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1.前言

單氰胺是重要的農(nóng)藥中間體，可以制備殺菌劑多菌靈、苯菌靈、甲基嘧菌胺、嘧菌胺，殺蟲劑抗蚜威、嘧啶氧磷，除草劑綠磺隆、甲磺隆、甲嘧磺隆、醚苯磺隆、芐嘧磺隆、吡嘧磺隆、環(huán)嗪酮等。在醫(yī)藥工業(yè)用作生產(chǎn)鹽酸阿糖胞苷的原料，在染料工業(yè)用于生產(chǎn)中間體3-氨基-5-羥基-1,2,4-三氮唑。此外，還用作有機(jī)合成及塑料的原料，生產(chǎn)氰脲酰胺、雙氰胺、氰氨基甲酸甲酯等。液體單氰胺用于工業(yè)原料、醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體、農(nóng)業(yè)肥料、植物調(diào)節(jié)劑、食物添加劑等。針對(duì)目前單氰胺通過滴定的方法檢測(cè)，不能很好的檢測(cè)出單氰胺中雜質(zhì)的含量，且在做單氰胺殘留的時(shí)候，無法通過滴定的方法進(jìn)行檢測(cè)。又由于單氰胺分子結(jié)構(gòu)簡單無發(fā)色基團(tuán)，且呈堿性易溶于水，對(duì)于色譜分析，響應(yīng)很低，且出峰時(shí)間快，無法通過普通的色譜進(jìn)行檢測(cè)。故開發(fā)本方法是為了讓單氰胺與丹磺酰氯進(jìn)行柱前衍生后，進(jìn)行高效液相色譜分析，外標(biāo)法定量。

本文分別對(duì)苯磺酰氯和丹磺酰氯進(jìn)行衍生實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)苯磺酰氯與單氰胺不反應(yīng)，并對(duì)單氰胺和丹磺酰氯在不同的緩沖溶液中和反應(yīng)溫度下的效果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在0.2M的碳酸鈉和碳酸氫鈉緩沖體系下，50℃衍生1h效果最好。

2.實(shí)驗(yàn)部分

(1)試劑和設(shè)備

試劑：單氰胺標(biāo)樣（含量50%水溶液）；磷酸（分析純）；丹磺酰氯（分析純）；乙腈（色譜級(jí)）；無水碳酸鈉（分析純）；無水碳酸氫鈉（分析純）；丙酮（分析純）。

設(shè)備：高效液相色譜儀（安捷倫1260，DAD檢測(cè)器，配套相關(guān)自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）；BDS柱250mm×4.6mm，5μm；水浴鍋：控溫50℃。

(2)檢測(cè)方法

①色譜條件的配置。色譜柱：BDS柱，250mm×4.6mm，5μm；柱溫：室溫；流動(dòng)相：乙腈（A）：pH=3磷酸水溶液（B）=60:40；流速：1.000mL/min；檢測(cè)波長210nm，帶寬4nm；參比波長380nm，帶寬80nm；進(jìn)樣量：10μL。

②緩沖溶液的配置。0.2M碳酸鈉：稱取0.53g碳酸鈉用水溶解到25mL容量瓶中，用水定容到刻度；0.2M碳酸氫鈉：稱取1.68g碳酸氫鈉用水溶解到100mL容量瓶中，用水定容到刻度。使用液：4mL（0.2M碳酸鈉）+46mL（0.2M碳酸氫鈉）用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH=10.5。

③衍生液的配置。稱取0.5g丹磺酰氯用丙酮溶解到100mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度。

④標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置。分別稱取相應(yīng)的單氰胺含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品，用乙腈配制成濃度分別是10mg/L、50mg/L、100mg/L、1000mg/L和2000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)。

⑤樣品處理。稱取約含0.1-0.2g單氰胺的樣品于100mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容到刻度，搖勻，待測(cè)。

