診斷鼻咽癌效能，本研究評(píng)價(jià)3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌診斷的價(jià)值。結(jié)果顯示3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，靈敏度可達(dá)90.74%，準(zhǔn)確度提高到84.42%，而特異性98%為最佳，說明聯(lián)合檢測(cè)有互補(bǔ)作用，能提高其診斷價(jià)值。本研究存在一定的局限性,尚未對(duì)其中兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)鼻咽癌的靈敏度和特異度進(jìn)行計(jì)算,也未對(duì)不同鼻咽癌分期患者血清抗體進(jìn)行分析。

綜上所述,EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯(lián)合檢測(cè)在靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值和陽性預(yù)測(cè)值比這三項(xiàng)抗體單獨(dú)檢測(cè)時(shí)有提高。因此，可在臨床工作中推薦使用EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯(lián)合檢測(cè)，以更有效的輔助診斷鼻咽癌。