⑥衍生步驟。吸取100μL樣品溶液到10mL容量瓶中，加入1.0mL緩沖溶液使用液，充分搖勻后，加入1.0mL衍生液，充分搖勻后，蓋上容量瓶塞，放入50℃水浴鍋中，反應(yīng)1h。反應(yīng)完成后，取出容量瓶冷卻至室溫后，用乙腈定容至刻度，搖勻后，用0.45μm有機(jī)相濾膜過濾后，上機(jī)測(cè)試。樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液均使用此方法衍生。

⑦結(jié)果計(jì)算。單氰胺的衍生物濃度與峰面積成線性關(guān)系，通過各個(gè)濃度點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品的峰面積通過校準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量計(jì)算。

3.結(jié)果討論

(1)衍生物的選擇

由于單氰胺分子比較簡單，一個(gè)氨基和氰基結(jié)合，因氨基容易與酰氯反應(yīng)，在選擇衍生物時(shí)，要考慮能夠反應(yīng)全，且反應(yīng)后的物質(zhì)具有較強(qiáng)吸光度的基團(tuán)，這樣才能夠在液相色譜中有強(qiáng)的響應(yīng)度，具有低的檢出限。首先選用苯磺酰氯，但不管怎么改變緩沖溶液的配比和濃度，以及衍生的時(shí)間和苯磺酰氯的濃度，單氰胺均不能與苯磺酰氯形成穩(wěn)定的衍生產(chǎn)物，無法使用液相色譜檢測(cè)；使用丹磺酰氯進(jìn)行衍生，分別配置1.0g/L、5.0g/L和10.0g/L的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)?shù)せ酋Ｂ葷舛葹?.0g/L時(shí)最佳。所測(cè)數(shù)據(jù)見表1。

表1 丹磺酰氯濃度與峰面積關(guān)系

(2)pH值的影響

緩沖溶液pH值對(duì)衍生影響較大，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)緩沖溶液pH值為10.5時(shí)，衍生效果最佳。

(3)緩沖溶液濃度的影響

對(duì)于緩沖溶液選擇碳酸鈉和碳酸氫鈉體系，分別進(jìn)行不同濃度配比的緩沖溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)驗(yàn)最終確定0.2M的緩沖體積最經(jīng)濟(jì)可靠；并對(duì)0.2M碳酸鈉溶液和0.2M碳酸氫鈉溶液配比進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，最終確定Na2CO3/NaHCO3=4:46（v/v）緩沖效果最佳。樣品的典型色譜圖見圖1。

圖1

4.線性關(guān)系

分別稱取相應(yīng)的單氰胺含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品，用乙腈配制成濃度分別是10mg/L、50mg/L、100mg/L、1000mg/L和2000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)。在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣分析，測(cè)定單氰胺衍生物的峰面積。結(jié)果表明，其峰面積積分與濃度成良好的線性關(guān)系。所測(cè)數(shù)據(jù)在表2中列出，其回歸方程為：y=1.98321x+46.12993，r=0.99994，式中：y為單氰胺的峰面積，x為單氰胺的濃度。

表2 單氰胺濃度與峰面積數(shù)據(jù)

5.精密度測(cè)定

按上述色譜條件，對(duì)同一樣品進(jìn)行6次獨(dú)立重復(fù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 方法精密度數(shù)據(jù)

由此可知，單氰胺衍生物的標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.13%和0.17%，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，符合其規(guī)定的要求。

6.準(zhǔn)確度的測(cè)定

方法準(zhǔn)確度采用加標(biāo)計(jì)算回收率的方式測(cè)定。對(duì)樣品加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上面的色譜條件和衍生化方式，進(jìn)樣分析，然后計(jì)算各自的回收率，數(shù)據(jù)見表4。

表4 單氰胺衍生化加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)

由上面結(jié)果可知，單氰胺的回收率在96.6%～102.0%之間，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，符合其規(guī)定的要求。

7.結(jié)論

通過線性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度的測(cè)定，證明單氰胺采用柱前衍生，高效液相色譜法分析，方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，適合測(cè)定低含量和合成工藝中的單氰胺殘留。